Implantação de engenharia de tecidos no coração de ratos

Summary

Aqui, descrevemos um procedimento de cirurgia cardíaca para implante de engenharia de tecidos na atrioventricular (AV)-groove de um rato Lewis adulto.

Abstract

Cirurgia de roedores é muitas vezes um componente importante na avaliação da utilidade de tecidos artificiais. Uma grande variedade de procedimentos cirúrgicos podem ser realizados em ratos de laboratório comum ou ratos e estes muito freqüentemente serve como um passo intermediário entre a bancada experimentos e testes em animais grandes ou testes em humanos. Dado que os roedores fornecer um sistema modelo estabelecido, o custo-benefício, e fisiologicamente relevantes em que para testar novas combinações de materiais de andaime e células, elas são particularmente bem adequada para estudos de engenharia de tecidos cardiovasculares. Atualmente, descrevemos um procedimento de coração aberto cirúrgico para implante de engenharia de tecidos que contêm células progenitoras miogênica no atrioventricular (AV) sulco de um coração de rato. Estes implantes têm a intenção de criar um conduto elétrico entre o átrio direito eo ventrículo direito com o objetivo final de oferecer um tratamento alternativo para implante de marcapasso convencional em pacientes pediátricos com bloqueio cardíaco completo [1]. A engenharia de tecidos é implantado na AV-groove por meio de uma toracotomia. Para nossos propósitos, ratos Lewis são anestesiados e ventilados invasiva para manter a pressão positiva nas vias aéreas durante o procedimento cirúrgico estéril. A abordagem do coração é realizada por uma toracotomia direita através de uma incisão ântero-lateral na 5^Th Espaço intercostal. A construção do tecido é fixada no sulco AV usando uma sutura Prolene 7-0 única e posicionado entre o ventrículo direito e átrio na porção ventral do coração. O epicárdio é parcialmente removido para permitir o contato direto entre as células receptoras do miocárdio e os contidos na engenharia de tecidos. Após a implantação, a parede torácica é fechada em camadas, qualquer pneumotórax é evacuado, e que o animal é extubado e tratada com analgésicos.

Protocol

Parte 1: Indução de anestesia geral A 200-250 g de ratos Lewis é anestesiados com ketamina 50 mg / kg e 4 Xilazina mg / kg injetado com uma agulha G 30 na cavidade intraperitoneal. Parte superior do abdômen e no peito direito são recortados para remover os pêlos eo local da incisão cuidadosamente limpos com álcool 70% e, em seguida, um iodopovidona solução anti-séptica tópica. O animal é entubado endotraqueal usando um cateter 16 G intravenosa conectado a um respirador para pequenos ani…

Discussion

Para um resultado favorável ao procedimento cirúrgico, é fundamental à adequada entubar e ventilar o animal invasiva. Se o rato é simplesmente sedado e permitiu a respirar espontaneamente, ambos os pulmões, inevitavelmente, colapso, enquanto o tórax é aberto devido a pleura comuns em roedores. Antes de fechar o tórax, pneumotórax qualquer precisa ser completamente eliminada e os pulmões completamente expandido para reduzir a atelectasia. Caso contrário, o desmame do respirador e recuperação será mal suced…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
7×4 Thermo Pad 4/box	Equipment	Hood Thermo-Pad, Summerland, BC Canada	MODEL 704R
Inspira ASV Ventilator	Equipment	Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA
Handheld Pulse Oximeter	Equipment	Nellcor, Boulder, CO 80301 USA	N20PA
Retractor	Equipment	Roboz, Gaithersburg, MD 20898 USA	RS-6514
Isoflurane (Forane)	Reagent	Baxter	1001936040
Ketamine HCl	Reagent	HOSPIRA Inc., Lake Forest, IL 60045	RL-0065
Xylazine (AnaSed)	Reagent	Lloyd	LB15705A
Buprenorphine HCL Inject	Reagent	Bedford Labs, Bedford, OH 44146 USA	Div-BUP-P00
Bupivacaine 0.25%	Reagent	HOSPIRA Inc., Lake Forest, IL 60045