Journal
/
/
שינוי כימי של שאריות טריפטופן ב- Ca רקומביננטיCa 2 +-ATPase N-דומיין לחקר טריפטופן-ANS FRET
JoVE Journal
Biochemistry
Author Produced
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Biochemistry
Chemical Modification of the Tryptophan Residue in a Recombinant Ca2+-ATPase N-domain for Studying Tryptophan-ANS FRET
DOI:

12:07 min

October 09, 2021

,

Chapters

  • 00:03Introduction
  • 01:15Determination (in silico) of the ANS and SERCA N‐Domain Interaction
  • 03:09Expression and Purification of the Recombinant N‐Domain
  • 03:39Monitor the Formation of the ANS‐N‐Domain Complex Based on ANS and N‐Domain Fluorescence Intensity Changes
  • 07:38N‐Domain Intrinsic Fluorescence Titration by Trp Chemical Modification with NBS
  • 08:43Titrate the NBS Modified N‐Domain with ANS by Recording Fluorescence Spectra at 25°C
  • 09:37Evidence of ANS Binding to the Chemically Modified N‐Domain by Excitation at λ = 370 nm
  • 10:32Results Overview
  • 11:30Conclusions

Summary

Automatic Translation

ANS נקשר לתחום N רקומביננטי של Ca2+ATPase. ספקטרום פלואורסצנטי מציג תבנית דמוית FRET עם עירור באורך גל של 295 ננומטר. שינוי כימי בתיווך NBS של Trp מרווה את הפלואורסצנטיות של N-domain, מה שמוביל להיעדר העברת אנרגיה (FRET) בין שאריות Trp ו- ANS.

Related Videos

Read Article