Comptage des cellules souches humaines
Summary
La connaissance du nombre exact de cellules viables est nécessaire pour de nombreuses manipulations culture de tissus. Ce protocole décrit comment différencier entre les cellules vivantes et mortes et de quantifier les cellules en utilisant un hématimètre. Bien qu'il décrit compter humaine souches neurales / cellules précurseurs (hNSPCs), il peut être utilisé pour d'autres types cellulaires.
Abstract
La connaissance du nombre exact de cellules viables dans un volume donné d'une suspension cellulaire est nécessaire pour les manipulations de routine de nombreux culture de tissus, comme les cellules de placage pour l'immunocytochimie ou pour transfections cellulaires. Ce protocole décrit une méthode simple et rapide pour différencier les cellules vivantes et mortes et de quantifier la concentration de cellules et nombre total de cellules en utilisant un hématimètre. Cette procédure exige d'abord détacher les cellules d'une surface de croissance et les remettre en suspension dans les médias. Ensuite, les cellules sont diluées dans une solution de bleu Trypan (idéalement à une concentration qui donne 20 à 50 cellules par quadrant) et placé dans le hématimètre. Enfin, la moyenne des chiffres de cellules viables dans plusieurs quadrants sélectionnés au hasard, en divisant la moyenne par le volume d'un 1 mm 2 quadrants (0,1 pi) et en multipliant par le facteur de dilution donne le nombre de cellules par litre En multipliant cette concentration cellulaire par le volume total en ul donne le nombre total de cellules. Ce protocole décrit le comptage humaine souches neurales / cellules précurseurs (hNSPCs), mais peut aussi être utilisé pour de nombreux autres types cellulaires.
Protocol
Discussion
Ce protocole décrit une méthode simple et rapide pour déterminer la concentration de cellules pour une variété d'expériences impliquant des cellules. Utiliser le raccourci décrit en 3D, on peut déterminer rapidement et précisément la concentration de cellules et nombre total de cellules dans un volume donné.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier le Dr Philip H. Schwartz, de la National des Ressources Humaines des cellules souches neurales à l'Hôpital des enfants s, Orange County Institut de recherche pour fournir des cultures hNSPC.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
References
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
