住在果蝇眼睛成虫光盘胶质细胞迁移成像
Summary
在这里，我们描述了一个协议，以研究胶质细胞迁移到发展果蝇眼睛使用现场的微观分析与GFP标记的神经胶质细胞配对。
Abstract
脊椎动物和无脊椎动物的生物的神经胶质细胞迁移到最终目标地区，以ensheath，并支持相关的神经元。虽然最近已经取得了进展来形容发展蛹翼（1），研究神经胶质细胞的实时迁移<em>果蝇</em>胶质细胞迁移，通常涉及固定组织的考试。生活的游动细胞的微观分析提供了在整个迁徙过程中，包括确定率和生长方向的变化细胞行为能力的考查。配合使用基因工具，实时成像可以被用来确定在发展过程中特定基因的更精确的角色。以往的工作由Silies<em>等。</em>（2）描述来自光秆，一个发展中国家的眼睛和大脑的结构连接的神经胶质细胞迁移，进入眼内固定的组织成虫光盘。在这里，我们研究神经胶质细胞的实时迁移到一个协议大纲<em>果蝇</em>眼成虫光盘。我们采取了一个果蝇线的优势，遵循在野生型和突变体动物的神经胶质细胞的进展，对发展中的神经胶质细胞的GFP。
Protocol
第1部分：预实验设置。 提前一周，队友苍蝇产生幼虫，表达绿色荧光蛋白胶质特异性启动子的控制下。对于我们的实验中，我们的可视化与核本地化，在采用反极性（回购）子（3，4）的神经胶质细胞中的表达序列标签的GFP。 准备盖玻片提前至少一天18毫米的圆形盖玻片浸泡10分钟，在1％多聚- L -赖氨酸的解决方案和空气干燥过夜。 在实验前一天，浸泡70％乙醇过夜的…
Discussion
在这个协议中，我们描述了进入眼内的成虫光盘使用Live显微镜观察神经胶质细胞迁移。在我们的野生型的例子（图1，AD），我们使用核GFP标记神经胶质细胞的运动超过一小时的过程中，观察的眼睛光盘。在胶质细胞迁移的需要在我们的实验室目前正在研究的一个候选基因的突变体，我们观察到，在一个小时内（图1 EH）的拖延胶质细胞的细胞核内的光纤秸秆。我们的策略，可以适应可视化?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
帕特里克卡弗蒂是从博士后奖学金，加拿大多发性硬化症协会的支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. 유전학. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
Tags
Live ImagingGlial Cell MigrationDrosophila Eye Imaginal DiscVertebrate OrganismsInvertebrate OrganismsFinal Target RegionsEnsheath And Support NeuronsLive MigrationDeveloping Pupal WingMicroscopic AnalysisMotile CellsCellular BehaviorRate Of GrowthChanges In DirectionGenetic ToolsSpecific GenesDevelopment ProcessOptic StalkEye Imaginal DiscGFP ExpressionWild TypeMutant Animals
Cite This Article
Cafferty, P., Xie, X., Browne, K., Auld, V. J. Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc. J. Vis. Exp. (29), e1155, doi:10.3791/1155 (2009).