Dissektion der Maus Bauchspeicheldrüse für histologische Analyse und Metabolic Profiling
Summary
Dieser video Artikel enthält eine ausführliche Demonstration der Verfahren erforderlich, um erfolgreich die Bauchspeicheldrüse von einer Maus entfernen durch Präparation für histologische Analyse und metabolic profiling.
Abstract
Wir haben die Bauchspeicheldrüse spezifischen Transkriptionsfaktor, 1a Cre-Rekombinase untersucht; Lox-Stop-Lox-Kristen Ratte Sarkom, Glycin, Asparaginsäure an das 12-Codon (Ptf1aCre / +; LSL-KrasG12D / +) Belastung als ein Modell des menschlichen pankreatischen Krebses Maus. Unsere aktuellen Studien soll neue metabolischen Biomarker der Bauchspeicheldrüsenkrebs Progression ermittelt. Wir haben durchgeführt, metabolic profiling von Urin, Kot, Blut, sowie Pankreas-Gewebe-Extrakte und histologische Analysen der Bauchspeicheldrüse, die Krebsentwicklung zu inszenieren. Die Maus-Bauchspeicheldrüse ist keine wohldefinierte solide Organ wie beim Menschen, sondern ist ein diffus verteilte weichen Gewebe, das nicht leicht zu erkennen ist von Einzelpersonen mit Maus Innere Anatomie nicht vertraut oder von Personen, die wenig oder gar keine Erfahrung durchführen Maus-Organ-Sektionen. Der Zweck dieses Artikels ist es, eine detaillierte schrittweise bieten visuelle Demonstration, Novizen bei der Entfernung der Maus Bauchspeicheldrüse durch Dissektion zu führen. Dieser Artikel sollte besonders wertvoll für Studenten und Forscher neue Forschung, die Ernte der Maus Bauchspeicheldrüse durch Präparation für metabolic profiling oder histologische Analysen benötigt.
Introduction
Die Maus hat ein wichtiges Tier Modell des menschlichen pankreatischen Krebses1,2entwickelt. In der Ptf1aCre / +; LSL-KrasG12D / + Maus-Modell, die Kristen Ratte Sarkom (K-Ras) Onkogen ist ausschließlich in der Bauchspeicheldrüse, was Einleitung von präkanzerösen Läsionen in der Bauchspeicheldrüse, bekannt als Pankreas intraepitheliale Neoplasie (liegen), dass der Fortschritt aktiviert zu pankreatischen duktalen Adenokarzinome, gemeinhin als PDACs3. Dieses Maus-Modell-System bietet eines der verfügbaren Tiermodelle für menschlichen pankreatischen Krebs4,5, mit dem zusätzlichen Vorteil, die sich die liegen innerhalb der ersten fünf Monate des Lebens und häufig Fortschritte PDAC innerhalb einer einzelne Jahr4,5, während Bauchspeicheldrüsenkrebs am häufigsten bei Menschen 60-70 Jahre alt tritt.
Extraktion der Bauchspeicheldrüse durch Dissektion aus der Ptf1aCre / +; LSL-KrasG12D / + Mäuse in verschiedenen Altersstufen ermöglicht detaillierte längs histologische Untersuchung der Entwicklung von Krebs in der Bauchspeicheldrüse PDAC3,4 von den frühesten Stadien der PanIN durch das Fortschreiten bis , 5. Ernte der Bauchspeicheldrüsenkrebs im Alter von fünf bis fünfzehn Monate Gewebe vorzubereiten Auszüge zu globalen Veränderungen im Pankreas4 Stoffwechsel zu charakterisieren, die auftreten, während der Übergang vom gesunden zum erkrankten Gewebe verwendet werden 6,7.
Dieser Artikel stellt eine komplette visuelle Anleitung die erforderlichen Schritte zum Ausführen einer Maus Bauchspeicheldrüse Extraktion und enthält Richtlinien für die Lagerung der Bauchspeicheldrüse zur weiteren Analyse. Dieses Handbuch wird für Einzelpersonen forschen auf andere Pankreas Erkrankungen, darunter Diabetes Typ I und besonders nützlich für Studenten und Forscher neu in Forschung, die Ernte von Pankreas Maus sollte gleichermaßen wertvoll sein Präparation für metabolic profiling oder histologische Analysen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bedeutung im Hinblick auf bestehende Methoden
Während andere informelle Videos von Maus Sezierungen vorhanden sind, in diesem video Artikel finden die ersten Profi-Qualität, Peer review, visuelle Demonstration aller die detaillierten Schritte erforderlich für die Extraktion und die Ernte von der Maus Bauchspeicheldrüse durch Dissektion10 . Mit der Bauchspeicheldrüse wird eine Hauptorgel für metabolische Aktivität und Insulin ermöglicht Produktion, Dissektion und Ernte d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MAK bestätigt Unterstützung für diese Arbeit von den National Institutes of Health / National Cancer Institute grant-Nummer – 1R15CA152985-01A1. Dieses Projekt wurde auch von Miami University Undergraduate Research Award Program, die Miami University Doktorat-Studium Möglichkeiten für Scholarship Program und der Miami University Sommer Scholars Program unterstützt.
Materials
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
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