Her ble en digital immunohistokjemi bildeanalyseplattform utviklet og validert for å kvantitativt analysere endometrieimmunceller hos pasienter med tilbakevendende spontanaborter i implantasjonsvinduet.
For å evaluere immunmikromiljøet til pasienter med tilbakevendende abort (RM), ble en digital immunhistokjemi bildeanalyseplattform utviklet og validert for kvantitativt å analysere endometrieimmunceller i midten av lutealfasen. Alle endometriumprøver ble samlet inn i midten av lutealfasen av menstruasjonssyklusen. Parafininnebygd endometrievev ble seksjonert i 4 μm tykke lysbilder, og immunhistokjemi (IHC)farging ble utført for å oppdage endometrieimmunceller, inkludert CD56+ uNK-celler, Foxp3+ Tregs, CD163+ M2-makrofager, CD1a+ DC-er og CD8+ T-celler. Panoramalysbildene ble skannet ved hjelp av en digital lysbildeskanner og et kommersielt bildeanalysesystem ble brukt til kvantitativ analyse. Prosentandelen av endometrieimmunceller ble beregnet ved å dele antall immunceller i de totale endometriecellene. Ved hjelp av det kommersielle bildeanalysesystemet kan kvantitativ evaluering av endometrieimmunceller, som er vanskelige eller umulige å analysere med konvensjonell bildeanalyse, enkelt og nøyaktig analyseres. Denne metoden kan brukes til å kvantitativt karakterisere endometriummikromiljøet, inkludert interaksjon mellom immunceller, og dets heterogenitet for forskjellige pasienter med reproduktiv svikt. Plattformen for kvantitativ evaluering av endometrieimmunceller kan være av viktig klinisk betydning for diagnostikk og behandling av RM-pasienter.
Tilbakevendende abort (RM) er tap av to eller flere påfølgende graviditeter og er en kompleks sykdom som trekker oppmerksomhet fra klinikere de siste årene. Forekomsten av RM hos kvinner i fertil alder er 1% -5% 1. Resultater fra tidligere studier viser at immunfaktorer er nært forbundet med patogenesen av RM 2,3,4,5. Opprettholde immunhomeostase ved mor-føtalgrensesnittet er nødvendig for embryoimplantasjon og utvikling. Endometrial immunceller utfører flere regulatoriske roller for å opprettholde denne homeostasen, for eksempel å fremme trofoblastinvasjon, omforme spiralarterier og bidra til placentautvikling 6,7,8,9.
Avvikende endometrieimmunceller hos kvinner med RM er tidligere rapportert. Resultatene viser en nær sammenheng mellom den høye tettheten av livmor naturlige drepeceller (uNK) og forekomsten av RM10,11,12. Et økt antall makrofager er rapportert i endometrium hos kvinner med RM, sammenlignet med de som hadde en levende fødsel13. Regulatoriske T-celler (Treg) spiller en rolle i mors immuntoleranse mot embryoet, og deres nivå og funksjon reduseres i decidua hos RM-pasienter14. Cytotoksisitet T-celler (CTL) og dendrittiske celler (DC) spiller også en rolle i immunreguleringen av graviditet15,16. Derfor kan en omfattende kvantitativ analyse av lokale endometrieimmunceller i midt-lutealfasen bidra til å bedre forstå patogenesen av RM. Noen nåværende metoder for kvantitativ analyse av endometrieimmunceller bruker flowcytometri som nøyaktig kan merke immunceller med flere markører17,18. Klinisk anvendelse av flowcytometri er imidlertid begrenset fordi den kun kan utføres på ferskt vev. Innhenting av ferskt vev er bare mulig når et stort volum overflødig tumor er tilgjengelig, en sjelden forekomst for endometrium. Immunhistokjemi kan observere vevsmorfologi godt in situ og kan også merke ulike immunceller, mens tradisjonelle immunhistokjemiske teknikker ikke kan utføre kvantitativ analyse av immunceller.
Sammenlignet med konvensjonelle immunhistokjemiske eksperimenter har kvantitativ immunhistokjemisk analyse av immunceller i endometrium viktig klinisk betydning. IHC-intensitetsskåring er vanligvis rangert på en firepunkts skala eller sterk og svak i patologisk diagnostikk og forskning 19,20,21. Imidlertid er denne semi-kvantitative teknikken subjektiv, svært unøyaktig, og demonstrerer betydelig intra-observatør og inter-observatør variabilitet22. En mulig løsning er bruk av maskinlæring, som er verdifull i digital bildeanalyse23,24. Ved å gi kvantitative målinger, muliggjør denne tilnærmingen en mer presis vurdering av immuncelleinfiltrasjon, distribusjon og tetthet i livmorvevet. Denne kvantitative informasjonen kan bidra til å belyse de dynamiske endringene i immuncellepopulasjoner under menstruasjonssyklusen og i ulike patologiske forhold. Samlet sett gir evnen til kvantitativt å analysere immunceller i endometrium gjennom immunhistokjemi verdifull innsikt i livmorens immunmikromiljø.
Derfor hadde protokollen som mål å utvikle og validere en digital immunhistokjemi bildeanalyseplattform for kvantitativt å analysere endometrieimmunceller, inkludert uNK-celler, Tregs, makrofager, DCs og cytotoksiske T-celler i midtlutealfasen hos RM-pasienter.
Denne protokollen etablerte en digital immunhistokjemi bildeanalyseplattform for kvantitativt å analysere endometrieimmunceller hos RM-pasienter. Her ble seks endometrieimmunmarkører detektert for å evaluere endometrieimmunmikromiljøet hos RM-pasienter.
Et mottakelig endometrium i midten av lutealfasen er nøkkelen til vellykket implantasjon og graviditet27,28. Derfor spiller evaluering av prosentvise endometrieimmunceller en vikti…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne er takknemlige for alle kvinner som samtykket og donerte prøver til denne studien.
Automated coverslipper | Sakuraus | DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2 | |
CD163 | GrowGn Biotechnology | NCL-L-CD163 | |
CD1a | Gene Tech | GM357129 | |
CD56 | Gene Tech | GT200529 | |
CD8 | Novocastra | NCL-L-CD8-4B11 | |
Dehydrator | Thermo Fisher | Excelsior ES | |
Digital pathology and | Indica labs | HALO | |
Foxp3 | YILIFANG biological | 14-477-82 | |
IHC stainer | Leica | BOND III | |
Image analysis platform | Indica labs | HALO | |
Slide Scanner | Olympus life science | VS200 |