Medindo a pressão ventricular esquerda (LV) em ratinhos embrionárias e neonatal é descrito. A pressão é medida através da inserção de uma agulha ligada a um transdutor cheio de fluido para o VE sob a orientação de ultra-som. Cuidados devem ser tomados para manter a função cardíaca normal durante o protocolo experimental.
A pressão arterial aumenta significativamente durante o desenvolvimento embrionário e pós-natal em animais vertebrados. No rato, o fluxo sanguíneo é primeiro detectável por volta do dia embrionário (E) 8,5 1. Pressão sistólica do ventrículo esquerdo (LV) é de 2 mmHg em E9.5 e 11 mmHg na E14.5 2. Nessas fases mid-embrionárias, a LV é claramente visível através da parede torácica para medições de pressão invasiva, pois as costelas ea pele não estão totalmente desenvolvidos. Entre E14.5 e nascimento (aproximadamente E21) métodos de imagem deve ser usado para visualizar o LV. Após o nascimento, a média aumenta a pressão arterial de 30 a 70 mmHg desde o primeiro dia pós-natal (P) 2 – 35 3. Para além P20, a pressão arterial pode ser medida com cateteres de estado sólido (isto é, Millar ou Scisense). Antes de P20, estes cateteres são grandes demais para o desenvolvimento de artérias de rato e de pressão arterial deve ser medida com o costume puxado cateteres de plástico ligados a transdutores cheias de líquido de pressão ou 3 micropipetas de vidro attdoíam a servo-transdutores de pressão nulos 4.
O nosso trabalho recente demonstrou que o maior aumento na pressão sanguínea ocorre durante os embrionário tardios para período pós-natal precoce em ratinhos 5-7. Este grande aumento na pressão sanguínea pode influenciar o fenótipo da célula de músculo liso (SMC) em artérias em desenvolvimento e desencadear eventos mecanotransdução importantes. Na doença humana, onde as propriedades mecânicas das artérias desenvolvimento estão comprometidos por defeitos de proteínas da matriz extracelular (Síndrome ie Marfan 8 e estenose aórtica supravalvar 9) as mudanças rápidas na pressão sanguínea durante este período pode contribuir para o fenótipo e gravidade da doença através de alterações na mecanotransdução sinais. Portanto, é importante ser capaz de medir as alterações da pressão arterial durante embrionário tardias e períodos neonatais em modelos de ratos de doenças humanas.
Nós descrevemos um método para medir pressão do VE, no final deembrionário (E18) e pós-natal precoce (P1 – 20) camundongos. Uma agulha ligada a um transdutor de pressão cheio de fluido é inserido no ventrículo esquerdo sob a orientação de ultra-som. É tomado cuidado para manter a função cardíaca normal durante o protocolo experimental, especialmente para os ratos embrionários. Os dados representativos são apresentados e limitações do protocolo são discutidos.
O protocolo apresentado aqui fornece um método para medir a pressão no VE embrionário atrasado e cedo ratinhos neonatais. A principal limitação deste protocolo é a resolução temporal do sistema de pressão. O sinal de pressão é amortecido à medida que viaja a partir do VE, através da agulha para o transdutor, e apenas os valores médios de pressão pode ser gravado. O amortecimento pode ser minimizados através da utilização da maior agulha possível, mas a agulha deve caber dentro do lúmen do VE para dif…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado, em parte, pelo NIH concede HL087653 e HL105314. Alguns dos métodos foram desenvolvidos no laboratório do Dr. Robert Mecham da Universidade de Washington School of Medicine.
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
High resolution ultrasound system | Visualsonics | Vevo 770 | Or other appropriate ultrasound system |
High frequency ultrasound probes | Visualsonics | 708 and 707B | |
Imaging platform and injection arm | Visualsonics | Imaging Station 2 | With ECG and temperature feedback control of platform |
Pressure transducer | AD Instruments | MLT 844 | |
Bridge amplifier | AD Instruments | ML221 | |
Data acquisition system | AD Instruments | ML866 | |
Data recording software | AD Instruments | LabChart | |
Ring stand and clamp | Various suppliers | To hold pressure transducer during measurements | |
3-way stopcocks with luer connections, male lock | Cole Parmer | 30600-02 | |
1/16″ ID Tygon Tubing | Cole Parmer | 06408 | |
Male and female luers w/ 1/16″ hose barb | Cole Parmer | 45510-50 45510-00 | |
24″ tubing with male and female luer at each end | Cole Parmer | 30600-60 | |
3 and 10 mL syringes | BD Biosciences | ||
30 and 25G needles | BD Biosciences | 1.5 inches in length | |
Big Ben manometer | Riester | 1456-100 | |
Saline | Various suppliers | ||
Heparin | Various suppliers | ||
Ultrasound gel | Parker | Aquasonic 100 | |
Hair remover lotion | Nair |