הדמיה חיה של נדידת תאים גליה את הדיסק העין דמותי תסיסנית
Summary
כאן אנו מתארים פרוטוקול לבחון את ההגירה של ותאי גלייה לתוך העין תסיסנית מתפתחות באמצעות ניתוח מיקרוסקופי לחיות יחד עם התאים GFP גליה מתויג.
Abstract
ותאי גלייה של חוליות והן חסרי חוליות האורגניזמים חייבים לנדוד לאזורים היעד הסופי כדי ensheath ותמיכה נוירונים הקשורים. למרות ההתקדמות האחרונות נעשה כדי לתאר את ההגירה של תאים חיים גליה באגף גלמי פיתוח (1), מחקרים של<em> תסיסנית</em> נדידת תאים גליה יש מעורבים בדרך כלל בדיקה של רקמת קבוע. ניתוח מיקרוסקופי של תאים חיים ניעתי מציעה את היכולת לבחון את התנהגות הסלולר לאורך כל תהליך הנדידה, לרבות קביעת שיעור ושינויים בכיוון של צמיחה. יחד עם שימוש בכלים גנטיים, הדמיה חיה יכול לשמש כדי לקבוע תפקידים מדויקת יותר עבור גנים ספציפיים בתהליך של פיתוח. עבודות קודמות על ידי Silies<em> Et al.</em> (2) תיאר את ההגירה של גליה שמקורם גבעול הראייה, מבנה שמחבר את עין בפיתוח המוח, לתוך דיסק העין דמותי ברקמות קבוע. כאן אנו מתאר פרוטוקול לבחינת הגירה של תאים חיים אל גליה<em> תסיסנית</em> עין דמותי דיסק. אנו מנצלים את קו תסיסנית המבטא GFP ב גליה פיתוח לעקוב אחר התקדמות תא גלייה בסוג פראי בחיות מוטציה.
Protocol
Discussion
בפרוטוקול זה אנו מתארים תצפית של נדידת תאים גליה לתוך הדיסק עין דמותי חיים באמצעות מיקרוסקופ. בדוגמה שלנו סוג בר (איור 1 לספירה), השתמשנו סמן GFP גרעיני לצפות תנועת התא גליה דיסק העין במשך שעה אחת. בשנת מוטציה של הגן מועמד נדרש נדידת תאים גליה כיום תחת מחקר במעבדה של…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
פטריק Cafferty נתמך על ידי מענק דוקטורט מן האגודה לטרשת נפוצה בקנדה.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. 유전학. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
