Summary
Parabiótico junção dos dois organismos conduz ao desenvolvimento de um sistema circulatório compartilhado. Neste protocolo, descrevemos os passos cirúrgicos para formar uma conexão parabiótico entre um rato do tipo selvagem e um rato expressando GFP constitutiva.
Abstract
Parabiose é uma união cirúrgica de dois organismos, permitindo a partilha da circulação sanguínea. Colocar a pele de dois animais promove a formação de microvasos no local da inflamação. Parceiros parabiótico compartilhar seus antígenos circulantes e, portanto, estão livres de reação imune adversa. Descrita pela primeira vez por Paul Bert, em 1864 1, a cirurgia parabiose foi refinado por Bunster e Meyer em 1933 para melhorar a sobrevivência de animais 2. No protocolo de corrente, dois ratinhos são unidas cirurgicamente na sequência de uma alteração da técnica de Bunster e Meyer. Os animais são conectadas através das articulações do cotovelo e joelho seguido por uma ligação da pele permitindo um apoio firme que impede pressão sobre a pele suturada. Relata-se em detalhe a parabiótico união de um GFP onipresente expressar mouse para um tipo selvagem (WT) mouse. Duas semanas após o procedimento, o par é separada e as células positivas para GFP pode ser detectada por meio de análise de citometria de fluxo no sangue circulanteíon do camundongo WT. O quimerismo sanguíneo permite examinar a contribuição das células circulantes de um animal no outro.
Introduction
Parabiose, juntando-se a cirurgia de dois organismos, foi descrita pela primeira vez em 1864 por Paul Bert, como forma de desenvolver um modelo para o estudo de sistemas circulatórios compartilhados e consistiu na junção da pele e paredes musculares de dois ratos 1. Parabiose promove a formação de microvasos no local de inflamação 3 e tem tido várias aplicações em estudos fisiológicos, tais como a comunicação hormonal entre a glândula pituitária e gónadas, bem como o papel da hipertensão renal em 4. Foi ainda utilizado para investigar o recrutamento ea integração de células progenitoras na neovascularização 5, migração de células-tronco hematopoéticas 6 e tráfico de linfócitos 7, bem como o papel ea cinética de circular células inflamatórias ou resultam em metástase do tumor 8,9, e doenças neurodegenerativas 10.
Uma vantagem significativa de mentiras Parabioseem que os animais parceria compartilham antígenos circulantes comuns, permitindo a migração de células e neovascularização, sem desencadear uma reação imunológica. Importante, Weissman et al. Demonstraram que parabiose entre ratinhos macho e fêmea não conduz à formação de anticorpos anti HY 11.
No protocolo original descrito por Paul Bert os dois animais foram unidos por meio de ligação da pele e do músculo paredes 1. Este método, contudo, provocou pressão significativa para os animais e resultou na elevada taxa de mortalidade devido à infecção da ferida. Desde então, a técnica parabiose foi revisto por vários grupos, sendo os mais predominante o protocolo proposto por Bunster e Meyer em 1933 2. Seu método incluído união das articulações escápula, cavidades do corpo e da pele, permitindo um melhor apoio e menos dor para os animais. Ao mesmo tempo, o novo método resultou em cuidados pós-operatórios mínimos e signifisignificativamente diminuído as taxas de mortalidade. O protocolo aqui descrito é uma modificação da técnica de Bunster e Meyer, que é menos invasivo e permite juntar mais firme. Nomeadamente, os ratinhos são ligados através do cotovelo e do joelho, assim como a pele. Esta união impede a extensão da pele e, por conseguinte, provoca menos dor e as complicações. Aqui nós descrevemos a união de um tipo selvagem (WT) rato adulto com uma GFP constitutivo expressar mouse. Nós mostramos que duas semanas após a cirurgia que podemos alcançar 50% de quimerismo sangue que demonstra a eficácia deste procedimento cirúrgico para criar um sistema circulatório compartilhado.
Protocol
Representative Results
Discussion
O método parabiose discutido aqui apresenta dificuldades e resultados técnicos mínimos em baixas taxas de mortalidade. A fixação do joelho e cotovelo é uma melhoria significativa da Bunster e técnica Meyer. No entanto, o procedimento invasivo permanece, assim, a manutenção de condições estéreis durante toda a cirurgia é imperativo. Para prevenir novas infecções do sítio cirúrgico, é importante que os animais parabiosed receber uma combinação de antibióticos e ser monitorizados regularmente. Para ass…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer a Adriane Mosley e Libuse Jerabek (Stanford) para obter assistência com a técnica cirúrgica.
Materials
| Name of equipment | Company | Catalog number |
| Isoflurane-Phoenix | Clipper | NDC 57319-559-06 |
| Posi-Seal Induction Chamber | Molecular Imaging Products | AS-01-0530-SM |
| Portable Anesthesia System | Molecular Imaging Products | AS-01-0007 |
| Gaymer T Pump | Gaymar Industries, Inc | TP650 |
| Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp | TP-22G |
| Curved forceps | Roboz | RS-5101 |
| Scissors | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 |
| Needle holder | FST | FST 12501-13 |
| Electrical shaver | Oster | Golden A5 |
References
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- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
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