Summary

アレルギー性鼻炎および/または喘息を有する中国南部の草花花粉アレルゲンに関する研究のための成分分析による診断アプローチ

Published: June 04, 2017
doi:

Summary

この研究は、アレルギー性鼻炎および/または喘息を有する中国南部の患者のコホートにおいて、花粉アレルゲンに対する感作性を研究するための成分分析アプローチを使用するプロトコルを記載している。

Abstract

草花花粉に対する感作は、アレルギー性気道疾患の世界的なリスクを引き起こす。予防は花粉アレルゲンの現地調査に依拠していますが、このトピックに関するデータは中国南部では限られています。利用可能なデータは、自己報告アンケート、皮膚プリックテスト、および粗抽出物を用いた全または特異IgE試験によって得られた。多くの理由から、これらの方法は信頼性が低い。アレルギー性鼻炎および/または喘息を有する広州広州(中国南部最大の都市およびその郊外)の患者の集団におけるバミューダグラス、ティモシーグラス、およびハンマースクランデルアレルゲンに対する血清sIgE反応性を、完全自動化イムノアッセイ分析器を成分として用いて調べた(CRD)ツール。

初めて、アレルギー性鼻炎および/または喘息を有する中国の南部で、バミューダグラスのsIgE陽性率のかなりの有病率が実証された。これらの患者では、感作の微妙な有病率後者の2つはこの地域では一般的ではないため、交差反応性から生じる可能性のあるティモシー草とヒューマリススキャーンズにも注目された。これはまた、アレルゲン成分の検出によっても支持された。

全自動イムノアッセイ分析装置は、地域、研究所、施設間、および時間の経過とともに満足できる一貫性を提供することができる。装置の自動性は、CRDの出現前に容易に明らかにされなかった標準化された検出を可能にすることができる。

これは、中国南部の花粉アレルゲンに対する感作性を調べるためにCRDアプローチを用いた研究である。それは文献の現在の証拠に追加されます。これらの知見を検証するためには、今後の研究が必要である。しかし、CRDは有用なツールですが、全自動イムノアッセイアナライザーで行った調査結果は、他の検査室の調査、臨床評価、医師の専門知識を代用するべきではありません。

Introduction

草花花粉は、免疫グロブリンE(IgE)に関連するアレルギーの約50%を占め、空気の性質上、アレルギー性気道疾患、特に喘息およびアレルギー性鼻炎1,2,3,4の世界的なリスクを課している。ある地域における花粉アレルギーの予防は、花粉アレルゲンの局所分布に関する情報に依存している。残念なことに、感作性アレルゲンのスペクトルは場所によって異なり、一般に地域特異性として知られている。

広大な東アジア域である中国では、過去数十年の間にこの国の南部から入手可能な限られたデータにより、草花粉感作の地域特異性はさらに複雑になっている。このようなデータの欠如は、芝生全体の花粉感受性を示すことを困難にしているこの大国での情報化6 。さらに、中国南部の非常に限られたデータは、主に自己申告のアンケート、皮膚の枝肉検査(実験的血清検査ではなく)、総IgE測定(アレルゲン特異的IgE(sIgE)ではなく)、およびsIgE検出アレルゲン成分分子ではなく)。

特定のアレルゲンが関係している場合、アレルギー症状の自己報告は信頼できない場合があります。皮膚穿刺検査は、広くアクセス可能ではあるが、標準化されていない粗製アレルゲン抽出物の使用を伴い、それ自体が結果の解釈を混乱させる他の感作成分を含有する可能性がある。皮膚穿刺試験の信頼性は、アレルギー師または専門看護師による最新のヒスタミン使用、最近のヒスタミン使用、および患者コンプライアンス(幼児にとっては時には非常に困難)にも非常に依存します。全IgEはアレルギーのスクリーニングには有用であるが、患者のアレルゲンを引き起こす。さらに、ほとんどすべてのアレルゲンは、多数のアレルゲン成分分子を含む。主要な成分( すなわち、ハウスダストダニからのDer p 1およびDer p 2)に対する感作は、「本物の」アレルギー(他のアレルゲンとの交差反応に起因する偽陽性ではなく、特定のアレルゲンに対するアレルギー)を示唆し得るが、感作( すなわち、交差反応性のDer p 10、トロポミオシン)は、そうではない可能性がある。

CRD(component-resolved diagnostics)が導入される前に、これらの失望した挫折が中国のアレルゲン研究を妨げていました。 CRDは、組換えまたは精製されたアレルゲン分子を使用することによってアレルゲンの成分を正確に検出し、それによって測定を容易に定量化および特徴付けすることができる8 。過去数十年間に、アレルギー研究は、必然的に多くの無関係な成分を含むアレルゲンの粗抽出物を頻繁に使用した。これらの多くの共同成分は不活性であるが、時には交絡する陽性反応を引き起こすものもある。 CRDにおける組換えまたは精製されたアレルゲン分子の使用はこれを回避することができ、したがってより良好な試験精度を提供することができる。マイクロアレイで処理する場合、CRDアプローチは、個々の被験体における何百ものアレルゲン分子に対する感作を迅速にスクリーニングまたは同定する。中国南部での草花粉感作に関するうまく設計されたCRD研究は、現在のところ欠けている。理想的には、このような研究には、地理的にかなりの地域の人口が含まれ、中国で一般的に報告されている芝生の花粉を考慮し、上述の技術的側面に取り組むべきである。臨床的関連性の実用レベルに到達し、血清サンプルの動員を容易にするために、吸入アレルゲンとしての草花粉に対する感作の早期調査は、一般集団ではなくアレルギー性呼吸障害患者に焦点を当てることもできる。

この作品は、CRDアプローチを用いてアレルギー性鼻炎および/または喘息を有する広東広域(中国南部最大の都市およびその周辺)の患者のバミューダグラス、ティモシーグラス、およびヒュームラススキャンンに対する血清sIgE反応性を試験するために使用される。これらの亜熱帯および温帯草花粉に対する感作に関するこれらの知見は、現在の文献に重要な証拠を追加している。

Protocol

研究プロトコール(ヒト血清サンプルの使用を含む)は、広州医科大学第一附属病院倫理委員会によって承認された。すべての参加者は、独立して、または両親(子供の場合) を介して書面によるインフォームド・コンセントを提供した。このプロトコルはオンラインで登録されている(中国臨床試験登録番号、ChiCTR-DCC-13004003、http://www.chictr.org/cn/を参照)。 1.研?…

Representative Results

この研究で使用される全自動イムノアッセイアナライザーは、患者からの血清検体中の目的の分子(sIgE)と反応するアレルゲンまたはアレルゲン成分を共有結合的にカップリングする固相構造を有する。自動プログラムでは、アナライザは150μLのすすぎ溶液ですべての非特異的IgEを洗い流し、これを5回繰り返します。次に酵素標識抗IgE抗体(50μL)を加えて複合体を…

Discussion

全自動イムノアッセイ分析装置は、地域、研究所、施設間、および時間の経過とともに満足できる一貫性を提供することができる。このような自動手順は、ベンチ研究および臨床研究を実質的に支持し、多くのアレルゲンおよび/またはアレルゲン成分の標準化された検出を可能にし、CRDの出現前に容易に明らかにならない可能性のあるアレルゲン交差反応性を同定する。さらに、大規模な地…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

フィギュアを準備するのに彼の援助に感謝します。この研究は広東省科学技術財団(プロジェクト番号:2014A020212352)、広州教育局(1201630044、1201630393)、中国国立自然科学財団(NSFC 81572063、NSFC 81601394)の資金提供を受けました。

Materials

ImmunoCAP 1000 Instrument Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 12-3800-01
Phadia Information Data Manager Software Package Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 12-3801-11
Software Package, ImmunoCAP 1000 Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 12-3801-12
g2
(Bermuda grass)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-4131-01
g6
(Timothy grass)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-4100-01
w22
(Japanese Hop)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-4452-01
g216
(nCyn d 1)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-4972-01
g205
(rPhl p 1)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-5234-01
g208
(nPhl p 4)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-5288-01
g215
(rPhl p 5b)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-5338-01
g209
(rPhl p 6)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-5289-01
g210
(rPhl p 7)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-5290-01
g211
(rPhl p 11)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-5291-01
g212
(rPhl p 12)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-5292-01
o214
Cross-reacting carbohydrate determinants (CCDs)
Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-5339-01
Specific IgE Conjugate 400 Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9310-08
Specific IgE Calibrator Strip Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9459-08
Specific IgE Curve Control Strip Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9312-08
Specific IgE Anti-IgE ImmunoCAP Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 14-4417-01
ImmunoCAP Specific IgE Negative Control Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9445-01
ImmunoCAP Specific IgE Control L Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9528-01
ImmunoCAP Specific IgE Control M Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9529-01
ImmunoCAP Specific IgE Control H Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9530-01
Development Solution Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9439-08
Stop Solution Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 34-2271-58
Washing Solution Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9202-08
FluoroC Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9264-01
Maintenance Solution Kit Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Uppsala Sweden) 10-9476-01

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Luo, W., Pan, G., Huang, H., Zheng, P., Wei, N., Zhang, Y., Zeng, G., Sun, B. A Component-resolved Diagnostic Approach for a Study on Grass Pollen Allergens in Chinese Southerners with Allergic Rhinitis and/or Asthma. J. Vis. Exp. (124), e55723, doi:10.3791/55723 (2017).

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