Summary
في هذا البروتوكول ، تم إجراء تطعيم مجازة وريد الخنزير الجديد من خلال شق صغير في جدار الصدر الأيسر دون المجازة القلبية الرئوية. تم إجراء دراسة علم الأمراض بعد العملية الجراحية ، والتي أظهرت سماكة intimal.
Abstract
مرض الكسب غير المشروع الوريدي (VGD) هو السبب الرئيسي لفشل ترقيع مجازة الشريان التاجي (CABG). هناك حاجة إلى نماذج حيوانية كبيرة من CABG-VGD للتحقيق في آليات المرض وتطوير الاستراتيجيات العلاجية.
لإجراء الجراحة ، ندخل غرفة القلب من خلال الفضاء الوربي الثالث ونقوم بتشريح الوريد الثديي الداخلي بعناية ونغمره في محلول ملحي طبيعي. ثم يتم علاج الشريان التاجي الرئيسي الأيمن لنقص التروية. يتم شق الوعاء المستهدف ، ويتم وضع سدادة تحويلة ، ويتم مفاغرة الطرف البعيد من الوريد الكسب غير المشروع. يتم حظر الشريان الأورطي الصاعد جزئيا ، ويتم مفاغرة الطرف القريب من الوريد الكسب غير المشروع بعد الانثقاب. يتم فحص الوريد الكسب غير المشروع بحثا عن المباح ، ويتم ربط الشريان التاجي الأيمن القريب.
يتم إجراء جراحة تحويل مسار الشريان التاجي في الخنازير الصغيرة لحصاد الوريد الثديي الداخلي الأيسر لاستخدامه كطعم وعائي. تستخدم اختبارات المصل البيوكيميائية لتقييم الحالة الفسيولوجية للحيوانات بعد الجراحة. يظهر الفحص بالموجات فوق الصوتية أن الطرف القريب والأوسط والبعيد لوعاء الكسب غير المشروع لا يعوقه. في النموذج الجراحي ، لوحظ تدفق الدم المضطرب في الكسب غير المشروع عند الفحص النسيجي بعد جراحة تحويل مسار الشريان التاجي ، ولوحظ تضيق الكسب غير المشروع الوريدي المرتبط بتضخم الدم الداخلي في الكسب غير المشروع. توفر الدراسة هنا إجراءات جراحية مفصلة لإنشاء نموذج VGD الناجم عن تحويل مسار الشريان التاجي القابل للتكرار.
Introduction
على الرغم من انخفاض معدل وفيات أمراض القلب التاجية بشكل كبير في السنوات الأخيرة ، إلا أن نصف البالغين في منتصف العمر في الولايات المتحدة يصابون بأعراض مرتبطة بالقلب الإقفاري كل عام ، ويموت ثلث كبار السن بسبب أمراض القلب التاجية1. تطعيم مجازة الشريان التاجي (CABG) هو طريقة جراحية فعالة لتحسين نقص تروية عضلة القلب ، والأهم من ذلك ، أنها طريقة جراحية لا يمكن الاستغناء عنها لعلاج مرض الشريان التاجي متعدد الأوعية2. ومع ذلك ، بمرور الوقت ، تتطور الطعوم الوعائية إلى التهاب وتضخم داخلي وتصلب الشرايين التدريجي ، والذي من المعروف أنه يؤدي إلى فشل ترقيع الوريد أو مرض ترقيع الوريد (VGD) 3. في المرضى بعد تحويل مسار الشريان التاجي ، إذا حدث عودة التضيق ، يمكن استبدال الأوعية الدموية المريضة فقط في بعض الحالات2. المرضى الأكبر سنا والأمراض المصاحبة المضافة تجعل إعادة تطعيم مجازة الشريان التاجي أمرا صعبا للغاية. يعد تأخير أو السيطرة على المشاكل المرضية المرتبطة بالأوعية الدموية المطعمة مشكلة ملحة يجب حلها. هناك حاجة إلى نماذج حيوانية كبيرة من CABG-VGD للتحقيق في آليات المرض وتطوير الاستراتيجيات العلاجية. نجح الباحثون في إنشاء نماذج VGD الحيوانية في الحيوانات الصغيرة والكبيرة مثل الفئران4 والجرذان5 والأرانب6 والخنازير7. بالمقارنة مع الحيوانات الصغيرة ، فإن الحيوانات الكبيرة مثل الخنازير لها هياكل تشريحية وخصائص فسيولوجية مشابهة للبشر ولها عمر أطول 8,9. وبالتالي ، فإن الحيوانات الكبيرة أكثر ملاءمة لاستكشاف التغيرات المرضية طويلة الأجل في مرض الكسب غير المشروع الوريدي وللاختبار قبل السريري للأدوية أو الأجهزة. لقد طبقنا نحن وفريقنا المتعاون بنجاح التقنيات الجراحية لإنشاء نموذج قصور القلب الخنازير ووصفنا التغيرات المرضية القلبية في هذا النموذج10.
تم توحيد جراحة تحويل مسار الشريان التاجي في الممارسة السريرية ، ولكن عندما يتم تطبيقها على إنشاء نماذج حيوانية VGD ، فإن الاختلافات بين الأنواع ، واقتناء المعدات والمرافق الحيوانية ، والعمليات الجراحية للحيوانات ، وتغذية الحيوانات والتمريض تشكل تحديات كبيرة للباحثين. كما هو الحال في الممارسة السريرية ، فإن مناهج جراحة تحويل مسار الشريان التاجي المستخدمة لإنشاء نماذج حيوانية VGD تشمل بضع القص في خط الوسط11 وبضع الصدر الجانبي الأيسر12. يستخدم بضع القص في خط الوسط بشكل أكثر شيوعا13,14. ومع ذلك ، فإن هذا النهج ينطوي على مخاطر عالية لكل من البشر والحيوانات. في الدراسة التي أبلغ عنها ثانكام وآخرون ، توفي اثنان من الخنازير الستة المستخدمة في النمذجة أثناء الجراحة15. ارتفاع معدل وفيات النموذج يزيد من تكاليف الدراسة ويؤثر على دقة النتائج. أظهرت دراسة في وقت سابق أن شق جدار الصدر الأيسر كان ممكنا لإنشاء VGD الناجم عن تحويل مسار الشريان التاجي في الخنازير11. هنا ، تهدف هذه الدراسة إلى وصف بروتوكول خطوة بخطوة لإنشاء جراحة قابلة للتكرار لنموذج VGD الناجم عن تحويل مسار الشريان التاجي في الخنازير الصغيرة وتقييم النمط الظاهري لهذا النموذج. تم تصميم البروتوكول التجريبي بشكل مشترك من قبل فرق جراحة القلب والتخدير. تم تحديد النهج الجراحي للمساحة الوربية الثالثة اليسرى وفقا لجثث الخنازير الصغيرة الأخرى في المختبر قبل الجراحة ، وتم إجراء طريقة التخدير وفقا للطريقة المستخدمة في المركز16. تم إجراء اختبارات الكيمياء الحيوية في الدم والفحص بالموجات فوق الصوتية وفحص الأنسجة لتقييم النماذج الحيوانية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت الموافقة على إجراءات رعاية واستخدام المختبر من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات التابعة لمعهد مراقبة المختبر في قوانغدونغ. أجريت جميع التجارب وفقا لدليل رعاية واستخدام المختبر (الطبعة 8 ، 2011 ، المجلس القومي للبحوث ، الولايات المتحدة الأمريكية). يوضح الشكل 1 الإجراء الجراحي.
1. إعداد الحيوانات قبل الجراحة
- قسم عشوائيا 10 خنازير صغيرة تبلغ من العمر 3 أشهر تزن 30-35 كجم إلى مجموعة وهمية (ن = 5) ومجموعة VGD (ن = 5).
- تقييم الظروف الصحية قبل الجراحة وبعد العملية الجراحية للخنازير باستخدام مؤشر كتلة الجسم (BMI). احسب مؤشر كتلة الجسم على النحو التالي:
مؤشر كتلة الجسم = وزن الجسم (كجم) / (طول الجسم [سم] × طول الجسم [سم])
ملاحظة: يتم قياس طول الجسم من أنف الخنزير إلى قاعدة الذيل. - صوم الحيوانات لمدة 12 ساعة قبل الجراحة لتجنب الشفط بعد التخدير. قم بإعداد أجهزة التخدير والأدوات الجراحية ، بما في ذلك آلة التخدير ، والغاز ، وأدوية التخدير ، وخط أنابيب التخدير ، ومنظار الحنجرة الخاص ، والأدوات الجراحية ، ومثبت الضلع ، والخيوط الجراحية ، والغدة الدرقية ، والملقط الجراحي ، إلخ. تعقيم جميع الأدوات لاستخدامها في الجراحة.
2. إعداد الحيوانات للجراحة
- وزن الحيوانات وحساب جرعة التخدير. يتم تطبيق الخليط المخدر المكون من 2 ملغ/ كغ من 1:1 تيلتامين وزولازيبام، 0.2 ملغ/كغ ديازيبام، 0.02 ملغ/كغ أتروبين17. استخدم الفنتانيل (50 مجم / كجم) لتخفيف الألم أثناء العملية30.
- تأكد من تحقيق مستوى مخدر مناسب وأدخل قسطرة وريدية ساكنة (20G) في وريد الأذن الهامشي لإنشاء وصول الأذن. نقل الخنزير على طاولة العمليات ووضعه في وضع ضعيف. شل حركة الأطراف بالضمادات وارفع الرأس بستارة معقمة.
ملاحظة: تمت مراقبة حالة التخدير عن طريق التثبيت المركزي لمقلة العين ، والحدقة ، وفقدان منعكس الحدقة ، وفقدان منعكس الألم. تم الحفاظ على معدل ضربات القلب وضغط الدم عند مستوى أقل من خط الأساس. يجب على الجراح مراقبة HR و BP والمعلمات الأخرى تحت الشلل وزيادة جرعة التخدير إذا زادت الموارد البشرية > 20٪ فوق خط الأساس. - فضح لسان المزمار والمزمار باستخدام منظار الحنجرة البيطري. إجراء التنبيب الرغامي مع أنبوب 7.0-7.5Fr وتوصيله إلى دائرة التنفس التخدير.
ملاحظة: يستخدم جهاز التنفس الصناعي للتهوية المستمرة بالضغط الإيجابي مع حجم المد والجزر 280 مل ، ونسبة الشهيق / الزفير 1: 2 ، ومعدل التنفس 20 مرة / دقيقة ، وضغط الزفير النهائي الإيجابي (5 سم H2O). - حقن بروميد الفيكورونيوم عن طريق الوريد (0.1 ملغم / كغم) لإرخاء العضلات أثناء العمليات الجراحية واستخدام 2٪ إيزوفلوران للحفاظ على التخدير بمعدل تنفس 16-20 نبضة في الدقيقة وحجم المد والجزر 10 مل / كغ.
ملاحظة: يتم إعطاء Vecuronium لضمان عمق كاف للتخدير في الحيوانات المشلولة ، خاصة وأن جرعة الدواء التعريفي والإيزوفلوران في الطرف الأدنى من الموصى بها. - استخدم مرهم الطبيب البيطري على عيون الخنزير لمنع الجفاف أثناء التخدير. استخدم البطانيات الكهربائية للحفاظ على درجة حرارة جسم الخنزير عند 38 درجة مئوية ± 5 درجات مئوية.
- استخدم مخطط كهربية القلب لمراقبة معدل ضربات القلب ومستويات الأكسجين في الدم ودرجة حرارة الجسم.
3. العمليات الجراحية
- حلق جدار الصدر الأيسر وتطبيق ثلاث جولات متناوبة من 0.7 ٪ من اليود و 75 ٪ من الكحول لإعداد المنطقة الجراحية بشكل معقم حتى زاوية الفك السفلي الأيسر ، وصولا إلى الحبل السري ، واليسار إلى الخط الإبطي الخلفي ، واليمين إلى الجبهة الإبطية. ضع ستارة جراحية معقمة حول المنطقة الجراحية.
- قم بعمل شق عرضي 7-10 سم بسكين كهربائي في الفضاء الوربي الأيسر الثالث وافصل الأنسجة تحت الجلد طبقة تلو الأخرى (الشكل 2 أ). قم بإزالة جزء 5-6 سم من الضلع الثالث بمقص عظمي وفضح الوريد الثديي الداخلي بواسطة ضامد بعد تعريض المفصل الضلعي القصي الثالث (الشكل 2 ب).
- حدد موقع الوريد الثديي الداخلي جنبا إلى جنب مع الشريان الثديي الداخلي الأيسر على الجانب الأيسر من القص. إجراء تشريح حاد للوريد الثديي الداخلي مع ملقط الأوعية الدموية.
- أداء الارقاء عن طريق التخثير الكهربائي لفروع الوريد الثديي الداخلي الأيسر بسكين كهربائي. إذا كان الإرقاء غير مكتمل ، فاستخدم ربط خيوط القطن للإرقاء. ربط طرفي الوريد ووضع علامة عليهما أثناء حصاده (الشكل 2 ج).
- تحضير محلول ملحي عادي للهيبارين بإضافة 2 مل من محلول الهيبارين الصوديوم و 98 مل من محلول ملحي عادي. بعد إزالة الوريد ، قم بحقن محلول ملحي طبيعي من الهيبارين في الوريد للمعالجة المسبقة (الشكل 2 د). ثم ضع الوريد في محلول ملحي طبيعي واحتفظ به للنسخ الاحتياطي.
- قم بعمل شق مماثل كما هو موضح أعلاه وقم بإزالة الوريد الثديي الداخلي في المجموعة الوهمية. افتح التامور ، ثم أغلق جدار الصدر في المجموعة الوهمية. استخدم الوريد الثديي الداخلي للمجموعة الوهمية للسيطرة المرضية دون تطعيم مجازة الشريان التاجي.
- قم بعمل شق ~ 7 سم بسكين كهربائي على التامور لفضح جذع الشريان التاجي الأيمن. تعليق التامور وخياطة على الجلد على الجانب المماثل مع الغرز الجراحية 1-0 (الشكل 2E). افصل جذع الشريان التاجي الأيمن عن الأنسجة المحيطة (الشكل 2E).
- تجاوز الشريط المانع تحت الطرف القريب من الشريان التاجي الأيمن المعزول بالقرب من الشريان الأورطي بخطاف سلكي وعالج عضلة القلب بثلاث دورات من نقص التروية لمدة دقيقتين و 5 دقائق من إعادة التروية عن طريق شد وتخفيف الشريط المانع (الشكل 2F). راقب النشاط الكهربائي للقلب باستخدام جهاز تخطيط كهربية القلب أثناء التكييف المسبق لنقص التروية / إعادة التروية (الشكل 2G).
ملاحظة: عندما يتم حظر الشريان التاجي الأيمن ، يظهر مخطط كهربية القلب زيادة في معدل ضربات القلب وارتفاع الجزء ST. - شد الرباط لمنع تدفق الدم التاجي الأيمن. قطع النخاب الذي يغطي الأوعية الدموية. كشف جدار الشريان التاجي ، وقطع طوليا مع طرف شفرة جراحية ضد مركز الجدار الأمامي للأوعية الدموية.
- بعد قطع التجويف ، قم بتكبير الشق بالمقص وضع تحويلة تاجية. أدخل أحد طرفي التحويلة بملف في الشريان التاجي البعيد من خلال التمزق. قم بتحويل الدم في الشرايين التاجية إلى التحويلة التاجية المجوفة لضمان مجال جراحي واضح (الشكل 2H).
- قم بإجراء خياطة مستمرة من طرف إلى جانب بين الوريد الثديي الداخلي والجذع التاجي الأيمن باستخدام خياطة البولي بروبلين 7-0 (الشكل 2I). في منتصف الشريان الأورطي الصاعد ، اسد الجدار الأمامي الجانبي الأيسر للشريان الأورطي الصاعد بمشبك شبه انسداد.
- استخدم شفرة جراحية لعمل شق صغير في جدار الأبهر حيث تم قطع adventitia ، وأدخل نهاية رأس العمود المنزلق في نهاية رأس الثقب في تجويف الأبهر من خلال هذا الشق ، واقبض العمود المنزلق للخارج ، وقطع السكين الدائري فوقه قطعة من جدار الشرايين. يبلغ قطر كتلة الأنسجة المقطوعة بواسطة الثقب حوالي 3 مم (الشكل 2J).
- اسحب التحويلة. قم بإجراء خياطة مستمرة من طرف إلى جانب بين الوريد الثديي الداخلي وجدار الأبهر باستخدام خياطة البولي بروبلين 6-0 (الشكل 2K). افتح مشبك شبه الانسداد.
- سجل التدفق الجانبي لجذع الشريان التاجي الأيمن القريب من موقع المفاغرة باستخدام الموجات فوق الصوتية. راقب النشاط الكهربائي للقلب باستخدام مخطط كهربية القلب (الشكل 2L).
- أدخل أنبوب تصريف مؤقت (Fr: 16) في تجويف الصدر للسماح بتصريف الدم والسوائل. قم بخياطة شق التامور باستخدام خيط قطني 1-0 وأغلق طبقة الصدر بطبقة (من الداخل إلى الخارج: طبقة غشاء الجنب ، طبقة العضلات ، طبقة الأنسجة تحت الجلد ، طبقة الجلد) أثناء وضع مسحوق البنسلين (حوالي 0.5 جم) على كل طبقة. قم بإزالة أنبوب التصريف بعد خياطة شق الجلد باستخدام خيط قطني 1-0.
4. رعاية ما بعد الجراحة
- قم بإزالة الأنبوب الرغامي بعد عودة الحيوانات إلى التنفس التلقائي. يجب على طبيب التخدير تقييم العناصر الحيوية للحيوان (على سبيل المثال ، معدل التنفس ، ومعدل ضربات القلب ، وتشبع الأكسجين ، وما إلى ذلك) وإزالة تخطيط القلب بعد استيقاظ الحيوانات والعودة إلى النشاط التلقائي. أرسل الحيوانات مرة أخرى إلى غرفة التغذية وضع الحيوانات الزائفة في حظيرة أخرى في غرفة التكاثر. حافظ على دفء الحيوانات ببطانية كهربائية. مراقبة الحيوانات كل ساعة بعد الجراحة (على الأقل 4 مرات).
- إطعام الحيوان في اليوم التالي للجراحة. أضف الأسبرين (200 مجم) 2x يوميا لمدة 7 أيام إلى علف الحيوان لمنع تجلط الدم بعد الجراحة وتقليل آلام الجرح.
ملاحظة: تجنب إطعام الحيوانات في يوم الجراحة لمنع الشفط. - تطبيق الحيوان بالحقن العضلي للبنسلين 1x يوميا لمدة 7 أيام متتالية لمنع العدوى بعد الجراحة (14000 وحدة لكل كيلوغرام).
5. الفحص بالموجات فوق الصوتية
- بعد جراحة تحويل مسار الشريان التاجي ، استخدم غلاف مسبار معقم بالموجات فوق الصوتية للف مسبار الصفيف الخطي عالي التردد. ضع المسبار على سطح الكسب غير المشروع الوريدي.
- اعرض الخطوط العريضة للكسب غير المشروع في وضع الموجات فوق الصوتية ثنائي الأبعاد ، ثم انتقل إلى وضع دوبلر الملون للكشف عن تدفق الدم في الكسب غير المشروع.
6. جمع أنسجة الكسب غير المشروع الوريدي
- اجمع 10 مل من عينة الدم من الدائرة الوريدية لوريد الأذن لإجراء الاختبارات الكيميائية الحيوية. (الجدول 1). أجهزة الطرد المركزي عينة الدم عند 1000 × غرام لمدة 5 دقائق وإجراء اختبارات كيميائية حيوية باستخدام محلل كيميائي حيوي أوتوماتيكي.
- تخدير الحيوان كما هو موضح سابقا. عند التأكد من عمق التخدير، يتم حقن 10٪ كلوريد البوتاسيوم 0.5 مل/كغ من وزن الجسم من الوريد الهامشي للأذن أو الوريد الأمامي. بعد ذلك ، قم بعمل شق قصي متوسط 10 سم بسكين كهربائي لحصاد الكسب غير المشروع الوريدي بعد 30 يوما من الجراحة. ثبت وضع الجسم كما في الخطوة 2.2 ، وبعد التعقيم ووضع الستارة ، قم بعمل شق القص المتوسط لتقسيم القص. أثناء الفصل ، تجنب الأوعية الدموية الرئيسية والقلب ، وافصل الأوعية الدموية المطعمة طبقة تلو الأخرى.
- قطع الأوعية الدموية الكبيرة المتصلة بالقلب بسرعة ، ووضع القلب والشريان الأورطي الصاعد على رقائق الثلج ، وإزالة الجسر الوعائي الطعم ، والشريان الأورطي المتصل ، والشريان التاجي الأيمن. اشطف جميع العينات بمحلول ملحي عادي عند 4 درجات مئوية.
- خذ وعاء الكسب غير المشروع بالكامل الذي يبلغ حجمه حوالي 3-4 سم ، وقسمه إلى 4-5 أجزاء متساوية ، وانقله إلى أنابيب الحفظ بالتبريد. ضع الأنابيب بسرعة في النيتروجين السائل للتجميد السريع والانتقال إلى فريزر بدرجة حرارة منخفضة للغاية -80 درجة مئوية للتخزين.
- للتحليل ، شطف الكسب غير المشروع مع الجليد البارد 0.9 ٪ المالحة وإصلاحه في محلول بارافورمالدهايد 4 ٪. الحفاظ على نسبة حجم كتلة الأنسجة إلى محلول مثبت من 1:10 وإصلاح الأنسجة لأكثر من 12 ساعة.
- وصمة عار المقاطع في 50 مل من محلول مائي من الهيماتوكسيلين لمدة 3 دقائق. افصل الأقسام عن طريق الغسيل ب 50 مل من الإيثانول حمض الهيدروكلوريك 0.5٪ و 50 مل من ماء الأمونيا 0.2٪ لمدة 10 ثوان لكل منهما.
- شطف بالماء الجاري لمدة 1 ساعة ثم ينظف في الماء المقطر عن طريق النقع لمدة 3 دقائق. يجفف في 70٪ و 90٪ إيثانول لمدة 10 دقائق لكل منهما. ضع في 50 مل من محلول تلطيخ الكحول يوزين 0.5٪ لمدة 2-3 دقائق.
- قم بتجفيف الأجزاء الملطخة بالإيثانول النقي لمدة 10 دقائق ثم انقعها في الزيلين النقي لمدة 10 دقائق لجعل العينات شفافة. تقطر المقاطع الشفافة بالغراء المحايد والغطاء بغطاء. مراقبة الأقسام المرضية تحت المجهر الضوئي عند تكبير 40x.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
مؤشر كتلة الجسم ومؤشرات الكيمياء الحيوية في الدم
لم يكن مؤشر كتلة الجسم بين المجموعتين الوهمية و VGD مختلفا بشكل كبير (الوهمية مقابل VGD ، 22.05 كجم / سم 2 ± 0.46 كجم / سم 2 مقابل 21.14 كجم / سم 2 ± 0.39 كجم / سم 2 ، p = 0.46). يتم سرد نتائج الكيمياء الحيوية في المصل في الجدول 1. تم العثور على تغيرات ذات دلالة إحصائية بين المجموعات في أربعة مؤشرات كيميائية حيوية ، بما في ذلك الأسبارتات أمينوترانسفيراز (AST ، الشام مقابل VGD ، 25.25 وحدة دولية / لتر ± 1.88 وحدة دولية / لتر مقابل 31.5 وحدة دولية / لتر ± 2.58 وحدة دولية / لتر) ، بيليروبين المصل (الشام مقابل VGD ، 2.5 ميكرومول / لتر ± 0.47 ميكرومول / لتر مقابل 4.5 ميكرومول / لتر ± 0.14 ميكرومول / لتر) ، إجمالي البيليروبين (الشام مقابل VGD ، 0.025 ميكرومول / لتر ± 0.14 ميكرومول / لتر مقابل 0.92 ميكرومول / لتر ± 0.33 ميكرومول / لتر) ، والكرياتينين (الشام مقابل VGD ، 92.75 ميكرومول / لتر ± 4.15 ميكرومول / لتر مقابل 141.75 ميكرومول / لتر ± 12.65 ميكرومول / لتر).
الفحص بالموجات فوق الصوتية
نجت جميع الحيوانات في مجموعات الشام (ن = 5) و VGD (ن = 5). يتم عرض الإجراءات الجراحية ل CABG في الشكل 1. كان متوسط وقت العملية 105 دقيقة ± 25 دقيقة (النطاق: 90-160 دقيقة) ، وكان متوسط حجم النزيف أثناء العملية 85 مل ± 35 مل (النطاق: 50-200 مل). تأثير وقت التشغيل هو أساسا انتقال كفاءة المشغل من الإنسان إلى الخنزير وليس له أهمية خاصة. كان متوسط المدة من بعد مفاغرة الشق إلى نزع الأنبوب الرغامي 17 دقيقة ± 5 دقائق (النطاق: 15-30 دقيقة). أظهر الفحص بالموجات فوق الصوتية أن إمدادات الدم للوعاء المطعمة لديها قلس جزئي مقارنة بالشريان التاجي الطبيعي ، وكان الاتجاه العام لتدفق الدم طبيعيا بشكل عام (الشكل 3). لم يلاحظ استرواح الصدر أو السدادة أو العدوى أو غيرها من المضاعفات الخطيرة بعد الجراحة. لم يتم العثور على فرق كبير في الوزن أو مؤشر كتلة الجسم بين مجموعات وهمية و VGD ، 1 شهر بعد الجراحة.
تم إجراء الفحص بالموجات فوق الصوتية على الطرف القريب (الشكل 3A ، B) ، وتجويف الأوعية الدموية (الشكل 3C ، D) ، والنهاية البعيدة (الشكل 3E ، F) لوعاء الكسب غير المشروع. لوحظ التدفق الرجعي في النهايات القريبة والبعيدة لوعاء الكسب غير المشروع. ومع ذلك ، لم يلاحظ أي تسرب للدم.
التغيرات المرضية في الأوردة
تم تقسيم كل طعم وريدي بالتساوي إلى ثلاثة أجزاء حسب الطول ، وتم اختيار قسم واحد من كل جزء للتقييم وتصنيفه وفقا لتصنيف Proudilit المعدل لتضيق الشريان التاجي18. تم اعتماد القيم المتوسطة من الأقسام الثلاثة كنتائج لدرجة الانسداد. كان التصنيف المحدد على النحو التالي: الصف الأول = 0 نقطة ، طبيعي بدون عودة التضيق. الصف الثاني = 1 نقطة ، تضيق خفيف <30 ٪ ؛ الصف الثالث = 2 نقطة ، تضيق بين 30 ٪ و 50 ٪ ؛ الصف الرابع = 3 نقاط ، تضيق شديد بين 50 ٪ و 90 ٪ ؛ الصف الخامس = 4 نقاط ، انسداد إجمالي فرعي >90٪ ؛ والصف السادس = 5 نقاط ، انسداد كلي ، مع عدم تدفق الدم إلى الكسب غير المشروع الوريدي. تم اعتماد تصنيف Proudilit المعدل لتضيق الشريان التاجي لتقييم النتائج الكمية. كانت نتيجة المجموعة الوهمية 0.00 ± 0.00 ، مما يشير إلى عدم وجود انسداد وعائي ، بينما كانت النتيجة لمجموعة تحويل مسار الشريان التاجي 3.12 ± 1.22. لذلك ، كان الفرق كبيرا بين المجموعتين (p < 0.05 ، الجدول 2).
تحت المجهر ، في المجموعة الوهمية ، بدت الغلالة الداخلية ، والغلالة الوسطى ، والجدار الوريدي للكسب غير المشروع الوريدي طبيعية. في مجموعة VGD ، تم تكثيف الغلالة الداخلية ووسط الغلالة في الطعوم الوريدية بشكل كبير بعد 30 يوما من جراحة تحويل مسار الشريان التاجي. تم ترسيم الغلالة الداخلية بشكل غامض من وسط الغلالة. اختفت الطبقة المرنة من وسائط الغلالة (الشكل 4). امتلأ تجويف الكسب غير المشروع الوريدي بأنسجة مفرطة التنسج (الشكل 4). لم يلاحظ أي تغيير كبير في قطر السفينة.
الشكل 1: الخطوط العريضة للإجراء. (أ-ج) ما قبل العملية: قم بوزن الخنازير الصغيرة ، وتحقق من أداء مزيل الرجفان وجهاز التنفس الصناعي ، وقم بتوصيل أنبوب التهوية. (مد-واو) التخدير: إعطاء الحقن العضلي للتخدير للخنازير الصغيرة ، وتثبيت الخنزير الصغير على طاولة العمليات ، وكشف مجرى الهواء بالكامل للتنبيب الرغامي ، وتوصيل جهاز التنفس الصناعي ، واستخدام التخدير الاستنشاقي للحفاظ على التخدير. (ز-ط) أثناء العملية: قم بإجراء تقييم بالموجات فوق الصوتية قبل الجراحة لوظيفة القلب في الخنازير الصغيرة وتطعيم مجازة الشريان التاجي الكامل من خلال شق جدار الصدر الأيسر. (ي-ل) بعد العملية: مفاغرة الجروح والانتباه إلى رعاية ما بعد الجراحة وتغذية الخنازير الصغيرة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: الإجراء الجراحي. (أ) قطع جدار الصدر، (ب) عزل الوريد الثديي الداخلي، (ج) إزالة الوريد الثديي الداخلي، (د) إجراء التكييف المسبق للهيبارين، (ه) تعليق التامور، (و) إجراء عملية تروية عضلة القلب، (ز) مراقبة تغيرات تخطيط القلب، (ح) منع تدفق الدم التاجي، (ط) مفاغرة الطرف القريب من وعاء الكسب غير المشروع، (ي ) موقع مفاغرة الشريان التاجي البعيد ، (K) مفاغرة بعيدة إلى الشرايين التاجية ، (L) تطعيم مجازة الشريان التاجي الكامل. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: الفحص بالموجات فوق الصوتية. بعد الانتهاء من تطعيم مجازة الشريان التاجي ، يتم تقييم سالكية تدفق الدم للوعاء المطعمة عن طريق الموجات فوق الصوتية. (أ، ج، ه) صور طبيعية لتدفق الدم التاجي. تظهر إشارات تدفق الدم المستمر في الأطراف القريبة (B) و (D) الوسطى و (F) البعيدة للأوعية المطعمة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: التحليل النسيجي . (أ) أظهر القسم المرضي الطبيعي للوريد الثديي الداخلي تسلسلا هرميا واضحا للأوعية الدموية وعدم وجود تضيق في التجويف. (ب، ج) أظهرت أمراض الوريد الثديي الداخلي بعد 30 يوما من زرع الشريان التاجي أن بطانة الوعاء كانت سميكة بدرجات متفاوتة ، وكان من الواضح أن التجويف ضيق. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| المؤشرات | مجموعة الشام (ن = 5) | مجموعة الكسب غير المشروع (ن = 5) |
| بديل (وحدة دولية / لتر) | 46 ±5.11 | 47.75±7.88 |
| AST (وحدة دولية / لتر) | 25.25 ±1.88 | 31.5±2.58* |
| البروتين الكلي (وحدة دولية / لتر) | 63.12 ±.138 | 60.17±1.91 |
| الزلال (وحدة دولية / لتر) | 32.25 ±0.77 | 23.77±5.61 |
| الجلوبيولين (جم / لتر) | 30.87 ±.136 | 36.4±6.03 |
| مصل البيليروبين (ميكرومول / لتر) | 2.5 ±0.47 | 4.5±0.14* |
| إجمالي البيليروبين (ميكرومول / لتر) | 0.025 ±0.14 | 0.92±0.33* |
| الفوسفاتيز القلوي (IU / L) | 103 ±19.3 | 104±16.04 |
| الجلوكوزامين (مليمول / لتر) | 4.44 ±0.36 | 5.96±0.42 |
| نيتروجين اليوريا (مليمول / لتر) | 2.46 ±0.17 | 2.89±0.65 |
| مصل الكرياتينين ميكرومول / لتر | 92.75 ±4.15 | 141.75±12.65* |
| الكوليسترول الكلي (مليمول / لتر) | 2.37 ±0.12 | 2.16±0.06 |
| الدهون الثلاثية (مليمول / لتر) | 0.48 ±0.10 | 0.25±0.05 |
| البروتين الدهني عالي الكثافة مليمول / لتر | 1.05 ±0.07 | 1.03±0.07 |
| البروتين الدهني منخفض الكثافة جدا (مليمول / لتر) | 1.43 ±0.06 | 1.29±0.04 |
| نازعة هيدروجين اللاكتات (مليمول / لتر) | 384.75 ±26.8 | 478.25±49.58* |
الجدول 1. مؤشرات المصل البيوكيميائية. تم استخدام برنامج التحليل الإحصائي للتحليل. تم التعبير عن البيانات كمتوسط ± الخطأ المعياري (ن = 5). تم تحليل مقارنات بيانات القياس بواسطة اختبار t للطالب. تشير القيمة p الأقل من 0.05 إلى دلالة إحصائية. * p < 0.05 ، تحويل مسار الشريان التاجي مقابل الشام.
| تصنيف بروديليت | ||||||
| S. رقم العينة | سجل مباشرة بعد جراحة تحويل مسار الشريان التاجي | النتيجة بعد 30 يوما من جراحة تحويل مسار الشريان التاجي | ||||
| 1 | 0, 0, 0 | 2, 2, 2 | ||||
| 2 | 0, 0, 0 | 1, 2, 2 | ||||
| 3 | 0, 0, 0 | 2, 3, 2 | ||||
| 4 | 0, 0, 0 | 3, 2, 2 | ||||
| 5 | 0, 0, 0 | 2, 1, 2 | ||||
الجدول 2. النتائج الإحصائية لدرجات انسداد الكسب غير المشروع مباشرة بعد الجراحة و 30 يوما بعد الجراحة. تم استخدام مقياس تصنيف Proudilit المعدل لدرجة انسداد الأوعية الدموية: الدرجة الأولى = 0 نقطة ، طبيعي بدون عودة التضيق. الصف الثاني = 1 نقطة ، تضيق خفيف <30 ٪ ؛ الصف الثالث = 2 نقطة ، تضيق بين 30 ٪ و 50 ٪ ؛ الصف الرابع = 3 نقاط ، تضيق شديد بين 50 ٪ و 90 ٪ ؛ الصف الخامس = 4 نقاط ، انسداد إجمالي فرعي >90٪ ؛ والصف السادس = 5 نقاط ، انسداد كلي ، مع عدم تدفق الدم إلى الكسب غير المشروع الوريدي. تتضمن البيانات نتائج من خمسة طعوم وريدية مقسمة بالتساوي إلى ثلاثة أقسام حسب الطول.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في هذه الدراسة ، وصفنا بالتفصيل بروتوكول اختيار الحيوانات ، وإعداد الأدوات ، والإجراءات الجراحية ، وتقييم ما بعد الجراحة عند تطوير نموذج VGD الناجم عن تحويل مسار الشريان التاجي. أجرينا فحصا بالموجات فوق الصوتية للطعم الوريدي قبل وبعد جراحة تحويل مسار الشريان التاجي والفحص النسيجي للكسب غير المشروع بعد 30 يوما من الجراحة. كان تدفق الدم في الوريد الثديي الداخلي طبيعيا قبل جراحة تحويل مسار الشريان التاجي ، بينما لوحظ تدفق رجعي في ترقيع الوريد الثديي الداخلي. بالمقارنة مع مجموعة العمليات الوهمية ، تضررت وظائف الكبد والكلى للحيوانات في مجموعة العمليات إلى حد ما. بالنظر إلى حدوث مرض الكسب غير المشروع التاجي ، أدى ضعف انقباض عضلة القلب إلى عدم كفاية نضح الأنسجة المحيطية. أظهر الطعم الوريدي تضخم داخلي وإعادة تشكيل الأوعية الدموية بعد 30 يوما من جراحة تحويل مسار الشريان التاجي (الشكل 4). ترتبط التغيرات الليفية حول الأوعية الدموية بالتئام الجروح ، ويحدث انتشار الخلايا الليفية في وقت مبكر من التئام الجروح في اليوم 1 إلى اليوم 3 19 ، ويحدث إنتاج الكولاجين النشط من النوع الأول والفبرونيكتين في اليوم 4 إلى اليوم 6 ، ويحدث تراكم ألياف الأكتين السيتوبلازمية α-SM في اليوم 7 إلى اليوم 1419. ألياف الإجهاد تعني تكوين الخلايا الليفية العضلية ، والتي تتزامن مع تقلص الجرح20. من غير الواضح ما إذا كان التليف حول الأوعية الدموية يؤثر على النتائج الجراحية.
هنا ، اخترنا الخنازير الصغيرة لإنشاء نموذج مرض الكسب غير المشروع في الوريد. في حين تم استخدام الحيوانات الصغيرة مثل الفئران لدراسة الآليات المرضية ل VGD21 ، فإن الخنازير متشابهة في الحجم والتشريح وعلم وظائف الأعضاء مع البشر ، وبالتالي فهي أكثر ملاءمة لدراسة التسبب في أمراض القلب البشرية أو كأداة لتطوير الجهاز22. غالبا ما يتم اختيار الأوردة الثديية الداخلية كترقيع سريريا. وجدت الدراسات السريرية من مجموعتين مستقلتين أن ترقيع الوريد الثديي الداخلي له خاصية ارتفاع معدل الإصابة بآفات ترقيع الوريد ، وقد لوحظت نفس التغيرات المرضية في دراستنا (الشكل 4)23,24. كما هو الحال في الممارسة السريرية ، فإن اختيار النهج الجراحي المناسب في جراحة الحيوانات أمر بالغ الأهمية لنجاح الجراحة. هنا ، أشرنا إلى بضع الصدر الأيسر ل Hocum11. وجدنا أن بضع الصدر الأيسر يمكن أن يكشف بوضوح مجال الجراحة ، وكان من السهل التعرف على التشريح حول الشق ، وكانت كمية النزيف منخفضة. بالإضافة إلى ذلك ، بالمقارنة مع بضع الصدر المتوسط ، لا يتطلب بضع الصدر الجانبي نشر القص ، لذلك يمكن تقليل الضغط الجراحي.
التخدير أمر بالغ الأهمية لنجاح النموذج الجراحي. في هذه الدراسة ، تم تعديل البروتوكول من Kotani et al. ، مع استخدام مزيج من الكيتامين والديازيبام كتحريض للتخدير واستنشاق الأيزوفلوران كتخدير صيانة25. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت مجموعة بحثية أن الأدوية الوريدية كانت مناسبة أيضا لصيانة التخدير26. قد يكون التنبيب الرغامي في الخنازير صعبا على فريق جراحة الحيوانات. بالمقارنة مع مجرى الهواء البشري ، فإن تشريح القصبة الهوائية للخنازير يجعل التعرض للمزمار صعبا27. هنا ، لكشف المزمار بشكل أفضل ، ضغطنا على الفك العلوي للخنزير للمساعدة في كشف مزمار الخنزير (الشكل 1 د). من ناحية أخرى ، فإن استخدام تنظير الحنجرة المباشر أو تنظير القصبات بالألياف البصرية سيساعد على تصور المزمار في التنبيب الرغامي28.
تنقسم الحالة المرضية لمرض الكسب غير المشروع الوريدي بشكل رئيسي إلى ثلاث مراحل: 1) المرحلة الحادة (خلال شهر واحد) تجلط الدم. 2) المرحلة تحت الحادة (1-12 شهرا) تضخم داخلي ؛ 3) المرحلة المتأخرة (أكثر من 12 شهرا) من تشكيل تصلب الشرايين ، وهو سبب تضيق الكسب غير المشروع وانسداده29. ترتبط معظم التغييرات في المرحلة الحادة من VGD بعوامل تشغيلية ، وتصلب الشرايين المتشكل في المرحلة المتأخرة لا رجعة فيه. دراسة سماكة بطانة الرحم تحت الحاد مهمة جدا للتسبب في مرض VGD وعلاجه والوقاية منه. من الأهمية بمكان أيضا أن تختلف أوعية الكسب غير المشروع المختارة عن الأوعية الرأسية للوريد الصافن الكبير. عادة ما يتحمل الوريد الثديي الداخلي ضغطا هيدروستاتيكيا أقل ، وتكون التغيرات المرضية أسرع بعد الزرع من الوريد الصافن الكبير. في نموذجنا ، شوهد تضخم داخلي نموذجي يسد تجويف الوعاء المطعمة في الفحص النسيجي بعد 30 يوما من الجراحة ، وقد لوحظت نفس التغيرات المرضية في الدراسات السريرية الأخرى23,24. نتائج النمذجة لاختيار الوريد الثديي الداخلي في الخنازير الصغيرة مستقرة في النمط الظاهري ، ووقت النمذجة قصير ، ودرجة الحد من التغيرات المرضية ل VGD عالية ، مما يفضي إلى تطوير أبحاث المتابعة.
يحتوي النموذج أيضا على بعض القيود. تتطلب بعض العمليات الدقيقة في عملية النمذجة الحيوانية الكبيرة ، والمراقبة أثناء العملية للعلامات الحيوية الحيوانية ، والإنعاش بعد العملية الجراحية خبرة عملية معينة ، الأمر الذي يتطلب جراحين محترفين وأطباء تخدير لتوجيه التدريب وتقليل الوفيات العرضية للحيوانات بشكل كبير. تتطلب جراحة الحيوانات الكبيرة مواقع تجريبية محددة ، وموظفين محترفين ، ودعما ماليا كافيا ، مما قد يكون عبئا أثقل على المعاهد الأصغر.
في الختام ، بتوجيه من المهنيين ، يمكن للمختبرات المجهزة تجهيزا جيدا إجراء مزيد من الدراسة للتغيرات المرضية ل VGD من خلال إنشاء نموذج VGD الصغير هذا ، والذي له أهمية كبيرة لعلاج VGD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
Acknowledgments
يشكر المؤلفون معهد مراقبة مختبر قوانغدونغ على الدعم الفني ورعاية الحيوانات وجمع العينات. كما يشكرون شركة Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co.، Ltd ، على الدعم الفني في الفحص بالموجات فوق الصوتية. تم دعم هذا العمل من قبل برنامج قوانغدونغ للعلوم والتكنولوجيا ، الصين ، ومشروع نفقات أعمال البحث العلمي الأساسي بجامعة جينان المركزية (2017A020215076 و 2008A08003 و 21621409).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aortic Punch | Medtronic Inc. , America | 3.0mm, 3.5mm, 4.0mm | Used for proximal coronary bridge anastomosis |
| Automatic biochemical analyzer | IDEXX Laboratories, Inc. America | Catalyst One | |
| Cardiac coronary artery bypass grafting instrument kit | LANDANGER, France | ||
| Cardiogram monitor | Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co, Ltd | MEC-1000 | |
| Coronary Shunt | AXIUS | OF-1500, OF-2500, OF-3000 | The product temporarily blocks the coronary artery during arteriotomy to reduce the amount of bleeding in the surgical field and provide blood flow to the distal end during anastomosis. The Axius shunt plug is not an implant and should be removed prior to completion of the anastomosis. |
| Defibrillator | MEDIANA | Mediana D500 | |
| Diazepam | Nanguo pharmaceutical Co. LTD, Guangdong, China | H37023039 | Narcotic inducer |
| Disposable manual electric knife | Covidien, America | E2516H | |
| Electric negative pressure suction machine | Shanghai Baojia Medical Instrument Co, Ltd | YX932D | |
| Esmolol | Guangzhou Wanzheng Pharmaceutical Co. LTD | H20055990 | Emergency drugs |
| Ice machine | Local suppliers, Guangzhou, China | ||
| Lidocaine | Chengdu First Pharmaceutical Co. LTD | H51021662 | Emergency drugs |
| Luxtec headlight system | Luxtec, America | AX-1375-BIF | Used for lighting fine parts during operation |
| Medical operation magnifier (glasses) | Germany Lista co, LTD | SuperVu Galilean 3.5× | Used for fine site operation during operation |
| Multi-function high-frequency electrotome | Shanghai Hutong Electronics Co, Ltd | GD350-B | |
| Nitrogen canister | Local suppliers, Guangzhou, China | ||
| Nonabsorbable surgical suture (polypropylene suture) | Johnson & Johnson, America | 6-0, 7-0 | Used to suture blood vessels. |
| Nonabsorbable suture (cotton thread) | Covidien, America | 1-0 | Used for skin and muscle tissue tugging |
| Open heart surgery instrument kit | Shanghai Medical Instrument (Group) Co., LTD | ||
| Propofol injection | Xi 'an Libang Pharmaceutical Co. LTD | H19990282 | Anesthetic sedative |
| Refrigerator | Local suppliers, Guangzhou, China | ||
| Respiratory anesthesia machine for animal | Shenzhen Reward Life Technology Co, Ltd, China | R620-S1 | |
| Semi-occlusion clamp | Xinhua Surgical Instrument Co., Ltd. | ZL1701RB | Temporarily cut off the aortic flow |
| vecuronium bromide | Richter, Hungary | JX20090127 | Muscle relaxant |
| Veterinary ultrasound system | Royal Philips, Netherlands | CX50 | |
| Zoletil | Virbac, France | Zoletil 50 | Animal narcotic |
References
- Lloyd-Jones, D., et al. Executive summary: Heart disease and stroke statistics--2010 update: A report from the American Heart Association. Circulation. 121 (7), 948-954 (2010).
- Taggart, D. P. Contemporary coronary artery bypass grafting. Frontiers of Medicine. 8, 395-398 (2014).
- Wolny, R., Mintz, G. S., Pregowski, J., Witkowski, A. Mechanisms, prevention and treatment of saphenous vein graft disease. The American Journal of Cardiology. 154, 41-47 (2021).
- Schachner, T., Laufer, G., Bonatti, J. In vivo (animal) models of vein graft disease. European Journal of Cardio-thoracic Surgery: Official Journal of the European Association for Cardio-thoracic Surgery. 30 (3), 451-463 (2006).
- Suggs, W. D., et al. Antisense oligonucleotides to c-fos and c-jun inhibit intimal thickening in a rat vein graft model. Surgery. 126 (2), 443-449 (1999).
- Jiang, Z., et al. A novel vein graft model: Adaptation to differential flow environments. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 286 (1), H240-H245 (2004).
- O'Brien, J. E., et al. Early injury to the media after saphenous vein grafting. The Annals of Thoracic Surgery. 65 (5), 1273-1278 (1998).
- Zou, Y., et al. Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis. The American Journal of Pathology. 153 (4), 1301-1310 (1998).
- Klyachkin, M. L., et al. Postoperative reduction of high serum cholesterol concentrations and experimental vein bypass grafts. Effect on the development of intimal hyperplasia and abnormal vasomotor function. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 108 (3), 556-566 (1994).
- Tan, W., et al. A porcine model of heart failure with preserved ejection fraction induced by chronic pressure overload characterized by cardiac fibrosis and remodeling. Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 677727 (2021).
- Hocum Stone,, L, L., et al. Magnetic resonance imaging assessment of cardiac function in a swine model of hibernating myocardium 3 months following bypass surgery. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 153 (3), 582-590 (2017).
- Gedik, N., et al. Proteomics/phosphoproteomics of left ventricular biopsies from patients with surgical coronary revascularization and pigs with coronary occlusion/reperfusion: Remote ischemic preconditioning. Scientific Reports. 7 (1), 7629 (2017).
- Tsirikos Karapanos,, N,, et al. The impact of competitive flow on distal coronary flow and on graft flow during coronary artery bypass surgery. Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 12 (6), 993-997 (2011).
- Meng, X., et al. Competitive flow arising from varying degrees of coronary artery stenosis affects the blood flow and the production of nitric oxide and endothelin in the internal mammary artery graft. European Journal of Cardio-thoracic Surgery: Official Journal of the. 43 (5), 1022-1027 (2013).
- Thankam, F. G., et al. Association of hypoxia and mitochondrial damage associated molecular patterns in the pathogenesis of vein graft failure: A pilot study. Translational Research: The Journal of Laboratory and Clinical. , 38-52 (2021).
- Li, X., et al. A surgical model of heart failure with preserved ejection fraction in Tibetan minipigs. Journal of Visualized Experiments: JoVE. 180 (180), 63526 (2022).
- Rueda, A. lcalá, I,, et al. A live porcine model for surgical training in tracheostomy, neck dissection, and total laryngectomy. European Archives of Oto-Rhino-Laryngology: Official Journal of the European Federation of Oto-Rhino-Laryngological Societies (EUFOS): Affiliated with the German Society for Oto-Rhino-Laryngology - Head and Neck Surgery. 278 (8), 3081-3090 (2021).
- Proudfit, W. L.
- Clark, R. A. Regulation of fibroplasia in cutaneous wound repair. TheAmerican Journal of the Medical Sciences. 306 (1), 42-48 (1993).
- Darby, I., Skalli, O., Gabbiani, G. Alpha-smooth muscle actin is transiently expressed by myofibroblasts during experimental wound healing. Laboratory Investigation. 63 (1), 21-29 (1990).
- Sterpetti, A. V., et al. Formation of myointimal hyperplasia and cytokine production in experimental vein grafts. Surgery. 123 (4), 461-469 (1998).
- Shannon, A. H., et al. Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm. Journal of Visualized Experiments: JoVE. 153 (153), (2019).
- Langille, B. L., O'Donnell, F. Reductions in arterial diameter produced by chronic decreases in blood flow are endothelium-dependent. Science. 231 (4736), 405-407 (1986).
- Zwolak, R. M., Adams, M. C., Clowes, A. W. Kinetics of vein graft hyperplasia: Association with tangential stress. Journal of Vascular Surgery. 5 (1), 126-136 (1987).
- Kotani, K., et al. A subacute hypoxic model using a pig. Surgery Today. 35 (11), 951-954 (2005).
- Liu, D., et al. Comparison of ketamine-pentobarbital anesthesia and fentanyl-pentobarbital anesthesia for open-heart surgery in minipigs. Lab Animal. 38 (7), 234-240 (2009).
- Geovanini, G. R., Pinna, F. R., Prado, F. A., Tamaki, W. T., Marques, E. Standardization of anesthesia in swine for experimental cardiovascular surgeries. Revista Brasileira de Anestesiologia. 58 (4), 363-370 (2008).
- Alhomary, M., Ramadan, E., Curran, E., Walsh, S. R. Videolaryngoscopy vs. fibreoptic bronchoscopy for awake tracheal intubation: A systematic review and meta-analysis. Anaesthesia. 73 (9), 1151-1161 (2018).
- Parang, P., Arora, R. Coronary vein graft disease: Pathogenesis and prevention. Canadian Journal of Cardiology. 25 (2), e57-e62 (2009).
- Egan, T. D., et al. Fentanyl pharmacokinetics in hemorrhagic shock: a porcine model. Anesthesiology. 91 (1), 156-166 (1999).
