中国南方与过敏性鼻炎和/或哮喘的花粉过敏原研究的成分分析诊断方法
1State Key Laboratory of Respiratory Disease, 2National Clinical Research Center of Respiratory Disease, 3Guangzhou Institute of Respiratory Diseases, 4Department of Allergy and Clinical Immunology,First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, 5Department of Respiratory Medicine,Sixth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University
Summary
这项工作描述了一个方案，使用组分解决的方法来研究来自华南地区患有过敏性鼻炎和/或哮喘的患者对草花粉过敏原的敏化。
Abstract
对草花粉的致敏对全球过敏性气道疾病造成风险。虽然预防依赖于当地对花粉过敏原的调查，但在华南地区，这一问题的数据有限。任何可用的数据都是通过自我报告调查表，皮肤刺痛试验和使用粗提取物进行的全部或特异性IgE测试获得的。由于很多原因，这些方法是不可靠的。使用全自动免疫测定分析仪作为组分，检测来自大广州（华南最大城市及其郊区）患有过敏性鼻炎和/或哮喘的患者的百日草，提摩西草和葎草 ens过敏原的血清sIgE反应性解决诊断（CRD）工具。
在过敏性鼻炎和/或哮喘的中国南方人中，首次证实了百慕大草药阳性的相当高的流行率。在这些患者中，敏感感染的微妙流行也提到了提摩太草和葎草钪，这可能是由交叉反应性引起的，因为后两者在该地区不常见。过敏原成分的检测也得到了支持。
全自动免疫分析仪可以在区域，实验室和机构之间以及随着时间的推移提供令人满意的一致性。仪器的自动化可以实现在CRD出现之前不容易揭示的标准化检测。
这是一项研究，使用CRD方法调查中国南方对草花粉过敏原的敏感性。它增加了文献中的现有证据。需要未来的研究来验证这些发现。然而，虽然CRD是一个有用的工具，但使用全自动免疫分析仪进行的研究结果不能取代其他实验室调查，临床评估和医师专业知识。
Introduction
草花粉占免疫球蛋白E（IgE）相关过敏的近50％，由于其空气传播性质，引起过敏性气道疾病的全球风险，特别是哮喘和过敏性鼻炎1,2,3,4 。防止一个地区的草花粉过敏依赖于有关花粉过敏原局部分布的信息。不幸的是，致敏过敏原的光谱范围因地而异，一般称为区域特异性。
在中国，广泛的东亚地区，过去几十年来，该国南部目前有限的数据，草地花粉敏感的区域特异性进一步复杂化5 。这样的数据缺乏导致了显示整个草花粉感觉的困难这个大国的化身6 。另外，中国南方人的非常有限的数据主要来自自我报告问卷，皮肤刺痛试验（而不是实验室血清检测），总IgE测量（而不是变应原特异性IgE（sIgE））和sIgE检测对变应原而不是变应原成分分子）。
过敏性症状的自我报告在特定过敏原时可能不可靠。皮肤刺痛试验尽管可以广泛使用，但涉及使用非标准化的粗过敏原提取物，它们本身可能含有混合结果解释的其他致敏组分。皮肤刺痛试验的可靠性也在很大程度上取决于过敏者或专科护士，近期组胺使用和患者依从性（有时幼儿很难）的巧妙操作。总IgE对筛选过敏是有用的，但不明智地确定e患者的过敏原。而且，几乎所有的过敏原都含有许多变应原成分分子。对主要成分（ 即 Der p 1和Der p 2来自房屋尘螨）的敏化可能表明“真正的”过敏（对特定过敏原过敏，而不是由于与其他过敏原的交叉反应而引起的假阳性），而是致敏对于某些（ 即，交叉反应性Der p 10，原肌球蛋白）可能不是7 。
在组件解析诊断（CRD）被引入之前，这些令人失望的挫折阻碍了中国的过敏原研究。 CRD通过使用重组或纯化的过敏原分子精确检测变应原的成分，从而使测量容易量化和表征8 。过去几十年来，过敏研究经常使用不可避免地含有一些不相关成分的过敏原粗提取物。这些公司中的许多组合物是惰性的，但偶尔也会导致混淆的积极反应。在CRD中使用重组或纯化的过敏原分子可以避免这种情况，从而提供更好的测试准确性。当在微阵列中进行处理时，CRD方法可快速筛选或鉴定个体受试者中数百种变应原分子的致敏性。目前，中国南方草坪花粉敏感性研究较为完善。理想情况下，这样的研究应该包括当地人口相当广泛的地理覆盖，占中国常见的草花粉，并解决上述技术问题。为了达到临床相关性的实用水平并促进血清样品的募集，早期研究对作为吸入性过敏原的草花粉敏感，也可能集中于患有过敏性呼吸系统疾病的患者，而不是一般人群。
这项工作描述了一种方法用于使用CRD方法检测来自大广州（华南最大的城市及其郊区）患有过敏性鼻炎和/或哮喘的百慕大草，提莫西草和葎草的血清sIgE反应性5 。这些对中国南方亚热带和温带草花粉敏感的研究结果为文献中现有的重要证据提供了重要依据。
Protocol
包括人血清样本使用在内的研究方案由广州医科大学第一附属医院伦理委员会批准。所有参与者独立或通过父母提供书面知情同意书（对于儿童）。协议已在线注册（中国临床试验注册机构，注册号：ChiCTR-DCC-13004003，参见http://www.chictr.org/cn/）。 1.研究人口的确定注意：呼吸疾病国家重点实验室（AIR-SKLRD）的过敏信息库是患者招募的主要来源，因为A…
Representative Results
在本研究中使用的全自动免疫测定分析仪具有共价结合的共同结构，其中共价偶联过敏原或变应原成分，与来自患者的血清标本中感兴趣的分子（sIgE）反应。使用自动程序，分析仪用150μL冲洗溶液清洗所有非特异性IgE，并重复5次。然后加入酶标记的抗IgE抗体（50μL）以产生复合物。酶标记的抗IgE抗体（缀合物）是与特异性IgE结合的二抗。通过用150μL洗涤溶液洗涤（重复3?…
Discussion
全自动免疫分析仪可以在区域，实验室和机构之间以及随着时间的推移提供令人满意的一致性。已经发现这种自动化程序基本上支持实验室研究和临床研究，能够对许多过敏原和/或变应原组分进行标准化检测，并鉴定在CRD出现之前不容易揭示的可能的变应原交叉反应性。此外，整个测试程序可以通过严格的质量控制完成，允许在大地理区域的调查中要求的高通量方法。虽然测试程序主要由计算机…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢俞素明在准备这个数字方面的帮助。本研究由广东省科技基金（项目编号：2014A020212352），广州市教育局（1201630044; 1201630393）和国家自然科学基金（NSFC 81572063; NSFC 81601394）资助。
Materials
| ImmunoCAP 1000 Instrument | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3800-01 | |
| Phadia Information Data Manager Software Package | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-11 | |
| Software Package, ImmunoCAP 1000 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 12-3801-12 | |
| g2 (Bermuda grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4131-01 | |
| g6 (Timothy grass) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4100-01 | |
| w22 (Japanese Hop) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4452-01 | |
| g216 (nCyn d 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4972-01 | |
| g205 (rPhl p 1) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5234-01 | |
| g208 (nPhl p 4) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5288-01 | |
| g215 (rPhl p 5b) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5338-01 | |
| g209 (rPhl p 6) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5289-01 | |
| g210 (rPhl p 7) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5290-01 | |
| g211 (rPhl p 11) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5291-01 | |
| g212 (rPhl p 12) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5292-01 | |
| o214 Cross-reacting carbohydrate determinants (CCDs) |
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-5339-01 | |
| Specific IgE Conjugate 400 | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9310-08 | |
| Specific IgE Calibrator Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9459-08 | |
| Specific IgE Curve Control Strip | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9312-08 | |
| Specific IgE Anti-IgE ImmunoCAP | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 14-4417-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Negative Control | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9445-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control L | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9528-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control M | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9529-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control H | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9530-01 | |
| Development Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9439-08 | |
| Stop Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 34-2271-58 | |
| Washing Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9202-08 | |
| FluoroC | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9264-01 | |
| Maintenance Solution Kit | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) | 10-9476-01 |
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Cite This Article
Luo, W., Pan, G., Huang, H., Zheng, P., Wei, N., Zhang, Y., Zeng, G., Sun, B. A Component-resolved Diagnostic Approach for a Study on Grass Pollen Allergens in Chinese Southerners with Allergic Rhinitis and/or Asthma. J. Vis. Exp. (124), e55723, doi:10.3791/55723 (2017).