هنا ، تم تطوير منصة رقمية لتحليل صور الكيمياء المناعية والتحقق من صحتها لتحليل الخلايا المناعية البطانية للمرضى الذين يعانون من الإجهاض المتكرر في نافذة الزرع كميا.
لتقييم البيئة الدقيقة المناعية لبطانة الرحم للمرضى الذين يعانون من الإجهاض المتكرر (RM) ، تم تطوير منصة رقمية لتحليل صور الكيمياء المناعية المناعية والتحقق من صحتها لتحليل الخلايا المناعية البطانية كميا خلال المرحلة المتوسطة الصفراء. تم جمع جميع عينات بطانة الرحم خلال المرحلة المتوسطة الصفراء من الدورة الشهرية. تم تقسيم أنسجة بطانة الرحم المضمنة في البارافين إلى شرائح بسمك 4 ميكرومتر ، وتم إجراء تلطيخ الكيمياء المناعية (IHC) للكشف عن الخلايا المناعية البطانية الرحمية ، بما في ذلك خلايا CD56 + uNK ، و Foxp3 + Tregs ، و CD163 + M2 البلاعم ، و CD1a + DCs ، وخلايا CD8 + T. تم مسح الشرائح البانورامية ضوئيا باستخدام ماسح ضوئي رقمي للشرائح وتم استخدام نظام تحليل الصور التجارية للتحليل الكمي. تم حساب النسبة المئوية للخلايا المناعية البطانية بقسمة عدد الخلايا المناعية في إجمالي خلايا بطانة الرحم. باستخدام نظام تحليل الصور التجارية ، يمكن تحليل التقييم الكمي للخلايا المناعية البطانية الرحمية ، والتي يصعب أو يستحيل تحليلها باستخدام تحليل الصور التقليدي ، بسهولة وبدقة. يمكن تطبيق هذه المنهجية لتوصيف البيئة المكروية بطانة الرحم كميا ، بما في ذلك التفاعل بين الخلايا المناعية ، وعدم تجانسها لمرضى الفشل التناسلي المختلفين. قد تكون منصة التقييم الكمي للخلايا المناعية البطانية ذات أهمية سريرية مهمة لتشخيص وعلاج مرضى RM.
الإجهاض المتكرر (RM) هو فقدان حملين متتاليين أو أكثر وهو مرض معقد يجذب انتباه الأطباء في السنوات الأخيرة. معدل حدوث RM في النساء في سن الإنجاب هو 1٪ -5٪ 1. تظهر نتائج الدراسات السابقة أن العوامل المناعية ترتبط ارتباطا وثيقا بالتسبب في RM2،3،4،5. الحفاظ على التوازن المناعي في واجهة الأم والجنين مطلوب لزرع الجنين وتطوره. تؤدي الخلايا المناعية البطانية الرحمية عدة أدوار تنظيمية للحفاظ على هذا التوازن ، مثل تعزيز غزو الأرومة الغاذية ، وإعادة تشكيل الشرايين الحلزونية ، والمساهمة في نمو المشيمة6،7،8،9.
تم الإبلاغ سابقا عن خلايا مناعية بطانة الرحم الشاذة لدى النساء المصابات ب RM. تظهر النتائج ارتباطا وثيقا بين الكثافة العالية للخلايا القاتلة الطبيعية للرحم (uNKs) وحدوثRM 10،11،12. تم الإبلاغ عن عدد متزايد من البلاعم في بطانة الرحم للنساء المصابات ب RM ، مقارنة بأولئك الذين ولدوا أحياء13. تلعب الخلايا التائية التنظيمية (Treg) دورا في تحمل الأم المناعي تجاه الجنين ، وينخفض مستواها ووظيفتها في نفضي مرضى RM14. تلعب الخلايا التائية السمية الخلوية (CTL) والخلايا المتغصنة (DCs) أيضا دورا في التنظيم المناعي للحمل15,16. لذلك ، يمكن أن يساعد التحليل الكمي الشامل للخلايا المناعية البطانية المحلية خلال المرحلة المتوسطة الصفراء على فهم التسبب في RM بشكل أفضل. تستخدم بعض الطرق الحالية للتحليل الكمي للخلايا المناعية البطانية قياس التدفق الخلوي الذي يمكنه تسمية الخلايا المناعية بدقة بعلامات متعددة17,18. ومع ذلك ، فإن التطبيق السريري لقياس التدفق الخلوي محدود لأنه لا يمكن إجراؤه إلا على الأنسجة الطازجة. لا يمكن الحصول على أنسجة جديدة إلا عند توفر كمية كبيرة من الورم الزائد ، وهو أمر نادر الحدوث لبطانة الرحم. يمكن للكيمياء الهيستولوجية المناعية مراقبة مورفولوجيا الأنسجة جيدا في الموقع ويمكنها أيضا تسمية الخلايا المناعية المختلفة ، في حين أن التقنيات الكيميائية المناعية التقليدية لا يمكنها إجراء تحليل كمي للخلايا المناعية.
بالمقارنة مع تجارب الكيمياء المناعية التقليدية ، فإن التحليل الكيميائي المناعي الكمي للخلايا المناعية في بطانة الرحم له أهمية سريرية مهمة. عادة ما يتم تصنيف درجات كثافة IHC على مقياس من أربع نقاط أو قوي وضعيف في التشخيص المرضي والبحوث19،20،21. ومع ذلك ، فإن هذه التقنية شبه الكمية ذاتية وغير دقيقة إلى حد كبير ، وتوضح تباينا كبيرا داخل المراقب وبينالمراقبين 22. أحد الحلول الممكنة هو تطبيق التعلم الآلي ، وهو تحليل الصور الرقميةالقيمة 23,24. من خلال توفير قياسات كمية ، يتيح هذا النهج تقييما أكثر دقة لتسلل الخلايا المناعية وتوزيعها وكثافتها داخل أنسجة الرحم. يمكن أن تساعد هذه المعلومات الكمية في توضيح التغيرات الديناميكية في مجموعات الخلايا المناعية أثناء دورة الطمث وفي الحالات المرضية المختلفة. بشكل عام ، توفر القدرة على التحليل الكمي للخلايا المناعية في بطانة الرحم من خلال الكيمياء الهيستولوجية المناعية رؤى قيمة في البيئة المكروية المناعية للرحم.
لذلك ، يهدف البروتوكول إلى تطوير والتحقق من صحة منصة رقمية لتحليل صور الكيمياء المناعية المناعية لتحليل الخلايا المناعية البطانية الرحمية كميا بما في ذلك خلايا uNK و Tregs والبلاعم و DCs والخلايا التائية السامة للخلايا خلال المرحلة المتوسطة الصفراء في مرضى RM.
أنشأ هذا البروتوكول منصة رقمية لتحليل صور الكيمياء المناعية لتحليل الخلايا المناعية البطانية لمرضى RM كميا. هنا ، تم الكشف عن ست علامات مناعية بطانة الرحم لتقييم البيئة الدقيقة المناعية بطانة الرحم في مرضى RM.
بطانة الرحم الاستقبالية خلال المرحلة المتوسطة الصفراء هي مفتاح ن…
The authors have nothing to disclose.
المؤلفون ممتنون لجميع النساء اللواتي وافقن وتبرعن بعينات لهذه الدراسة.
Automated coverslipper | Sakuraus | DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2 | |
CD163 | GrowGn Biotechnology | NCL-L-CD163 | |
CD1a | Gene Tech | GM357129 | |
CD56 | Gene Tech | GT200529 | |
CD8 | Novocastra | NCL-L-CD8-4B11 | |
Dehydrator | Thermo Fisher | Excelsior ES | |
Digital pathology and | Indica labs | HALO | |
Foxp3 | YILIFANG biological | 14-477-82 | |
IHC stainer | Leica | BOND III | |
Image analysis platform | Indica labs | HALO | |
Slide Scanner | Olympus life science | VS200 |