Dissezione del Pancreas del Mouse per l'analisi istologica e Profiling metabolico
Summary
Questo video articolo fornisce una dimostrazione dettagliata delle procedure necessarie per rimuovere con successo il pancreas da un mouse tramite la dissezione per l’analisi istologica e profiling metabolico.
Abstract
Stiamo indagando il fattore di trascrizione specifico del pancreas, 1a cre-ricombinasi; ratto di salmone affumicato-fermata-salmone affumicato-Kristen sarcoma, glicina, l’acido aspartico pone al codone 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) ceppo il mouse come un modello di cancro del pancreas umano. L’obiettivo dei nostri studi attuale consiste nell’identificare nuovi biomarcatori metabolici della progressione del cancro del pancreas. Abbiamo eseguito il profilo metabolico di urina, feci, sangue ed estratti di tessuto del pancreas, come pure le analisi istologiche del pancreas per mettere in scena la progressione del cancro. Il pancreas del mouse non è un organo solido ben definito come negli esseri umani, ma piuttosto è un tessuto molle diffusamente distribuito che non è facilmente identificabile da parte di persone non hanno familiarità con l’anatomia interna del mouse o da individui che hanno poca o nessuna esperienza di prestazione dissezioni di organo del mouse. Lo scopo di questo articolo è quello di fornire una dettagliata graduale dimostrazione visiva per guidare i novizi nella rimozione del pancreas del mouse tramite la dissezione. Questo articolo dovrebbe essere particolarmente utile per gli studenti e gli investigatori di nuovo alla ricerca che richiede la raccolta del pancreas del mouse tramite la dissezione per profiling metabolico o analisi istologiche.
Introduction
Il mouse è emersa come un importante modello animale di cancro del pancreas umano1,2. Nel Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modello del topo, Kristen oncogene di ratto sarcoma (K-Ras) viene attivata esclusivamente nel pancreas, con conseguente apertura di lesioni precancerose del pancreas, conosciuto come neoplasia intraepiteliale pancreatica (PanINs), che il progresso per gli adenocarcinomi duttali pancreatici, comunemente come PDACs3. Questo sistema di modello del mouse fornisce uno dei migliori modelli animali disponibili per cancro del pancreas umano4,5, con l’ulteriore vantaggio che il PanINs emergono entro i primi cinque mesi di vita e frequentemente di progresso per PDAC entro un singolo anno4,5, considerando che il cancro del pancreas si verifica più frequentemente negli esseri umani 60-70 anni di età.
Estrazione del pancreas tramite la dissezione dal Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + topi alle varie età permette per un esame istologico longitudinale dello sviluppo del cancro del pancreas, che vanno dalle prime fasi PanIN attraverso la progressione a PDAC3,4 , 5. raccolta del pancreas alle età che variano da cinque a quindici mesi può essere utilizzata anche per preparare il tessuto estratti per caratterizzare i cambiamenti globali nel pancreas4 metabolismo che si verificano durante la transizione da sano al tessuto malato 6,7.
Questo articolo presenta una guida visiva completa i passaggi necessari per eseguire un’estrazione del pancreas del mouse e fornisce linee guida per la conservazione di un pancreas per ulteriori analisi. Questa guida sarà altrettanto preziosa per individui conducendo una ricerca su altre malattie del pancreas, compreso il diabete di tipo e dovrebbero essere particolarmente utili per gli studenti e gli investigatori nuovi di ricerca che coinvolge la raccolta del pancreas del mouse utilizzando dissezione per profiling metabolico o analisi istologiche.
Protocol
Representative Results
Discussion
Significato per quanto riguarda i metodi esistenti
Mentre esista altri video informale delle dissezioni del mouse, questo video articolo fornisce la prima qualità professionale, inter pares, dimostrazione visiva di tutti i passaggi dettagliati necessari per l’estrazione e la raccolta del pancreas del mouse tramite la dissezione10 . Il pancreas è un organo principale per attività metabolica e insulino produzione, la dissezione e la raccolta del pancreas permette la conservazi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MAK riconosce il supporto per questo lavoro dai National Institutes of Health / numero – 1R15CA152985-01A1 di sovvenzione del National Cancer Institute. Questo progetto è stato supportato anche dal Miami University Undergraduate Research Award programma, le opportunità di dottorato-laurea Università di Miami per Scholarship Program e il programma di studiosi di Miami University estivo.
Materials
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
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