Дрожжи колонии Вложение Метод
Summary
Метод для встраивания дрожжей колонии позволяет срезов для световой и электронной микроскопии. Этот протокол позволяет определить распределение спорулированных клеток и pseudohyphal клеток в колонии предоставления новым инструментом на пути к пониманию организации типов клеток в течение грибковых сообщества.
Abstract
Структурирования различных типов клеток в эмбрионы является ключевым механизмом в развитии многоклеточных. Сообщества микроорганизмов, например, колоний и биопленок также отображать модели типов клеток. Например, в дрожжах S. CEREVISIAE, спорулированных клеток и pseudohyphal клетки не равномерно распределены в колониях. Функциональное значение структурирование и молекулярные механизмы, лежащие в основе этих моделей по-прежнему плохо изучены.
Одна из проблем, по отношению к исследованию моделей типов клеток в колонии грибов является то, что в отличие от многоклеточных тканей, клеток в колонии относительно слабо соединены друг с другом. В частности, грибковых колоний не содержат обширную же уровня внеклеточного матрикса в большинстве тканей. Здесь мы сообщаем о методе вложения и срезов дрожжей колонии, который показывает интерьер модели типов клеток в этих колониях. Метод может быть использован для подготовки толстым слоем (0,5 μ) полезно для световой микроскопии и тонкие срезы (0,1 μ), пригодных для просвечивающей электронной микроскопии. Сумки и pseudohyphal клетки могут легко отличить от яйцевидной дрожжевых клеток с помощью световой микроскопии, в то время как внутренняя структура этих клеток могут быть визуализированы на EM.
Метод основан на окружающих колонии с агар, проникновение их со средними Сперр, а затем секционирования. Колонии диаметром в диапазоне 1-2 мм подходят для этого протокола. В дополнение к визуализации интерьера колоний, метод позволяет выявлять области колонию, которая вторгается основной агара.
Protocol
Discussion
Метод, изложенный раскрывает внутренние структуры колоний. Потому что метод эффективен в определении структуры клеточных типов в диапазоне S. CEREVISIAE штаммов с различной морфологией колоний, а также в связанных с ними видов С. Парадоксальный 5, метод, вероятно, также работы по ш…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Исследование было профинансировано NIH 1R15GM094770.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Osmium tetroxide | Electron Microscopy Sciences | RT 19152 | ||
| Silicone embedding molds | Fisher Scientific | NC 9975029 | ||
| Cycloaliphatic epoxide resin | Electron Microscopy Sciences | RT 15004 | ERL 4221 | |
| Epoxy resin | Electron Microscopy Sciences | RT 13000 | DER 736 | |
| Nonenyl Succinic Anhydride | Electron Microscopy Sciences | RT 19050 | NSA | |
| 2-Dimethyl aminoethanol | Electron Microscopy Sciences | RT 13300 | DMAE | |
| Mounting media | KPL | 71-00-16 | ||
| Rotating wheel | Ted Pella | Pelco 1055 | ||
| Microtome | Leica | Ultracut S |
References
- Kimmel, A. R., Firtel, R. A. Breaking symmetries: regulation of Dictyostelium development through chemoattractant and morphogen signal-response. Curr Opin Genet Dev. 14, 540-540 (2004).
- Palkova, Z., Vachova, L. Life within a community: benefit to yeast long-term survival. FEMS Microbiol Rev. 30, 806-806 (2006).
- Shapiro, J., Vachova, L. The significances of bacterial colony patterns. Bioessays. 17, 597-597 (1995).
- Shapiro, J., Vachova, L. Thinking about bacterial populations as multicellular organisms. Annu Rev Microbiol. 52, 81-81 (1998).
- Engelberg, D. Multicellular stalk-like structures in Saccharomyces cerevisiae. J Bacteriol. 180, 3992-3992 (1998).
- Scherz, R., Shinder, V., Engelberg, D. Anatomical analysis of Saccharomyces cerevisiae stalk-like structures reveals spatial organization and cell specialization. J Bacteriol. 183, 5402-5402 (2001).
- Piccirillo, S. The Rim101p/PacC pathway and alkaline pH regulate pattern formation in yeast colonies. 유전학. 184, 707-707 (2010).
- Sniegowski, P. D., Dombrowski, P. G., Fingerman, E. Saccharomyces cerevisiae and Saccharomyces paradoxus coexist in a natural woodland site in North America and display different levels of reproductive isolation from European conspecifics. FEMS Yeast Res. 1, 299-299 (2002).
- Piccirillo, S., Honigberg, S. M. Sporulation patterning and invasive growth in wild and domesticated yeast colonies. Res Microbiol. 161, 390-390 (2002).
- Vachova, L. Architecture of developing multicellular yeast colony: spatio-temporal expression of Ato1p ammonium exporter. Environ Microbiol. , (2009).
