ショウジョウバエの眼成虫ディスクに付属してグリア細胞の移行のイメージングを生きる
Summary
ここでは、GFPタグ付きのグリア細胞とペアライブ顕微鏡分析を使用して開発をショウジョウバエの眼にグリア細胞の遊走を調べるためのプロトコルについて説明します。
Abstract
脊椎動物と無脊椎動物の生物の両方のグリア細胞はensheathするために、最終的な標的領域への移行と関連する神経細胞をサポートする必要があります。最近の進展は、開発途上蛹の翼（1）、の研究ではグリア細胞のライブマイグレーションを記述するためになされている一方で<em>ショウジョウバエ</em>グリア細胞の遊走は、通常、固定した組織の検査を含んでいた。運動性細胞のライブ顕微鏡分析は、速度と成長の方向の変化を決定するを含む渡り鳥プロセス、全体の細胞挙動を検査する能力を提供しています。遺伝学的ツールの使用と対に、ライブイメージングは、開発の過程で特定の遺伝子のためのより正確な役割を決定するために使用することができます。 Siliesで前の仕事<em>ら。</em>（2）固定組織における眼成虫原基に、眼茎、開発の目と脳を結ぶ構造に由来するグリア細胞の移行を説明しています。ここでは、中にグリア細胞のライブマイグレーションを検討するためのプロトコルの概要を説明<em>ショウジョウバエ</em>目の成虫原基。我々は、野生型および変異動物におけるグリア細胞の進行に従うことを開発するグリア細胞でGFPを発現し、ショウジョウバエのラインを活用する。
Protocol
Discussion
このプロトコルでは、ライブ顕微鏡を使用して目成虫原基にグリア細胞の遊走の観察を説明します。私たちの野生型の例（図1 AD）においては、我々は1時間かけ目のディスクにグリア細胞の動きを観察するために核GFPマーカーを使用。現在我々の研究室で研究されてグリア細胞の移行に必要な候補遺伝子の変異では、我々は、1時間の期間（図1 EH）の間に眼茎内のグリア細胞核の失速を…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
パトリックカフェルティは、カナダの多発性硬化症協会からのポスドクでサポートされています。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
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- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
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