조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 마우스 췌의 해 부

Summary

이 비디오 문서는 조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 해 부는 마우스에서 췌를 성공적으로 제거 하는 데 필요한 절차의 상세한 데모를 제공 합니다.

Abstract

우리는 조사 하 고 췌 특정 전사 인자, 1a cre-recombinase; lox 그만 lox-순 영 쥐 육, aspartic 산 12 codon에 글리신 (Ptf1a^{cre / +}; LSL-Kras^{G12D / +}) 인간 췌장암의 모델로 스트레인 마우스. 우리의 현재 연구의 목표는 췌장암 진행의 소설 대사 생체 식별 하입니다. 우리는 소변, 대변, 혈액, 그리고 췌 장 조직 추출, 뿐만 아니라 암 진행을 췌 장의 조직학 분석의 대사 프로 파일링을 수행 했습니다. 마우스 췌 하지 인간, 같은 잘 정의 된 고체 기관 이지만 오히려 마우스 내부 해부학에 익숙하지 않은 개인 또는 개인 거의 또는 전혀 경험 수행에 의해 쉽게 식별 되지 않으면 만들어진다 분산된 부드러운 조직 마우스 장기 해입니다. 이 문서의 목적은 현명한 상세한 제공 하는 시각적 데모 해 부에 의해 마우스 췌 장의 제거에 초보자 가이드. 이 문서는 특히 학생과 새로운 조사 대사 프로 파일링 또는 조직학 분석에 대 한 해 부에 의해 마우스 췌의 수확 필요로 하는 연구에 귀중 한 해야 합니다.

Introduction

마우스는 인간 췌장암^1,2의 중요 한 동물 모델로 떠오르고 있다. Ptf1a에서^{cre / +}; LSL Kra^{G12D / +} 마우스 모델, 쥐 육 (K-Ras) oncogene은 췌 장, 췌 장, 췌 장 intraepithelial 형성 (PanINs), 그 진행으로 알려져 있는 전 암 병 변의 결과에서 독점적으로 활성화 하는 순 영 췌 장 ductal adenocarcinomas로 일반적으로 불린다 PDACs³. 이 마우스 모델 시스템은 인간의 췌장암^4,5는 PanINs 삶과 자주 내 PDAC 진행의 첫 5 개월 이내 등장 추가 이용에 대 한 최상의 사용 가능한 동물 모델 중 하나는 반면 췌장암 가장 자주 발생 인 간에 있는 나이의 60-70 년 년^4,5, 단일.

Ptf1a에서 해 부에 의해 췌 장의 추출^{cre / +}; LSL Kr....

Protocol

비디오에서 실행 하 고 아래에 설명 된 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 마이애미 대학에 의해 승인.

1. 준비 및 자극 테스트

수술 절차, 수술 및 사후 작업 테이블에 대 한

1. 구축 두 가지 영역. 모든 재료와 필요한 기구 두 영역을 무대. 배기 후드
   1. 무대 운영 테이블. 절차의 지속적이 고 한 시 빨리 벗어나게 성능을 하는 방식으로 장비와 테이블 정렬.
   2. 같은 방에 있는 작업의 주요 테이블 근처 수술 후 테이블을 설정합니다. 절차를 통해 메 마른 환경으로 두 테이블을 유지.
2. 장소 다음 운영 테이블에 공급: 한 유리 항아리 뚜껑, 한 15 mL 튜브, 수술가 위, 70% 에탄올, 두 거품 보드, 두 집게, 두 개의 1 mL 21 게이지 주사기, 두 50 mL 튜브, 1 개의 원심 분리기 튜브의 한 짜기 병의 한 쌍 하나의 극저온 유리병, 4 외과 패드, 10 핀, 살 균 물티슈, 디스펜서 및 sharps 컨테이너.
3. 후 작업 테이블에는 다음 공급 장소: 액체 질소, 얕은 넓은의 4 L dewar dewar, 부동 microtube 랙, 수술가 위 한 쌍, 두 집게, 4 극저온 튜브, 및의 디스펜서 입 하나 하나 분석 ....

Results

그림 2 는 게시물 작업 영역 및 그림 1 운영 환경 영역에 대 한 개요를 보여준다. 이 설정은 최소한의 장비를 제공 하는 동안 준비, 개인에 가장 개인적인 필요에 맞게이 변경 하도록 선택할 수 있습니다. 프로토콜은 실험의 특정 요구에 따라 최적화 되어야 합니다. 이 절차는 필요 적절 한 euthanization⁹, 마우스의 생활을 종료 하는 방식으로 실시 됩니다. 연구원은 준비, 마우스 isoflurane 젖은 패드 (그림 3)와 함께 마 취 챔버에 배치 됩니다.

마우스 의식이 일단 마우스를 제거 하 고 보드에 등 쪽을 놓습니다. 발가락-핀치 절차 마우스 통증 .......

Discussion

기존의 방법에 관하여 의미
마우스 해의 다른 비공식적인 동영상 존재 하는 동안이 비디오 문서에서는 첫 번째 전문 품질, 피어 검토, 자세한 단계를 추출에 필요한 해^{10 부에 의해 마우스 췌의 수확의 모든 시각적 데모} . 신진 대사 활동 및 인슐린에 대 한 주요 기관 되 고 췌와 생산, 해 부와 췌의 수확 생리 특성¹¹의 보존에 대 한 수 있습니다. 췌, 분리 하 여 미래의 분석 샘플에 실시 수 있습니다. 이 절차는 비교와 같은 시간 프레임 내에 동일한 유기 체 내의 다른 조직에서 상호 작용의 연구에 대 한 수 있습니다.

기술의 한계
이 절차의 가장 큰 한계의 마우스의 생활, 경도 컬렉션 방지 및 동일한 마우스에서 여러 조직 샘플의 샘플링입니다. 나이, 성별, 또는 다른 수량자에 관련 된 트렌드를 분석 하기 위하여 횡단면 인구.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
유리병	코닝	3140-150	영상에 사용된 유리병은 단종되었습니다. 이것은 그것을 대체합니다.
유리병 뚜껑	Corning	9985-150	영상에 사용된 유리병 뚜껑은 단종되었습니다. 이것은 그것을 대체합니다.
15 mL 팔콘 튜브	Fisher Scientific	339650
수술용 가위	Fisher Scientific	9201
스퀴즈 병	Fisher Scientific	03-409-10DD
100% 에탄올	Fisher Scientific	22-032-103
포르말린	Fisher Scientific	245-684
폼 보드	테라팩	562908
겸자	Fisher Scientific	200205SHN
1 mL 21G 주사기	BD Biosciences	309624
50 mL 팔콘 튜브	Fisher Scientific	339652
2.0 mL 마이크로 원심분리기 튜브	Fisher Scientific	02-681-258
수술용 패드	Fisher Scientific	S67011
T-핀 길이:  2"	사전 상점 제품	X32T-05
살균 물티슈	전문 일회용품 국제 Inc.	Q85084
샤프 컨테이너	피셔 사이언티픽	14-827-122
분석 저울	마샬 사이언티픽	ME-AE200
4L 듀어	테일러-와튼	4LD
얕은 와이드 마우스 듀어	피셔 사이언티픽	F3087-V
플로팅 마이크로튜브 랙	VWR	60986-100
극저온 바이알 1.2 mL, 멸균	Fisher Scientific	10-500-25
이소감각(이소플루란)	Henry Schein 동물 건강	050033
액체 질소	라이트 형제	NIT-60-XX
마우스 크라스 균주	잭슨 연구소	OO8179
마우스 크레 균주	MMRRC	OOO435-UNC