Parabiosis en ratones: un protocolo detallado
Summary
Parabiotic unión de dos organismos conduce al desarrollo de un sistema circulatorio compartido. En este protocolo, se describen los pasos quirúrgicos para formar una conexión parabiotic entre un ratón de tipo salvaje y un ratón que expresa GFP constitutiva.
Abstract
Parabiosis es una unión quirúrgica de dos organismos que permiten el intercambio de la circulación sanguínea. Colocación de la piel de dos animales promueve la formación de la microvasculatura en el sitio de la inflamación. Socios parabiotic comparten sus antígenos circulantes y por lo tanto están libres de la reacción inmunitaria adversa. Descrita por primera vez por Paul Bert en 1864 1, la cirugía parabiosis fue refinado por Bunster y Meyer en 1933 para mejorar la supervivencia de los animales 2. En el protocolo actual, dos ratones se unen quirúrgicamente tras una modificación de la técnica de Bunster y Meyer. Los animales están conectados a través de la articulación del codo y de la rodilla, seguido de la unión de la piel permitiendo un apoyo firme que impide que la tensión en la piel suturada. En este documento, se describe en detalle el parabiotic unión de un GFP ubicua expresando ratón a una de tipo salvaje (WT) de ratón. Dos semanas después del procedimiento, el par se separa y células positivas para GFP se puede detectar por análisis de citometría de flujo en la sangre circulanteion del ratón PESO. El quimerismo de la sangre permite examinar la contribución de las células circulantes de un animal en el otro.
Introduction
Parabiosis, uniéndose a la cirugía de dos organismos, fue descrita por primera vez en 1864 por Paul Bert como una manera de desarrollar un modelo para estudiar los sistemas circulatorios compartidos y consistió en la unión de la piel y paredes musculares de dos ratas 1. Parabiosis promueve la formación de la microvasculatura en el sitio de la inflamación 3 y ha tenido varias aplicaciones en estudios fisiológicos, tales como la comunicación hormonal entre la glándula pituitaria y de las gónadas, así como la función del riñón en la hipertensión 4. Se ha empleado más para investigar la contratación y la integración de las células progenitoras de la neovascularización 5, la migración de las células madre hematopoyéticas 6, y el tráfico de linfocitos 7, así como el papel y la cinética de células inflamatorias circulantes y tallos en la metástasis tumoral 8,9, y enfermedad neurodegenerativa 10.
Una ventaja importante de las mentiras parabiosisen que los animales asociado comparten antígenos circulantes comunes, lo que permite la migración celular y la neovascularización sin desencadenar una reacción inmunológica. Es importante destacar que, Weissman et al. Han demostrado que parabiosis entre los ratones macho y hembra no conduce a la formación de anticuerpos anti HY anticuerpos 11.
En el protocolo original descrito por Paul Bert los dos animales se unen entre sí a través de la conexión de la piel y paredes musculares 1. Este método, sin embargo, causó una gran tensión a los animales y se tradujo en una alta mortalidad debido a la infección de la herida. Desde entonces la técnica parabiosis ha sido revisado por varios grupos con ser el más predominante el protocolo propuesto por Bunster y Meyer en 1933 2. Su método incluye la unión de las articulaciones de escápula, las cavidades del cuerpo, y la piel, lo que permite un mejor apoyo y menos dolor para los animales. Al mismo tiempo, el nuevo método dio como resultado en la atención y sig post-operatorio mínimodisminuyó significativamente las tasas de mortalidad. El protocolo descrito en el presente documento es una modificación de la técnica de Bunster y Meyer que es menos invasiva y permite más firme unión. A saber, los ratones se conectan a través de las articulaciones del codo y de la rodilla, así como la piel. Esto evita que unirse a la extensión de la piel y por lo tanto causa menos dolor y las complicaciones. Aquí se describe la unión de un tipo salvaje (WT) de ratón adulto a un GFP constitutiva expresando ratón. Mostramos que dos semanas después de la cirugía que pueden alcanzar 50% de quimerismo en la sangre que demuestra la eficacia de este procedimiento quirúrgico para crear un sistema circulatorio compartido.
Protocol
Representative Results
Discussion
El método parabiosis discutido aquí presenta dificultades técnicas mínimas y los resultados de las tasas de mortalidad bajas. La unión de las articulaciones de rodilla y de codo es una mejora significativa de la Bunster y la técnica Meyer. Sin embargo, el procedimiento sigue siendo invasiva así el mantenimiento de las condiciones estériles durante toda la cirugía es imperativo. Para prevenir una infección del sitio quirúrgico, es importante que los animales parabiosed reciben una combinación de antibióticos…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer a Adriane Mosley y Libuse Jerabek (Stanford) para obtener ayuda con la técnica quirúrgica.
Materials
| Name of equipment | Company | Catalog number |
| Isoflurane-Phoenix | Clipper | NDC 57319-559-06 |
| Posi-Seal Induction Chamber | Molecular Imaging Products | AS-01-0530-SM |
| Portable Anesthesia System | Molecular Imaging Products | AS-01-0007 |
| Gaymer T Pump | Gaymar Industries, Inc | TP650 |
| Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp | TP-22G |
| Curved forceps | Roboz | RS-5101 |
| Scissors | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 |
| Needle holder | FST | FST 12501-13 |
| Electrical shaver | Oster | Golden A5 |
References
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- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
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