인간 신경 줄기 세포를 계산
Summary
가능한 세포의 정확한 수를 지식은 많은 조직 문화 조작이 필요합니다. 이 프로토콜은 살고 죽은 세포 사이의 차별과 hemacytometer를 사용하여 세포를 계량하는 방법에 대해 설명합니다. 그것이 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)를 계산 설명하지만, 그것은 다른 세포 유형에 사용할 수 있습니다.
Abstract
세포 현탁액의 주어진 볼륨에서 가능한 세포의 정확한 개수의 지식은 이러한 immunocytochemistry 또는 셀 transfections에 대한 도금 세포 많은 일상적인 조직 문화의 조작을 위해 필요합니다. 이 프로토콜은 살고 죽은 세포 사이의 차별과 세포 농도와 hemacytometer를 사용하여 전체 휴대폰 번호를 quantifying 위해 간단하고 빠른 방법을 설명합니다. 이 절차는 먼저 성장 표면에서 세포를 분리 및 미디어에서 그들을 resuspending 필요합니다. 다음, 전지 Trypan 파랑 (이상 사분면마다 20-50 세포를 줄 수있는 농도)의 용액에 희석하여 hemacytometer에 배치됩니다. 마지막으로, 한 1mm 2 사분면 (0.1 μl)와 희석 계수 곱한의 볼륨에 의해 평균 나누어 여러 무작위로 선택된 quadrants에서 가능한 세포의 수를 평균하면 나도 당 세포의 숫자를 제공합니다 μl의 전체 볼륨을하여 세포 농도를 곱한하면 전체 휴대폰 번호를 제공합니다. 이 프로토콜은 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)를 계산 설명뿐만 아니라, 많은 다른 세포 유형에 사용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
이 프로토콜은 세포를 포함하는 실험의 다양한 세포 농도를 결정하기 위해 간단한 신속한 방법을 설명합니다. 3D에서 설명하는 바로 가기를 사용하여, 하나는 신속하고 정확하게 세포 농도와 주어진 볼륨에서 전체 휴대폰 번호를 확인할 수 있습니다.
Acknowledgements
저자는 어린이의 병원, hNSPC 문화를 제공하는 오렌지 카운티 연구소 국립 인간 신경 줄기 세포 자원의 박사 필립 H. 슈워츠을 인정하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
References
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
