تعايش التصاقي في الفئران: بروتوكول مفصل
Summary
التعايش الالتصاقي انضمام اثنين من الكائنات الحية يؤدي إلى تطوير نظام الدورة الدموية المشتركة. في هذا البروتوكول، ونحن تصف الخطوات الجراحية لتشكيل التعايش الالتصاقي اتصال بين الماوس من النوع البري والتأسيسية، معربا عن GFP الماوس.
Abstract
تعايش التصاقي هو اتحاد الجراحية اثنين من الكائنات السماح تقاسم الدورة الدموية. ربط الجلد من حيوانين يعزز تشكيل الأوعية الدموية الدقيقة في موقع الالتهاب. شركاء التعايش الالتصاقي مشاركة مستضدات المتداولة، وبالتالي خالية من رد فعل جهاز المناعة السلبية. وصف لأول مرة من قبل بول بيرت في عام 1864 1، وقد تم صقل الجراحة تعايش التصاقي بواسطة Bunster وماير في عام 1933 لتحسين البقاء على قيد الحياة الحيوانية 2. في البروتوكول الحالي، وانضم اثنين من الفئران جراحيا بعد تعديل Bunster وتقنية ماير. ترتبط الحيوانات من خلال مفاصل الكوع والركبة تليها مرفق من الجلد يمكن دعم قوي يحول دون الضغط على الجلد خياطة. هنا، نحن تصف بالتفصيل التعايش الالتصاقي الانضمام من كل مكان معربا عن GFP الماوس إلى البرية من نوع (WT) الماوس. بعد أسبوعين من الإجراء، يتم فصل زوج، ويمكن الكشف عن الخلايا GFP إيجابية من خلال تحليل تدفق cytometric في circulat الدمايون من الفأرة WT. والخيمرية الدم يسمح احد لدراسة إسهام الخلايا المنتشرة من حيوان واحد في الآخر.
Introduction
تعايش التصاقي، والانضمام إلى العمليات الجراحية في اثنين من الكائنات الحية، وكان أول وصف في عام 1864 من قبل بول بيرت باعتبارها وسيلة لتطوير نموذج لدراسة نظم الدورة الدموية المشتركة وتتألف من الانضمام للجلد والعضلات جدران اثنين من الفئران 1. تعايش التصاقي يعزز تشكيل الأوعية الدموية الدقيقة في موقع الالتهاب 3 وكان العديد من التطبيقات في الدراسات الفسيولوجية، مثل الاتصالات الهرمونية بين الغدة النخامية والغدد التناسلية وكذلك دور الكلى في ارتفاع ضغط الدم 4. واستخدمت كذلك للتحقيق في التوظيف ودمج الخلايا الاصلية في اتساع الأوعية الدموية 5، والهجرة من الخلايا الجذعية المكونة للدم 6، والاتجار اللمفاويات 7، وكذلك دور وحركية تعميم الخلايا الالتهابية أو وقف في الورم ورم خبيث 8،9، ومرض الاعصاب 10.
واحدة ميزة كبيرة من الأكاذيب تعايش التصاقيفي أن الحيوانات شراكة تقاسم المستضدات الشائعة المتداولة، مما يسمح الهجرة الخلية واتساع الأوعية الدموية دون إحداث رد فعل مناعي. الأهم من ذلك، ويسمان وآخرون أظهرت أن تعايش التصاقي بين الفئران الذكور والإناث لا يؤدي إلى تشكيل الأجسام المضادة المضادة HY 11.
في البروتوكول الأصلي التي وصفها بول بيرت وانضم الحيوانات اثنين معا من خلال اتصال الجلد والعضلات الجدران 1. ولكن هذه الطريقة تسبب ضغطا كبيرا على الحيوانات وأسفرت عن ارتفاع معدل الوفيات بسبب إصابة الجرح. منذ ذلك الحين، تم تعديل أسلوب تعايش التصاقي من قبل عدة مجموعات مع أبرزها هو موضوع البروتوكول المقترح من قبل Bunster وماير في عام 1933 2. وشملت طريقتهم الانضمام للمفاصل الكتف، تجاويف الجسم، والجلد، والسماح أفضل الدعم وألم أقل للحيوانات. في نفس الوقت، أدت الطريقة الجديدة في مجال الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية والحد الأدنى من دلالةانخفضت معدلات وفيات آبير. بروتوكول الموصوفة هنا هو تعديل للتقنية Bunster وماير التي هي أقل الغازية ويسمح الانضمام أكثر ثباتا. وهي ترتبط الفئران من خلال مفاصل الكوع والركبة وكذلك الجلد. هذا الانضمام يمنع تمديد الجلد وبالتالي يسبب ألم أقل والمضاعفات. نحن هنا وصف انضمامه من نوع البرية (WT) الماوس الكبار إلى GFP التأسيسي معربا عن الماوس. وتبين لنا أن أسبوعين بعد الجراحة يمكن أن نحقق 50٪ من الخيمرية الدم مما يدل على فعالية هذا الإجراء الجراحي لإنشاء نظام الدورة الدموية المشتركة.
Protocol
Representative Results
Discussion
طريقة تعايش التصاقي مناقشتها هنا يقدم الحد الأدنى من الصعوبات الفنية والنتائج في معدلات وفيات منخفضة. المرفق الركبة والكوع المفاصل هو تحسن كبير من Bunster وتقنية ماير. ومع ذلك، لا يزال الإجراء الغازية وبالتالي الحفاظ على ظروف معقمة طوال جراحة أمر حتمي. لمزيد من منع العد…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أود أن أشكر أدرين موسلي وLibuse Jerabek (ستانفورد) للحصول على المساعدة مع تقنية جراحية.
Materials
| Name of equipment | Company | Catalog number |
| Isoflurane-Phoenix | Clipper | NDC 57319-559-06 |
| Posi-Seal Induction Chamber | Molecular Imaging Products | AS-01-0530-SM |
| Portable Anesthesia System | Molecular Imaging Products | AS-01-0007 |
| Gaymer T Pump | Gaymar Industries, Inc | TP650 |
| Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp | TP-22G |
| Curved forceps | Roboz | RS-5101 |
| Scissors | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 |
| Needle holder | FST | FST 12501-13 |
| Electrical shaver | Oster | Golden A5 |
References
- Bert, P. Expériences et considérations sur la greffe animale. Journal de l’Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .
- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
- Waskow, C. Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation. Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).
- Finerty, J. C. Parabiosis in physiological studies. Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).
- Aicher, A., Heeschen, C. Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location. Circ. Res. 101, e102 (2007).
- Abe, S., Boyer, C., et al. Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).
- Donskoy, E., Goldschneider, I. Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice. J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).
- Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming. Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).
- Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. A transient parabiosis skin transplantation model in mice. Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).
- Ajami, B., Bennett, J. L., et al. Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life. Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).
- Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice. Transplantation. 37, 3-6 (1984).
