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ट्रिप्टोफान-एएनएस FRET का अध्ययन करने के लिए एक रिकॉम्बिनेंट सीए2 +-ATPase N-डोमेन में ट्रिप्टोफान अवशेषों का रासायनिक संशोधन
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Chapters
- 00:03Introduction
- 01:15Determination (in silico) of the ANS and SERCA N‐Domain Interaction
- 03:09Expression and Purification of the Recombinant N‐Domain
- 03:39Monitor the Formation of the ANS‐N‐Domain Complex Based on ANS and N‐Domain Fluorescence Intensity Changes
- 07:38N‐Domain Intrinsic Fluorescence Titration by Trp Chemical Modification with NBS
- 08:43Titrate the NBS Modified N‐Domain with ANS by Recording Fluorescence Spectra at 25°C
- 09:37Evidence of ANS Binding to the Chemically Modified N‐Domain by Excitation at λ = 370 nm
- 10:32Results Overview
- 11:30Conclusions
ANS सीए2 +-ATPase recombinant N-डोमेन के लिए बांधता है। फ्लोरेसेंस स्पेक्ट्रा 295 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर उत्तेजन पर एक FRET की तरह पैटर्न प्रदर्शित करता है। टीआरपी का एनबीएस-मध्यस्थता रासायनिक संशोधन एन-डोमेन के फ्लोरेसेंस को quenches करता है, जिससे टीआरपी अवशेषों और एएनएस के बीच ऊर्जा हस्तांतरण (FRET) की अनुपस्थिति होती है।
