سريع<em> في الجسم الحي</em> فحص لاختبار المركبات neuromodulatory باستخدام نظام الألياف العملاق (GFS) من<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</emيوصف>. يمكن Nanoinjections في رأس الحيوان جنبا إلى جنب مع التسجيلات الكهربية من GFS كشف النشاط الحيوي لمركبات على الخلايا العصبية أو العضلات.
ويمكن استخدام مركبات الكشف عن النشاط في الجسم الحي، كخطوة أولى لتحديد المرشحين التي يمكن وضعها في 1،2 كلاء الدوائية. وضعنا رواية nanoinjection / الكهربية الفحص الذي يسمح للكشف عن الآثار تغييري من المركبات النشطة بيولوجيا على وظيفة الدائرة العصبية التي تتوسط استجابة الهروب في ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا 3،4. لدينا في فحص الجسم الحي، والذي يستخدم الألياف العملاق ذبابة الفاكهة نظام (GFS، الشكل 1) يسمح للفحص من أنواع مختلفة من المركبات، مثل الجزيئات الصغيرة أو الببتيد، ويتطلب سوى كميات ضئيلة للحصول تأثير. بالإضافة إلى ذلك، GFS ذبابة الفاكهة يقدم مجموعة كبيرة ومتنوعة من الأهداف الجزيئية المحتملة على الخلايا العصبية أو العضلات. الألياف العملاق (GFS) المشبك كهربائيا (GAP المفارق)، فضلا عن كيميائيا (الكوليني) في الصعود إلى عصبون Synapsing الطرفية (PSI) وTrochanteral Tergo الخلايا العصبية العضلية (TTMn) 5 </سوب>. هذه المبادرة إلى الاتصال (الخلايا العصبية الظهرية العضلات الطولية) DLMn يعتمد على Dα7 acetylcholine المستقبلات النيكوتينية (nAChRs) 6. وأخيرا، فإن الوصلات العصبية والعضلية (NMJ) من TTMn وDLMn ومع القفزة (الايراد) وعضلات الطيران (DLM) هي glutamatergic 7-12. هنا، نحن لشرح كيفية حقن كميات نانولتر من مركب، في حين الحصول على تسجيلات داخل الخلايا الكهربية من نظام الألياف العملاق 13 وكيفية رصد آثار مجمع على وظيفة من هذه الدائرة. نعرض خصوصية مقايسة مع سترات methyllycaconitine (MLA)، وهو خصم nAChR، والذي يعطل هذه المبادرة إلى DLMn اتصال ولكن ليس إلى GF TTMn اتصال أو وظيفة NMJ في الوثب أو عضلات الطيران.
قبل البدء في هذا الفيديو من الأهمية بمكان أن تشاهد بعناية وتصبح مألوفة مع الفيديو [جوف] بعنوان "تسجيلات الكهربية من مسار الألياف العملاق من melan د.والمقصود ogaster "من أوغسطين وآخرون 7، كما قدم شريط الفيديو هنا كما توسع لهذه التقنية القائمة. هنا نستخدم طريقة التسجيلات الكهربية والتركيز في التفاصيل فقط على إضافة nanoinjections تقرن وتقنية الرصد.
والأحيائي nanoinjection / الكهربية المقدمة هنا يسمح لفحص السريع للمركبات في الجهاز العصبي من ذبابة الفاكهة. هذه هي رواية في تقنية الجسم الحي الذي يتطلب كميات صغيرة من مركب للحصول تأثير على مجموعة متنوعة من الأهداف الجزيئية في دائرة العصبية جيدا تتميز. ويمكن استخد…
The authors have nothing to disclose.
نود أن نعترف أعضاء مختبر ماري ومختبر Godenschwege، في Yonezawa ألين وجه الخصوص، للتعليق عليها والمساعدة في هذا البروتوكول. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية R21NS06637 إلى منح وزير الخارجية وTAG، وكان يمول من قبل عدد AB الوطنية للعلوم جائزة مؤسسة 082925، URM: البيولوجيا التكاملية للباحثين في المستقبل.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Recording glass electrodes: borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | 1B100F-4 | 1.0mm OD, 0.58mm ID |
Stimulator | Grass Instruments | Model S48 | |
Amplifier | Getting Instruments Inc. | Model 5A | |
Data acquisition Software: Digidata | Molecular Devices | Model 1440A | |
Data collection software: pCLAMP | Molecular Devices | Version 10 | |
Stereomicroscope with fiber optic microscope ring illuminator | AmScope | SM-4T Model HL250-AR |
|
Dissecting scope for mounting | AmScope | SM-2TZ | |
Kite Manual Micromanipulator & Tilting Base | World Precision Instruments | Model # M3301 Kite: Model # KITE-M3-L |
|
Drosophila melanogaster Wild 10E genotype (wild type strain) | Bloomington Stock center | Stock # 3892 | |
Vertical pipette puller | David Kopf Instruments | Model 700c | |
Injection glass micropipettes: Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | Catalogue # 4878 | 1.14mm OD, 0.5mm ID |
Silicon oil | Fisher | Catalogue # S159-500 | |
Beveler | Sutter Instrument Co. | K.T. Brown Type Model # BV-10 |
|
Nanoliter2000 | World Precision Instruments | Catalogue # B203XVY | |
Blue food coloring | McCormick | N/A | Ingredients: Water, Propylene Glycol, FD&C Blue 1, and 0.1% Propylparaben (preservative). |
Methyllycaconitine citrate (MLA) | Tocris Bioscience | Catalogue # 1029 | |
Plastic wax sticks | Hygenic Corporation (Akron Ohio USA) |