ヒト神経幹細胞を数える
Summary
生存細胞の正確な数の知識は、多くの組織培養の操作が必要です。このプロトコルは、生細胞と死細胞を区別し、血球計算盤を用いて細胞を定量化する方法について説明します。それはヒト神経幹/前駆細胞（hNSPCsを）数えて説明していますが、それは他の細胞型に使用することができます。
Abstract
細胞懸濁液の所定量中の生細胞の正確な数の知識は、このような免疫細胞または細胞のトランスフェクションに用いる細胞を播き、多くの日常的な組織培養の操作、が必要です。このプロトコルは、生細胞と死細胞を区別し、細胞濃度と血球計を用いて全細胞数を定量化するための簡単かつ迅速な方法を説明します。この手順は、最初の成長表面から細胞をデタッチし、メディアでそれらを再懸濁する必要があります。次に、細胞をトリパンブルー（理想的には象限当たり20から50まで細胞を与える濃度まで）の溶液で希釈し、血球計算盤に配置されます。最後に、1つの1 MM 2象限（0.1μL）および希釈係数を掛けるの体積で平均を割って、いくつかのランダムに選ばれた象限に生存細胞の数を平均化L.当たりのセル数を与える液中の総体積でこの細胞濃度を掛け合わせると総細胞数を与えます。このプロトコルは、ヒト神経幹/前駆細胞（hNSPCsを）数えて説明するだけでなく、他の多くの細胞種に使用することができます。
Protocol
Discussion
このプロトコルは、細胞を伴う実験の様々な細胞濃度を決定するために簡単かつ迅速な方法を説明します。 3Dで説明されているショートカットを使用して、一つは迅速かつ正確に細胞濃度と指定されたボリュームの総細胞数を決定することができます。
Acknowledgements
著者らは、子供の病院、hNSPC文化を提供するためのオレンジカウンティ研究所で国立ヒト神経幹細胞資源の博士フィリップH.シュワルツ氏に感謝します。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
References
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
