Dissection du pancréas de souris pour faire une analyse histologique et profilage métabolique
Summary
Cet article vidéo fournit une démonstration détaillée des procédures requises pour réussir à éliminer le pancréas de souris par la technique pour faire une analyse histologique et profils métaboliques.
Abstract
Nous avons enquêté sur le facteur de transcription spécifique de pancréas, 1 a cre-recombinase ; sarcome de LOX-stop-lox-Kristen rat, glycine, acide aspartique au codon 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) souche de souris comme un modèle de cancer pancréatique humain. L’objectif de nos études actuelles est d’identifier de nouveaux biomarqueurs métaboliques de la progression du cancer du pancréas. Nous avons effectué des profils métaboliques d’urine, selles, sang et extraits de tissus du pancréas, ainsi que des analyses histologiques du pancréas à l’étape de la progression du cancer. Le pancréas de souris n’est pas un organe solid bien défini comme chez les humains, mais il s’agit plutôt d’un tissu mou diffusément distribué qui n’est pas facilement identifiable par des individus peu familiers avec l’anatomie interne de la souris ou par des individus qui ont peu ou aucune expérience en spectacle dissections de souris d’orgue. Le but de cet article est de fournir un détail lavage démonstration visuelle pour guider les novices dans l’élimination du pancréas de souris par la technique. Cet article devrait être particulièrement utile aux étudiants et aux chercheurs de nouvelles pour la recherche qui nécessite la récolte du pancréas de souris par la technique de profilage métabolique ou des analyses histologiques.
Introduction
La souris est devenue un important modèle animal du cancer pancréatique humain1,2. Dans le Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modèle murin, la Kristen oncogène de rat sarcoma (K-Ras) intervient exclusivement dans le pancréas, aboutissant à l’initiation des lésions précancéreuses dans le pancréas, appelés les néoplasies intraépithéliales pancréatiques (paninés), que les progrès pour les adénocarcinomes canalaires pancréatiques, communément appelé PDACs3. Ce système de modèle de souris offre l’un des meilleurs modèles animaux disponibles pour cancer pancréatique humain4,5, avec l’avantage supplémentaire que les paninés émergent dans les cinq premiers mois de la vie et souvent progrès à PDAC dans un seule l’année4,5, alors que le cancer du pancréas survient plus fréquemment chez l’homme 60-70 ans.
Extraction du pancréas par dissection de la Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + souris à divers âges permet un examen histologique détaillé longitudinal du développement du cancer du pancréas, allant dès les premiers stades de PanIN grâce à la progression à l’ACPE3,4 , 5. récolte du pancréas à des âges allant de cinq à quinze mois peut également servir à préparer les tissus extraits pour caractériser les changements globaux dans le métabolisme des4 pancréas qui se produisent pendant la transition de santé à des tissus malades 6,,7.
Cet article présente un guide visuel complet des étapes requises pour effectuer une extraction de pancréas de souris et fournit des lignes directrices pour le stockage d’un pancréas pour une analyse ultérieure. Ce guide sera également utile pour les personnes effectuant des recherches sur d’autres maladies du pancréas, y compris diabète de type I et devraient être particulièrement utiles aux étudiants et aux chercheurs de nouveau à la recherche impliquant la cueillette du pancréas de souris à l’aide dissection des profils métaboliques ou des analyses histologiques.
Protocol
Representative Results
Discussion
Signification en ce qui concerne les méthodes existantes
Parmi les autres vidéos informels des dissections de souris, cet article vidéo fournit la première qualité professionnelle, des pairs, démonstration visuelle de toutes les étapes détaillées nécessaires pour l’extraction et la récolte du pancréas de souris par dissection10 . Avec le pancréas est un organe principal de l’activité métabolique et l’insuline production, la dissection et la récolte du panc…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MAK reconnaît le soutien pour ce travail de la National Institutes of Health / Institut National du Cancer grant nombre – 1R15CA152985-01 a 1. Ce projet a également été soutenu par le programme de prix recherche Undergraduate Université Miami, les possibilités de doctorat-premier cycle Université de Miami pour le programme de bourses et le programme des boursiers Miami University Summer.
Materials
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
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