מדידת לחץ חדרית השמאל עכברים עובריים ילודים המאוחרת
Summary
מדידת לחץ חדר שמאל (LV) בעכברים עובריים בילוד מתואר. הלחץ נמדד על ידי החדרת מחט מחוברת מתמר מלא נוזלים לתוך LV בהנחיית אולטרסאונד. יש להקפיד לשמור על תפקוד הלב תקין במהלך פרוטוקול הניסוי.
Abstract
לחץ הדם עולה באופן משמעותי במהלך ההתפתחות העוברית ואחרי לידה אצל בעלי חיים בעלי חוליות. בשנת העכבר, זרימת הדם ניתן לזהות 1 סביב יום עובריים (E) 8.5 1. סיסטולי שמאל (LV) החדר הוא 2 מ"מ כספית על E9.5 ו 11 מ"מ כספית על E14.5 2. על אלה באמצע בשלבים עובריים, LV נראה בבירור דרך בית החזה למדידות לחץ פולשניים, כי הצלעות ועור לא מפותחת. בין E14.5 ולידה (כ E21) שיטות הדמיה יש להשתמש כדי להציג LV. לאחר הלידה, כלומר עליית לחץ הדם של 30 – 70 מ"מ כספית מיום הלידה (P) 2-35 3. מעבר P20, לחץ הדם ניתן למדוד עם מצב מוצק צנתרים (כלומר מילר או Scisense). לפני P20, צנתרים אלו גדולים מדי לפיתוח עורקי של העכבר או לחץ הדם יש למדוד את משך מותאם אישית קטטר פלסטיק המחוברים מלאות נוזל מתמרים לחץ 3 או זכוכית micropipettes עו"דכאב כדי סרוו מתמרים לחץ ריק 4.
העבודה האחרונה שלנו הראו כי העלייה הגבוהה ביותר בלחץ הדם מתרחשת במהלך העוברי המאוחרות ועד לתקופה שלאחר הלידה המוקדמת בעכברים 5-7. זו עלייה גדולה בלחץ הדם עשויה להשפיע על השריר החלק הנייד (SMC) פנוטיפ בעורקים מתפתחות להפעיל אירועים mechanotransduction חשובים. המחלה האנושית, שבו תכונות מכניות של עורקים המתפתחות נמצאים בסכנה בשל פגמים חלבונים תאי מטריקס (תסמונת כלומר של מרפאן 8 ו היצרות מסתם אאורטלי Supravalvular 9) שינויים מהירים בלחץ הדם בתקופה זו עשויים לתרום פנוטיפ המחלה וחומרת באמצעות שינויים mechanotransduction אותות. לכן, חשוב להיות מסוגל למדוד את לחץ הדם משתנה במהלך עובריים בסוף שנות ותקופות היילודים בעכברי מודל למחלה האנושית.
אנו מתארים שיטה לחץ LV מדידה בסוףהעוברית (E18) ו המוקדמות לאחר הלידה (P1 – 20) עכברים. המחט מחוברת מתמר מלא נוזלים בלחץ מוכנס לתוך LV בהנחיית אולטרסאונד. הטיפול נלקח כדי לשמור על תפקוד הלב תקין במהלך פרוטוקול הניסוי, במיוחד עבור עכברים עובריים. הנתונים מייצגים מוצגים ואת המגבלות של פרוטוקול הם דנו.
Protocol
Discussion
הפרוטוקול המובא כאן מספק שיטה למדידת לחץ LV ב עובריים בסוף שנות ועכברים בילוד מוקדם. המגבלה העיקרית של פרוטוקול זה הוא הפתרון הזמני של המערכת לחץ. אותות הלחץ דיכא כפי שהוא נוסע מ LV באמצעות מחט כדי מתמר, ורק אומר ערכי לחץ ניתן להקליט. דעיכת ניתן למזער באמצעות מחט הגדול ב?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו מומנה, בין השאר, על ידי NIH מענקים HL087653 ו HL105314. כמה שיטות פותחו במעבדה של ד"ר רוברט Mecham באוניברסיטת וושינגטון בית הספר לרפואה.
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| High resolution ultrasound system | Visualsonics | Vevo 770 | Or other appropriate ultrasound system |
| High frequency ultrasound probes | Visualsonics | 708 and 707B | |
| Imaging platform and injection arm | Visualsonics | Imaging Station 2 | With ECG and temperature feedback control of platform |
| Pressure transducer | AD Instruments | MLT 844 | |
| Bridge amplifier | AD Instruments | ML221 | |
| Data acquisition system | AD Instruments | ML866 | |
| Data recording software | AD Instruments | LabChart | |
| Ring stand and clamp | Various suppliers | To hold pressure transducer during measurements | |
| 3-way stopcocks with luer connections, male lock | Cole Parmer | 30600-02 | |
| 1/16″ ID Tygon Tubing | Cole Parmer | 06408 | |
| Male and female luers w/ 1/16″ hose barb | Cole Parmer | 45510-50 45510-00 | |
| 24″ tubing with male and female luer at each end | Cole Parmer | 30600-60 | |
| 3 and 10 mL syringes | BD Biosciences | ||
| 30 and 25G needles | BD Biosciences | 1.5 inches in length | |
| Big Ben manometer | Riester | 1456-100 | |
| Saline | Various suppliers | ||
| Heparin | Various suppliers | ||
| Ultrasound gel | Parker | Aquasonic 100 | |
| Hair remover lotion | Nair |
References
- Ji, R. P. Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper. Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).
- Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S. Developmental changes in ventricular diastolic function correlate with changes in ventricular myoarchitecture in normal mouse embryos. Circ. Res. 93 (9), 857-865 (2003).
- Huang, Y., Guo, X., Kassab, G. S. Axial nonuniformity of geometric and mechanical properties of mouse aorta is increased during postnatal growth. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 290 (2), H657-H664 (2006).
- Ishii, T., Kuwaki, T., Masuda, Y., Fukuda, Y. Postnatal development of blood pressure and baroreflex in mice. Auton. Neurosci. 94 (1-2), 34-41 (2001).
- Le, V. P., Knutsen, R. H., Mecham, R. P., Wagenseil, J. E. Decreased aortic diameter and compliance precedes blood pressure increases in postnatal development of elastin-insufficient mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2011).
- Wagenseil, J. E. Reduced vessel elasticity alters cardiovascular structure and function in newborn mice. Circ. Res. 104 (10), 1217-1224 (2009).
- Wagenseil, J. E. The importance of elastin to aortic development in mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299 (2), H257-H264 (2010).
- Ramirez, F., Sakai, L. Y., Rifkin, D. B., Dietz, H. C. Extracellular microfibrils in development and disease. Cell. Mol. Life Sci. 64 (18), 2437-2446 (2007).
- Li, D. Y. Elastin point mutations cause an obstructive vascular disease, supravalvular aortic stenosis. Hum. Mol. Genet. 6 (7), 1021-1028 (1997).
- Roth, D. M., Swaney, J. S., Dalton, N. D., Gilpin, E. A., Ross, J. Impact of anesthesia on cardiac function during echocardiography in mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (6), H2134-H2140 (2002).
- Phoon, C. K. Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development. Pediatr. Res. 60 (1), 14-21 (2006).
