에메랄드 애쉬 보러에서 유전자 발현 분석 ( Agrilus planipennis)를 사용하여 정량 리얼 타임 PCR
Summary
정량 실시간 PCR (qRT – PCR)은 다른 곤충의 조직 및 발달 단계에서 mRNA 수준을 진단하는 효과적인 도구입니다. 이 보고서에서 우리는 다른 애벌레 조직에서 확인할 mRNA 레벨 및 침입 곤충의 종, 에메랄드 애쉬 송곳의 발달 단계에 qRT – PCR의 사용을 보여줍니다.
Abstract
에메랄드 애쉬 송곳 (EAB,<em> Agrilus planipennis</em>)하면 애쉬 나무의 수백만을 죽인이있는 이국적인 침입 해충 (수 있습니다<em> Fraxinus</em> 종) 북미 인치<strong></strong> EAB는 빠른 속도로 확산 계속해서 공격은 성숙 나무 묘목에서 다른 연령층의 나무 재가. 그러나, 거의 날짜 또는 어떤 분자 지식 EAB을 위해 존재하지. 우리는 조직 수준에서 분자 기반의 생리 과정을 해독에 관심이있다 애쉬 나무의 성공적인 식민지의 원조 EAB. 이 보고서에서 우리는 다른 애벌레 티슈 (midgut, 지방 기관 및 표피 포함) 및 다른 발달 단계 (1과 같은 확인할 mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR의 효과적인 사용 (qRT – PCR)을 표시<sup> 일</sup> – 2<sup> 차</sup> – 3<sup> 차</sup> – 4<sup> 일</supEAB의> – instars, prepupae 어른). 예를 들어, peritrophin 유전자 (이하라는,<em> AP – PERI1</em>)는 관심의 유전자와 ribosomal 단백질 (로 exemplified입니다<em> AP – RP1</em>) 내부 통제로. Peritrophins은 곤충 장의 내벽입니다 peritrophic 멤브레인 / 매트릭스 (PM)의 중요한 구성 요소입니다. PM은 소화 및 midgut의 상피에 기계적 보호 등 다양한 기능이 있습니다.
Protocol
Discussion
임계값주기 (CT)이 값은 qRT – PCR 플레이트의 각 샘플에 대해 얻을 수 있습니다. 표준 곡선을 만들기위한 각 희석에 대해 얻은 CT 값은 그 농도의 로그 역모를 꾸몄다했다. 실험 샘플에 대한 CT 값은 다음이 희석 시리즈 표준 곡선에 꾸몄다했다. 목표 수량은 각 실험 즉, 조직 발달 표현에 대해 생성된 별도의 표준 곡선으로부터 계산되었다. 상대 표현식 값 (REVs) 다음 내부 통제를 위해 얻은 수량 (AP …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 실험의 설정에 루르드 델타 Arrueta Antequera (곤충학학과, 오하이오 주립 대학 / OARDC, 우스터, OH)에서 제공하는 도움말을 인정합니다. 우리는 EAB 애벌레 샘플을 보내 박사 테레사 폴란드 (USDA, 포레스트 서비스, NRS) 감사합니다. 현미경 설치가 평가됩니다 박사와 루이스 카나스 및 Nuris M 아코 스타가 제공하는 데 도움이됩니다. 이 프로젝트에 대한 자금은 오하이오 농업 연구 개발 센터, 오하이오 주립 대학에 appropriated 주 및 연방 기금에 의해 제공되었다.
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