A largo plazo Prueba de toxicidad letal con el Crustáceo Artemia franciscana</em

Summary

Este estudio se refiere al desarrollo y la estandarización de un protocolo metodológico para determinar el valor a largo plazo (14 días) toxicidad letal ejercida por las sustancias químicas, aguas residuales industriales o de aguas residuales y líquidos de muestras ambientales en el crustáceo de agua salada,<em> Artemia franciscana</em>.

Abstract

Nuestras actividades de investigación como objetivo el uso de métodos biológicos para la evaluación de la calidad ambiental, con especial referencia al agua salada / agua salobre y de sedimentos. La elección de los indicadores biológicos debe estar basada en el conocimiento científico confiable y, posiblemente, de la disponibilidad de procedimientos normalizados. En este artículo, presentamos un protocolo estandarizado que se utiliza el medio marino crustáceo Artemia para evaluar la toxicidad de productos químicos y / o de matrices ambientales marinas. Los científicos proponen que la artemia (Artemia) es un candidato adecuado para el desarrollo de un bioensayo estándar para la utilización en todo el mundo. Una serie de documentos han sido publicados sobre los efectos tóxicos de diversos productos químicos y sustancias tóxicas en artemia (Artemia). La principal ventaja de este crustáceo de los estudios de toxicidad es la disponibilidad total de los quistes secos, los cuales pueden ser inmediatamente utilizado en las pruebas y difícil cultivo no se exigió <sup> 1,2. Quiste basados ​​en ensayos de toxicidad son baratos, disponible de forma continua, sencilla y fiable y, por tanto una respuesta importante a las necesidades rutinarias de detección de toxicidad, por los requisitos de control industrial o con fines de regulación ^3. El método propuesto consiste en la mortalidad como criterio de valoración. El número de supervivientes se contaron y el porcentaje de muertes se calcularon. Las larvas se considera muerto si no realiza movimientos internos o externos durante varios segundos de observación ^4. Este procedimiento fue las pruebas estandarizadas de una sustancia de referencia (dodecil sulfato de sodio), y algunos resultados se presentan en este trabajo. En este artículo se acompaña de un vídeo que describe la realización de las pruebas de toxicidad de procedimiento, que muestra todos los pasos relacionados con el protocolo.

Protocol

1. Método Estándar Nuestras pruebas consiste en exponer larvas de Artemia a un intervalo de concentraciones de la sustancia o de una muestra de ensayo con el fin de determinar los niveles de concentración o dilución que pudieran causar la muerte del 50% de los organismos (CL 50) expuestos durante 14 días y cumplir con las condiciones definidas por este método. Si es necesario y posible, la siguiente también se puede determinar: a) el nivel de concentración que provo…

Discussion

Artemia es uno de los organismos de prueba más valiosas disponibles para los ensayos de ecotoxicidad y la investigación realizada hasta el momento nos permite afirmar que es posible sostener varias opciones relacionadas con el uso de Artemia en toxicología y ecotoxicología. Las características que hacen de este organismo en una especie adecuada para los bioensayos son: una amplia distribución geográfica, alta adaptabilidad a condiciones ambientales adversas y nutrientes variados, la cultura de l…

Materials

Produced by Loredana Manfra of Institute for environmental protection and research (ISPRA-Department of Environmental Quality Monitoring) and Federica Savorelli of Regional Agency for Environmental Protection (Emilia-Romagna, Italy).

Reference Members for the sub-working Group on the Artemia crustacean within the Biological Methods Group – Saltwater/Brackish Water and Sediment of the UNICHIM Commission on Water Quality (the institute for technical standardization operating in the chemical sector).

Videography and editing by Marco Pisapia of ISPRA (Scientific Advisory and Documentation Services).

Production Coordination by Anna Maria Cicero and Erika Magaletti of ISPRA (Department of Environmental Quality Monitoring).

We would like to thank the Regional Agency for Environmental Protection of Emilia-Romagna, Ferrara Branch and the Biological Methods Group – Saltwater /Brackish Water and Sediment of the UNICHIM Commission on Water Quality for their cooperation; Rossella Boscolo and Massimo Gabellini of ISPRA (Department of Prevention and Mitigation of Impacts) for their financial support; and the London School of Languages in Rome for their linguistic support.

Name of the reagent	Company	Product number
Sodium Dodecyl Sulfate	Sigma-Aldrich	L4390

Appendix

The algal media has to be prepared using analytical quality reagents.

A liter of nutrient solution is prepared by dissolving 300 g of NaNO₃, 30 g of KH₂PO₄ and 20 g of NH₄Cl in distilled water.

Four initial solutions (A, B, C, D) of minerals are prepared as follows:

• A liter of solution “A” containing 30 g of ZnSO₄ H₂O, 25 g of CuSO₄ 5 H₂O, 30 g of CoSO₄ 7 H₂O and 20 g of MnSO₄ H₂O in distilled water;
• A liter of solution “B” containing 50 g of FeCl₃ •6 H₂O in distilled water;
• A liter of solution “C” containing 25 g of Na₂MoO₄ •2 H₂O in distilled water;
• A liter of solution “D” containing 50 g di Na₂EDTA •2 H₂O in distilled water.

A liter of a final solution of minerals (solution “E”) is obtained adding aliquots of the above-mentioned solutions to distilled water. The following order of addition is recommended: 100 ml of solution “D”, 10 ml of solution “C”, 10 ml of solution “B” and 10 ml of solution “A”.

Three initial solutions (F, G, H) of vitamins are prepared as follows:

• A liter of solution “F” containing 100 mg of biotin in distilled water;
• A liter of solution “G” containing 10 g of thiamine in distilled water;
• A liter of solution “H” containing 100 mg of cobalamin in distilled water.

A liter of a final solution of vitamins (solution “I”) is obtained adding 10 ml of the three initial solutions to distilled water.

A liter of the algal media is prepared by dissolving 1 ml of the nutrient solution, 1 ml of the mineral final solution (solution “E”) and 1 ml of the vitamin final solution (solution “I”) in seawater. This latter may be obtained by dissolving recognized analytical quality reagents or a commercially available formulation in distilled or de-ionized water. Salt blends for creating the ideal saltwater are commercially available, e.g. the Instant Ocean mixtures. It is recommended the using of a seawater with salinity of 30 (±2) PSU and temperature of 20 (±1) °C.