Aquí, se desarrolló y validó una plataforma digital de análisis de imágenes inmunohistoquímicas para analizar cuantitativamente las células inmunitarias endometriales de pacientes con abortos espontáneos recurrentes en la ventana de implantación.
Para evaluar el microambiente inmune endometrial de pacientes con aborto espontáneo recurrente (RM), se desarrolló y validó una plataforma de análisis de imágenes inmunohistoquímicas digitales para analizar cuantitativamente las células inmunes endometriales durante la fase lútea media. Todas las muestras de endometrio se recogieron durante la fase lútea media del ciclo menstrual. Los tejidos endometriales incluidos en parafina se seccionaron en portaobjetos de 4 μm de espesor y se llevó a cabo una tinción inmunohistoquímica (IHQ) para detectar células inmunitarias endometriales, incluidas las células uNK CD56+, las Tregs Foxp3+, los macrófagos CD163+ M2, las CD CD1a+ y las células T CD8+. Las diapositivas panorámicas se escanearon con un escáner digital de diapositivas y se utilizó un sistema comercial de análisis de imágenes para el análisis cuantitativo. El porcentaje de células inmunitarias endometriales se calculó dividiendo el número de células inmunitarias en el total de células endometriales. Utilizando el sistema comercial de análisis de imágenes, la evaluación cuantitativa de las células inmunitarias endometriales, que son difíciles o imposibles de analizar con el análisis de imágenes convencional, podría analizarse de forma fácil y precisa. Esta metodología se puede aplicar para caracterizar cuantitativamente el microambiente del endometrio, incluida la interacción entre las células inmunitarias, y su heterogeneidad para diferentes pacientes con insuficiencia reproductiva. La plataforma para la evaluación cuantitativa de las células inmunitarias endometriales puede tener una importancia clínica importante para el diagnóstico y el tratamiento de las pacientes con RM.
El aborto espontáneo recurrente (RM) es la pérdida de dos o más embarazos consecutivos y es una enfermedad compleja que ha llamado la atención de los médicos en los últimos años. La tasa de incidencia de RM en mujeres en edad fértil es del 1%-5% 1. Los resultados de estudios previos muestran que los factores inmunes están estrechamente asociados con la patogénesis de RM 2,3,4,5. El mantenimiento de la homeostasis inmunitaria en la interfaz materno-fetal es necesario para la implantación y el desarrollo embrionario. Las células inmunitarias endometriales desempeñan varias funciones reguladoras para mantener esta homeostasis, como promover la invasión del trofoblasto, remodelar las arterias espirales y contribuir al desarrollo de la placenta 6,7,8,9.
Se han reportado previamente células inmunitarias endometriales aberrantes en mujeres con RM. Los resultados muestran una estrecha asociación entre la alta densidad de células asesinas naturales uterinas (uNK) y la ocurrencia de RM10,11,12. Se ha descrito un aumento del número de macrófagos en el endometrio de mujeres con RM, en comparación con las que tuvieron un nacido vivo13. Las células T reguladoras (Treg) desempeñan un papel en la inmunidad materna hacia el embrión, y su nivel y función están disminuidos en la decidua de los pacientes con RM14. Los linfocitos T (CTL) y los linfocitos dendríticos (CD) también desempeñan un papel en la regulación inmunitaria del embarazo15,16. Por lo tanto, un análisis cuantitativo exhaustivo de las células inmunitarias endometriales locales durante la fase lútea media podría ayudar a comprender mejor la patogénesis de la RM. Algunos métodos actuales para el análisis cuantitativo de las células inmunitarias endometriales utilizan la citometría de flujo, que puede etiquetar con precisión las células inmunitarias con múltiples marcadores17,18. Sin embargo, la aplicación clínica de la citometría de flujo es limitada porque solo se puede realizar en tejido fresco. La obtención de tejido fresco solo es factible cuando se dispone de un gran volumen de exceso de tumor, algo poco frecuente en el endometrio. La inmunohistoquímica puede observar bien la morfología de los tejidos in situ y también puede marcar varias células inmunitarias, mientras que las técnicas inmunohistoquímicas tradicionales no pueden realizar análisis cuantitativos de las células inmunitarias.
En comparación con los experimentos de inmunohistoquímica convencionales, el análisis inmunohistoquímico cuantitativo de las células inmunitarias del endometrio tiene una importancia clínica importante. La puntuación de la intensidad de la IHQ suele clasificarse en una escala de cuatro puntos o fuerte y débil en el diagnóstico patológico y la investigación 19,20,21. Sin embargo, esta técnica semicuantitativa es subjetiva, altamente inexacta y demuestra una variabilidad significativa intraobservador e interobservador22. Una posible solución es la aplicación del aprendizaje automático, que es valioso en el análisis de imágenes digitales23,24. Al proporcionar mediciones cuantitativas, este enfoque permite una evaluación más precisa de la infiltración, distribución y densidad de las células inmunitarias dentro del tejido uterino. Esta información cuantitativa puede ayudar a dilucidar los cambios dinámicos en las poblaciones de células inmunitarias durante el ciclo menstrual y en diversas condiciones patológicas. En general, la capacidad de analizar cuantitativamente las células inmunitarias del endometrio a través de la inmunohistoquímica ofrece información valiosa sobre el microambiente inmunitario del útero.
Por lo tanto, el protocolo tenía como objetivo desarrollar y validar una plataforma digital de análisis de imágenes inmunohistoquímicas para analizar cuantitativamente las células inmunitarias endometriales, incluidas las células uNK, Tregs, macrófagos, CD y células T citotóxicas durante la fase lútea media en pacientes con RM.
Este protocolo estableció una plataforma digital de análisis de imágenes inmunohistoquímicas para analizar cuantitativamente las células inmunitarias endometriales de pacientes con RM. En este caso, se detectaron seis marcadores inmunitarios endometriales para evaluar el microambiente inmunitario endometrial en pacientes con RM.
Un endometrio receptivo durante la fase lútea media es clave para el éxito de la implantación y el embarazo27,28<sup class="…
The authors have nothing to disclose.
Los autores agradecen a todas las mujeres que dieron su consentimiento y donaron muestras para este estudio.
Automated coverslipper | Sakuraus | DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2 | |
CD163 | GrowGn Biotechnology | NCL-L-CD163 | |
CD1a | Gene Tech | GM357129 | |
CD56 | Gene Tech | GT200529 | |
CD8 | Novocastra | NCL-L-CD8-4B11 | |
Dehydrator | Thermo Fisher | Excelsior ES | |
Digital pathology and | Indica labs | HALO | |
Foxp3 | YILIFANG biological | 14-477-82 | |
IHC stainer | Leica | BOND III | |
Image analysis platform | Indica labs | HALO | |
Slide Scanner | Olympus life science | VS200 |