Metabolik bozukluklar, insanlarda en yaygın hastalıklardan biri arasında yer alıyor. Genetik uysal bir model organizma D. melanogaster metabolizmasını düzenleyen yeni genleri tanımlamak için kullanılabilir. Bu çalışma da CO 2 üretimini ölçerek sinekler metabolizma hızı okuyan sağlayan nispeten basit bir yöntem tarif etmektedir.
Metabolik bozukluklar, insan sağlığını etkileyen sık görülen bir problemdir. Bu nedenle, metabolizmayı düzenleyen mekanizmaları anlamak çok önemli bilimsel bir iştir. İnsanlarda birçok hastalığa neden olan genler Drosophila farklı hastalıkların gelişiminde rol sinyal yolları incelemek için iyi bir model yapma, bir sinek homologunu var. Buna ek olarak, Drosophila tractability metabolizmasını düzenleyen yönelik yeni terapötik hedeflerin belirlenmesine yardımcı olması için genetik ekranlar kolaylaştırır. Bu türdeki bir süzgeçle gerçekleştirmek için sinekler metabolik durum değişiklikleri belirlemek için basit ve hızlı bir yöntem gereklidir. Genel olarak, karbon dioksit üretim substrat oksidasyon ve enerji harcaması, metabolik durumu hakkında bilgi veren iyi bir göstergedir. Bu protokolde sinekler CO 2 çıkışını ölçmek için basit bir yöntem tanıtmak. Bu teknik potansiyel metabolik hızını etkileyen genetik pertürbasyonların belirlenmesinde yardımcı olabilir.
Biyokimyasal Krebs döngüsü karbonhidratlar, yağlar, ve CO2 üretimi proteinlerden türetilen asetat oksidasyonu ile ATP üretir. Drosophila, O 2 giriş, doğrudan CO 2 çıkışı ile ilişkilidir ve metabolizma 1 düzeyini yansıtır. Bu durumda, CO2 çıkışının ölçümü başarılı yaşlanma ve metabolizma 2-5 ile ilgili çalışmalarda kullanılmıştır. İşte laboratuar herhangi bir özel ekipman gerektirmeden kadar onsekiz örneklerinde CO 2 üretimi ölçümü sağlayan, önceden tasarlanmış deney düzeneklerini değiştirdi. Diğerleri ve daha önce müsküler distrofi ilişkili protein, distroglikan (DG) 6-8 eksiktir sinekler metabolik oranlarındaki farklılıkları göstermek için bu yöntemi kullandık.
O oksidatif metabolizma için kullanılan 2 solunum atık olarak atılır CO 2, dönüştürülür. Inşaatel yapımı respirometers tion of O 2 tüketilen oranının belirlenmesi için izin veren tarif edilmektedir. Sinekler verimli gaz fazdan ortadan kaldırarak, CO2 absorbe sürülen bir madde ile kapalı bir kap içine yerleştirilir. Gaz hacmi (azalan basınç) içindeki değişiklik kapalı respirometredeki bağlı bir cam kılcal sıvı değiştirmesi ile ölçülür.
Diğerleri üzerinde bu tekniğin önemli avantajı maliyetidir. Önceki çalışmalar gaz analizörleri ve teknik olarak gelişmiş Respirometrik sistemlerini 1,9 kullanarak Drosophila CO 2 üretimini ölçtük. Daha karmaşık ekipman rağmen, burada tarif edilen yöntemin duyarlılığı rapor edilen değerlere (Tablo 1) benzer. Ayrıca, çeşitli gruplar Drosophila 4-6 göreceli metabolik oranlarını belirlemek için bu tekniğin varyasyonları kullandık. Bu nedenle, bu deney, reliab oluşturmak için kullanılabilirle, herhangi bir laboratuarda kurulum olabilir ve eğitim amaçlı kullanılabilecek özel ekipman alımı olmadan Drosophila metabolizması ile ilgili tekrarlanabilir veri.
Genel olarak, bir organizmanın metabolizmasını belirlemek için kabul edilen teknikler CO2 üretilen ölçmek için, tüketilen O 2, 3,4,9 ya da her ikisi. Olsa da, O 2 bir eşdeğer CO 2 bir eşdeğer oluşturur varsayılabilir, CO 2'nin tam oranı, üretilen 10, kullanılan alt-tabaka metabolik bağlıdır. Bu nedenle, doğru bir enerji birimi metabolik oranını belirlemek it O 2 tüketilen ve CO2 üretilen iki ölçmek gereklidir. Bu nedenle, burada tarif edilen yöntem, hayvanlara olup mutlak değeri arasındaki CO2 üretimi farklılıkların karşılaştırılması için özel olarak uygundur. Bizim teknik tim bir süre içinde birden fazla hayvan CO2 üretimi entegreBu nedenle e (1-2 saat) ve hayvanların aktivitesinin bir ortalamasını verir. Deney hayvanları ölçümü farklı aktivite düzeyleri ve ille metabolizmasını yansıtan olabilir kontrol hayvanlara göre daha az aktif olduğuna inanmak için bir neden varsa.
Bu protokol, biz sinekler CO 2 üretimini ölçmek için ucuz ve güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır. Biz bu deney yapmak için hızlı, kolay ve diğer çalışmalar 1, 6, 9 ile uyum içinde olan tekrarlanabilir verilerini oluşturur bulundu. Burada özetlenen protokol kolayca herhangi bir laboratuvarın bütçe ve mevcut materyalleri uyacak şekilde modifiye edilebilir. Her bir respirometredeki inşaat sürece odacık hava geçirmez olarak kalır uyarlanabilir. Ancak, daha uzun, daha ince m…
The authors have nothing to disclose.
Biz araştırma için fon Max-Planck Toplum teşekkür etmek istiyorum.
BlauBrand IntraMark 50µl micropipettes | VWR | 612-1413 | |
Soda Lime | Wako | CDN6847 | |
Eosine | Sigma | 031M4359 | Any dye that can create visible colorization of liquid can be used |
Thin Layer Chromatorgaphy (TLC) Developing Chamber | VWR | 21432-761 | Any transparent glass chamber that can be closed with the lid |
Anesthetizer, Lull-A-Fly Kit | Flinn | FB1438 | |
Power Gel Glue | Pritt | ||
1 ml pipett tips | Any | ||
Foam | Any | ||
Plaesticine Putty | Any | ||
Scalpel | Any | ||
Twezzers | Any |