Live-Imaging van gliale cel migratie in de Drosophila Eye verbeelding Disc
Summary
Hier beschrijven we een protocol om de migratie van gliacellen te onderzoeken in de zich ontwikkelende Drosophila oog met behulp van levende microscopische analyse gecombineerd met GFP gelabelde gliacellen.
Abstract
Gliale cellen van zowel gewervelde en ongewervelde organismen moeten migreren naar uiteindelijke doelstelling regio's om te ensheath en te ondersteunen verbonden neuronen. Terwijl de recente vooruitgang is geboekt om de live-migratie van gliacellen te beschrijven in de ontwikkelingslanden popstadium vleugel (1), studies van<em> Drosophila</em> Gliale cel migratie hebben meestal gepaard met het onderzoek van vaste weefsel. Live-microscopische analyse van de beweeglijke cellen biedt de mogelijkheid om cellulaire gedrag te onderzoeken gedurende het migratieproces, inclusief het bepalen van de snelheid van en veranderingen in de richting van groei. Gepaard met het gebruik van genetische tools kunnen leven imaging worden gebruikt om meer precieze rol voor specifieke genen in het proces van ontwikkeling te bepalen. Eerder werk van Silies<em> Et al..</em> (2) heeft beschreven de migratie van glia afkomstig van de optische steel, een structuur die de zich ontwikkelende oog en de hersenen verbindt, in het oog denkbeeldige schijf in vaste weefsel. Hier schetsen we een protocol voor de behandeling van de live migratie van gliacellen in de<em> Drosophila</em> Oog imaginaire disc. We profiteren van een Drosophila lijn die GFP tot uitdrukking in de ontwikkeling van glia te volgen gliale cel progressie in wild type en in mutant dieren.
Protocol
Discussion
In dit protocol beschrijven we de observatie van gliale cel migratie in het oog denkbeeldige schijf met behulp van live-microscopie. In ons wild-type voorbeeld (figuur 1 AD), gebruikten we een nucleaire GFP marker om gliale cel beweging waarnemen in het oog disc in de loop van een uur. In een mutant voor een kandidaat-gen die nodig zijn voor gliale cel migratie momenteel onderzoek in ons laboratorium, zagen we een blokkering van gliale celkernen binnen de optische steel gedurende een periode van een uur (figuur…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty wordt ondersteund door een postdoctoraal fellowship van de Multiple Sclerose Vereniging van Canada.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. 유전학. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
