Live-Imaging von Gliazellen Migration in der Drosophila Eye Imaginalscheibe
Summary
Hier beschreiben wir ein Protokoll, um die Migration von Gliazellen in den Entwicklungsländern Drosophila Auge mit Live-mikroskopische Analyse mit GFP markierten Gliazellen gepaart untersuchen.
Abstract
Gliazellen der Wirbeltiere und wirbellose Organismen müssen Endziel Regionen wandern, um umhüllen und Unterstützung verbunden Neuronen. Während die jüngsten Fortschritte gemacht worden, um die Live-Migration von Gliazellen in den Entwicklungsländern Puppenstadium Flügel (1), Studium der Beschreibung<em> Drosophila</em> Gliazelle Migration haben in der Regel die Untersuchung von fixiertem Gewebe beteiligt. Live-mikroskopische Analyse von beweglichen Zellen bietet die Möglichkeit, zelluläre Verhalten in der gesamten Migrationsprozess, einschließlich der Bestimmung der Geschwindigkeit und Veränderung in Richtung des Wachstums zu untersuchen. Gepaart mit der Nutzung der genetischen Werkzeugen können Live-Aufnahmen verwendet werden, um genauere Rollen für bestimmte Gene in den Prozess der Entwicklung zu bestimmen. Frühere Arbeiten von Silies<em> Et al.</em> (2) hat die Migration von Glia aus der Optik Stiel, eine Struktur, die den Entwicklungsländern Auge und Gehirn verbindet beschrieben, in das Auge Imaginalscheibe in fixiertem Gewebe. Hier skizzieren wir ein Protokoll für die Prüfung der Live-Migration von Gliazellen in den<em> Drosophila</em> Auge Imaginalscheibe. Wir nutzen eine Drosophila Linie, die GFP zum Ausdruck in der Entwicklung Glia zu Gliazellen Progression in Wildtyp und Mutante in Tieren zu folgen.
Protocol
Discussion
In diesem Protokoll beschreiben wir Beobachtung von Gliazellen Migration in das Auge Imaginalscheibe mit Live-Mikroskopie. In unserem Wildtyp Beispiel (Abbildung 1 AD), verwendeten wir eine nukleare GFP Marker Gliazellen Bewegung in die Augen zu beobachten Disc im Laufe von einer Stunde. In einer Mutante für einen Kandidaten-Gen für Gliazellen Migration derzeit untersucht in unserem Labor erforderlich, beobachteten wir einen Stillstand der Glia-Zellkernen in der Optik Stiel während eines Zeitraums von einer …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty wird durch ein Postdoc-Stipendium von der Multiple Sclerosis Society of Canada unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. 유전학. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
