实时定量PCR(QRT – PCR)是一种有效的工具来诊断,在不同的昆虫组织和发育阶段的mRNA水平。在这份报告中,我们使用QRT – PCR在不同的幼虫组织确定的mRNA水平和侵入性的昆虫物种,白蜡窄吉丁的发展阶段。
白蜡窄吉丁(EAB,<em> Agrilus planipennis</em>)是一种外来入侵害虫,已造成以百万计的白蜡树(<em>白腊</em> SPP)在北美。<strong></strong> EAB继续迅速传播和攻击灰不同年龄的树木,从成熟的树木树苗。然而,迄今为止很少或没有分子知识的EAB存在。我们感兴趣的是破译的分子为基础的生理过程,在组织水平,援助的EAB成功定植白蜡树。在这份报告中,我们有效地利用实时定量PCR(QRT – PCR),以确定在不同的幼虫组织(包括肠,脂肪体和角质层)和不同发育阶段(包括1的表达水平<sup> ST</sup-> ND</sup> – ,3<sup> RD</sup-> TH</sup>龄,prepupae和成人)的EAB。作为一个例子,一个peritrophin基因(本文命名,<em> AP – PERI1</em>)例证感兴趣的基因和核糖体蛋白(<em> AP – RP1</em>)作为内部控制。 Peritrophins围食膜/矩阵(PM),这是昆虫肠道内壁的重要组成部分。下午有多种功能,包括消化和机械保护中肠上皮细胞。
获得每个样品定量RT – PCR板的阈值循环(CT)的价值。为了使标准曲线,Ct值,每个稀释度获得暗算其浓度的日志。实验样品的CT值,然后到这个系列稀释标准曲线的绘制。目标数量分别计算每一个实验,即组织和发育中的表达产生不同的标准曲线。相对表达值(REVS),然后确定内部控制获得的数量(AP – RP1)除以利益的目标序列的数量(在这种情况下,AP – PERI1 )。计算的意义,每个…
The authors have nothing to disclose.
我们承认卢尔德三角洲Arrueta安特克拉(昆虫学系,美国俄亥俄州立大学/ OARDC,伍斯特,俄亥俄州)提供的实验设置的帮助。我们感谢发送EAB幼虫样品贷瑞莎波兰博士(美国农业部森林服务,网络实名制)。帮助路易斯一个卡纳斯和Nuris中号阿科斯塔博士用显微镜设置赞赏。为这个项目提供了资金由国家拨俄亥俄州农业研究和发展中心,美国俄亥俄州立大学和联邦基金。