德罗索菲拉心脏的准备：研究成人飞行中心脏生理学的技术

-与脊椎动物不同，德罗索菲拉心脏是开放循环系统的一部分。成年苍蝇的心脏是一种管状结构，由心肌细胞构建，由腹肌连接到表皮，并嵌入细胞外基质中。 心脏室位于苍蝇的后端，将血淋巴泵入主动脉，从主动脉流入开放的体腔。

在昆虫中，血淋巴既是血液又是间质液，携带营养物质、信号分子和免疫细胞。 心脏的其他特征包括沿着管子开口的奥斯蒂娅和心肌瓣膜。腹膜细胞沿着心管局部化，是苍蝇排泄系统的一部分。

在实验性心脏制备中，人工淋巴模仿生理条件以保持组织功能。 虽然天然淋巴不负责气体交换，但人工淋巴必须充分含氧，以取代缺乏功能性气管系统。 在下面的实验中，我们演示了成人苍蝇为实时成像或电生理学而进行半完整的心脏准备。

-在开始之前，我们首先准备了一个人工淋巴溶液。 此溶液包含蔗糖和三氯蔗糖，应在使用前从冷藏库存溶液中添加到人工淋巴中，以防止细菌污染。将人工淋巴带到室温下，通过空气冒泡使溶液含氧至少15分钟。

接下来，使用标准的移液器拉拔器拉几根细毛细管，这是去除苍蝇脂肪体所需。

一旦一切准备就绪，成年苍蝇必须麻醉。 这可以通过短暂接触来完成，可以小睡两到五分钟，但要小心不要让苍蝇在飞行中小睡超过五分钟。 短期接触寒冷也可用于麻醉苍蝇，但不建议使用二氧化碳，因为它对心率和节律有更持久的影响。

接下来，麻醉苍蝇被放置，向后侧向下， 变成用薄薄的石油果冻涂上一层的培养皿。翅膀和身体的疏水角质层应可逆地粘在果冻上，但如果需要，可以重新定位苍蝇。初始切割使用弯曲的弹簧剪刀进行。 这是通过将剪刀刀片放在苍蝇的腿下，向下倾斜到颈部附近的胸腔的背表面。

头部、腹神经带和腿部被切除了一次。 切割后，制剂将浸入含氧的人工淋巴溶液中。使用弹簧剪刀，腹部后尖由腹部段 7和 8 组成，只需一次切口即可取出。这提供了沿腹部两个边缘进行横向切割的通道，并有助于切断后肠和腹部角质层之间的连接。

将剪刀的叶片插入腹部尖端的小开口，横向切割角质层。这释放了腹角膜的一个边缘。用钳子抓住皮瓣，沿着腹部的对面边缘进行类似的切口。 现在可以去除腹腔角的释放皮瓣。

肠道和其他腹部器官通常可以删除作为一个单一的质量使用珠宝商钳子和温柔的拉扯。 取出内脏会露出跳动的心脏管，它仍然被小腹肌附着在后部角质层上，周围是脂肪体。拉毛细血管入塑料中， 1 / 16 英寸的管子连接到真空源上。吸力与尖端直径成正比，因此不应使用直径大于 40 微米尖端的移液器。

一旦建立，这个吸气系统用于从心管周围吸走多余的脂肪。 它也可以用来去除在皮质层和任何碎屑周围积聚的气泡。必须格外小心，避免接触心脏本身，而且由于心脏的后部非常脆弱，因此应完全避免该区域。 成人德罗索菲拉心管现在暴露，应该跳动。

如有必要，通过轻轻地将切片从石油果冻中抬起并小心地将其驯服下来，可以重新定位内质层和附着的心脏， 再次避免与心脏组织的任何接触。此时，应将沐浴准备的溶液替换为新鲜的人工淋巴。应允许这种制剂在进行任何操作之前与氧合平衡 20到 30 分钟。如果制剂要保持超过60分钟，则应重新注入新鲜的人工淋巴。 这种制备现在已准备好用于光学记录，并且可以也用于电生理记录或组织学操作。