Isolierung humaner Nabelschnur-Endothelzellen (HUVEC)
Summary
Dieses Video-Protokoll zeigt die Isolierung und Kultivierung der menschlichen Nabelschnur-Endothelzellen (HUVEC) aus humanen Nabelschnur. Nach der Isolierung dieser Zellen in vitro Angiogenese-Assays, wie die optimierte Fibringel Bead Assay auch durch die Hughes-Labor nachgewiesen werden kann, verwendet werden.
Abstract
Die Angiogenese ist ein komplexer mehrstufiger Prozess, in dem in Reaktion auf angiogene Stimuli, neue Schiffe aus dem bestehenden Gefäßsystem geschaffen werden. Diese Schritte sind: Abbau der Basalmembran, die Proliferation und Migration (sprießen) von Endothelzellen (EC) in der extrazellulären Matrix, die Ausrichtung der EG zu Schnüren, Lumenbildung, Anastomose, und die Bildung einer neuen Basalmembran. Viele in-vitro-Assays wurden entwickelt, um diesen Prozess zu studieren, aber die meisten nur imitieren bestimmte Stadien der Angiogenese und morphologisch die Schiffe oft nicht Schiffe in vivo ähneln. Hier zeigen wir ein in vitro-Angiogenese-Assay, der menschlichen Nabelvene EG und Fibroblasten nutzt optimiert. Dieses Modell rekapituliert alle wichtigen frühen Phasen der Angiogenese, und, noch wichtiger die Gefäße Display Patent interzellulären Lumen durch polarisiertes EG umgeben. Schiffe können leicht durch Phasen-Kontrast-und Zeitraffer-Mikroskopie beobachtet werden, und erholte sich in reiner Form für nachgelagerte Anwendungen.
Protocol
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1% Collagenase | 10ml per cord, warmed to 37°C | |||
| Tissue culture flasks | T75, one per cord. | |||
| Hanks medium | ||||
| scissors | sterile | |||
| beaker | sterile | |||
| 50 ml tubes |
