हमने स्लीपिंग ब्यूटी (एसबी) ट्रांसपोसन सिस्टम का उपयोग करके जीन एन्कोडिंग पिगमेंट एपिथेलियम-व्युत्पन्न कारक (पीईडीएफ) के साथ इलेक्ट्रोपोरेशन द्वारा प्राथमिक मानव वर्णक उपकला कोशिकाओं को स्थानांतरित करने के लिए एक प्रोटोकॉल विकसित किया है। सफल अभिकर्मक मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूपीसीआर), इम्यूनोब्लोटिंग और एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) द्वारा प्रदर्शित किया गया था।
हमारे तेजी से बढ़ते बुढ़ापे के समाज से न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों की बढ़ती घटनाएं होती हैं। अब तक, पैथोलॉजिकल तंत्र अपर्याप्त रूप से समझे जाते हैं, इस प्रकार परिभाषित उपचारों की स्थापना में बाधा डालते हैं। एक सुरक्षात्मक कारक की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति के लिए सेल-आधारित योजक जीन थेरेपी को उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन (एएमडी) जैसे न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों को दवा देने के लिए एक आशाजनक विकल्प माना जाता है। हमने जीन एन्कोडिंग पिगमेंट एपिथेलियम-व्युत्पन्न कारक (पीईडीएफ) की स्थिर अभिव्यक्ति के लिए एक विधि विकसित की है, जिसे तंत्रिका तंत्र में न्यूरोप्रोटेक्टिव और एंटी-एंजियोजेनिक प्रोटीन के रूप में जाना जाता है, जो स्लीपिंग ब्यूटी (एसबी) ट्रांसपोसन सिस्टम का उपयोग करके प्राथमिक मानव वर्णक उपकला (पीई) कोशिकाओं के जीनोम में होता है। प्राथमिक पीई कोशिकाओं को मानव दाता आंखों से अलग किया गया था और संस्कृति में बनाए रखा गया था। संगम तक पहुंचने के बाद, 1 x 104 कोशिकाओं को 11 μL पुन: निलंबन बफर में निलंबित कर दिया गया और 2 μL के साथ एक शुद्ध घोल के साथ जोड़ा गया जिसमें 30 ng हाइपरएक्टिव एसबी (SB100X) ट्रांसपोसेज प्लास्मिड और 470 एनजी पीईडीएफ ट्रांसपोसन प्लास्मिड शामिल थे। आनुवंशिक संशोधन निम्नलिखित मापदंडों का उपयोग करके एक केशिका इलेक्ट्रोपोरेशन सिस्टम के साथ किया गया था: 1,100 वी के वोल्टेज और 20 एमएस की चौड़ाई के साथ दो दालें। संक्रमित कोशिकाओं को कल्चर प्लेटों में स्थानांतरित किया गया था जिसमें भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक माध्यम था; पहले मध्यम विनिमय के साथ एंटीबायोटिक्स और एंटीमाइकोटिक्स जोड़े गए थे। स्वतंत्र रूप से किए गए प्रयोगों में सफल अभिकर्मक का प्रदर्शन किया गया था। क्वांटिटेटिव पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूपीसीआर) ने पीईडीएफ ट्रांसजेन की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति को दिखाया। पीईडीएफ स्राव काफी ऊंचा था और स्थिर रहा, जैसा कि इम्यूनोब्लोटिंग द्वारा मूल्यांकन किया गया था, और एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) द्वारा निर्धारित किया गया था। एसबी 100 एक्स-मध्यस्थता हस्तांतरण ने पीई कोशिकाओं के जीनोम में एक स्थिर पीईडीएफ जीन एकीकरण की अनुमति दी और पीईडीएफ के निरंतर स्राव को सुनिश्चित किया, जो एएमडी या अन्य रेटिना अपक्षयी रोगों के इलाज के लिए सेल-आधारित जीन जोड़ चिकित्सा के विकास के लिए महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, मानव पीई कोशिकाओं में पीईडीएफ ट्रांसपोसन के एकीकरण प्रोफाइल के विश्लेषण ने लगभग यादृच्छिक जीनोमिक वितरण का संकेत दिया।
उन्नत आयु को न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों के लिए मुख्य जोखिम के रूप में वर्णित किया गया है। उम्र से संबंधित मैकुलर अपघटन (एएमडी), एक पॉलीजेनिक बीमारी जो 60 वर्ष से अधिक उम्र के रोगियों में गंभीर दृष्टि हानि का कारण बनती है, अंधापन और दृष्टि हानि के चार सबसे आम कारणों से संबंधित हैऔर 20402 में 288 मिलियन लोगों तक बढ़ने की उम्मीद है। रेटिना वर्णक उपकला (आरपीई) की शिथिलता, कोरियोकेशिकापिलरिस और रेटिना फोटोरिसेप्टर के बीच स्थित कसकर पैक कोशिकाओं की एक परत, एएमडी के रोगजनन में योगदान करती है। आरपीई कई कार्यों को पूरा करता है जो एक सामान्य रेटिना फ़ंक्शन3 के लिए आवश्यक हैं और रेटिना और कोरियोकेशिकाओं की संरचनात्मक अखंडता को बनाए रखने के लिए आवश्यक विभिन्न प्रकार के विकास कारकों और कारकों को स्रावित करता है, जिससे फोटोरिसेप्टर अस्तित्व का समर्थन होता है और परिसंचरण और पोषक तत्वों की आपूर्ति के लिए आधार प्रदान करता है।
स्वस्थ आंखों में, वर्णक उपकला-व्युत्पन्न कारक (पीईडीएफ) संवहनी एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर (वीईजीएफ) के प्रभावों को संतुलित करने के लिए जिम्मेदार है और एपोप्टोसिस के खिलाफ न्यूरॉन्स की रक्षा करता है, एंडोथेलियल सेल प्रसार को रोकता है, और केशिका एंडोथेलियम को स्थिर करता है। एक स्थानांतरित वीईजीएफ-टू-पीईडीएफ अनुपात ओकुलर नियोवैस्कुलराइजेशन से संबंधित है, जो पशु मॉडल 4,5 के साथ-साथ एएमडी और प्रोलिफेरेटिव डायबिटिक रेटिनोपैथी 6,7,8,9,10 के कारण कोरॉइडल नियोवैस्कुलराइजेशन (सीएनवी) वाले रोगियों के नमूनों में देखा गया था। . बढ़ी हुई वीईजीएफ एकाग्रता वर्तमान मानक उपचार के लिए लक्ष्य है। एंटी-वीईजीएफ फार्मास्यूटिकल्स बेवासिजुमैब, रेनिबिज़ुमाब, एफ्लिबरसेप्ट और, हाल ही में, ब्रोलुसिज़ुमैब लगभग एक तिहाई सीएनवी रोगियों में दृश्य तीक्ष्णता में सुधार करते हैं या 11,12,13 मामलों में 90% मामलों में दृष्टि को स्थिर करते हैं। हालांकि, लगातार, अक्सर मासिक, इंट्राविट्रल इंजेक्शन प्रतिकूल घटनाओं का जोखिम उठाते हैं14, रोगी अनुपालन को बाधित करते हैं, और स्वास्थ्य देखभाल प्रणालियों के लिए एक महत्वपूर्ण आर्थिक बोझ का प्रतिनिधित्व करतेहैं। इसके अलावा, रोगियों का एक निश्चित प्रतिशत (2% -20%) प्रतिक्रिया नहीं देता है या केवल एंटी-वीईजीएफ थेरेपी 16,17,18,19 के लिए खराब प्रतिक्रिया देता है। इन नकारात्मक सहवर्ती वैकल्पिक उपचारों के विकास की आवश्यकता होती है, जैसे, इंट्राओकुलर प्रत्यारोपण, सेल और / या जीन चिकित्सीय दृष्टिकोण।
जीन थेरेपी वंशानुगत और गैर-वंशानुगत रोगों के लिए आशाजनक उपचार के रूप में विकसित हुई है और गैर-कार्यात्मक जीन अनुक्रमों को बहाल करने या खराब लोगों को दबाने का इरादा रखती है। पॉलीजेनिक रोगों के लिए, जहां प्रेरक कारकों की पहचान और प्रतिस्थापन शायद ही संभव है, रणनीतियों का उद्देश्य एक सुरक्षात्मक कारक के निरंतर वितरण के लिए है। एएमडी के मामले में, विभिन्न योजक उपचार विकसित किए गए हैं, जैसे कि एंडोस्टैटिन और एंजियोस्टैटिन20 की स्थिर अभिव्यक्ति, वीईजीएफ विरोधी घुलनशील एफएमएस-जैसे टायरोसिन किनेज -1 (एसएफएलटी -1)21,22, भेदभाव 59 (सीडी 59)23 या पीईडीएफ24,25 का पूरक नियामक प्रोटीन क्लस्टर . आंख, और विशेष रूप से रेटिना, संलग्न संरचना, अच्छी पहुंच, छोटे आकार और प्रतिरक्षा विशेषाधिकार के कारण जीन-आधारित दवा के लिए एक उत्कृष्ट लक्ष्य है, इस प्रकार कम चिकित्सीय खुराक के स्थानीय वितरण की अनुमति देता है और प्रत्यारोपण को अस्वीकृति के लिए कम संवेदनशील बनाता है। इसके अलावा, आंख गैर-इनवेसिव निगरानी को सक्षम करती है, और रेटिना की जांच विभिन्न इमेजिंग तकनीकों द्वारा की जा सकती है।
वायरल वैक्टर, उनकी उच्च पारगमन दक्षता के कारण, लक्ष्य कोशिकाओं में चिकित्सीय जीन देने के लिए मुख्य वाहन हैं। हालांकि, उपयोग किए गए वायरल वेक्टर के आधार पर, विभिन्न प्रतिकूल प्रतिक्रियाओं का वर्णन किया गया है, जैसे कि प्रतिरक्षा और भड़काऊ प्रतिक्रियाएं26, म्यूटाजेनिक और ऑन्कोजेनिक प्रभाव27,28, या अन्यऊतकों में प्रसार 29। व्यावहारिक सीमाओं में एक प्रतिबंधित पैकेजिंग आकार30 के साथ-साथ नैदानिक ग्रेड लॉट31,32 के उत्पादन से जुड़ी कठिनाइयों और लागतों को शामिल किया गया है। इन कमियों ने गैर-वायरल, प्लास्मिड-आधारित वैक्टर के आगे के विकास को बढ़ावा दिया है जो लिपो-/ पॉलीप्लेक्स, अल्ट्रासाउंड या इलेक्ट्रोपोरेशन के माध्यम से स्थानांतरित होते हैं। हालांकि, मेजबान जीनोम में ट्रांसजीन के जीनोमिक एकीकरण को आमतौर पर प्लास्मिड वैक्टर के साथ बढ़ावा नहीं दिया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप एक क्षणिक अभिव्यक्ति होती है।
ट्रांसपोसन स्वाभाविक रूप से होने वाले डीएनए टुकड़े हैं जो जीनोम के भीतर अपनी स्थिति बदलते हैं, एक विशेषता जिसे जीन थेरेपी के लिए अपनाया गया है। एक सक्रिय एकीकरण तंत्र के कारण, ट्रांसपोसन-आधारित वेक्टर सिस्टम सम्मिलित ट्रांसजीन की निरंतर और निरंतर अभिव्यक्ति की अनुमति देते हैं। स्लीपिंग ब्यूटी (एसबी) ट्रांसपोसन, मछली33 में पाए जाने वाले एक प्राचीन टीसी 1 / मेरिनर-प्रकार ट्रांसपोसन से पुनर्गठित और आणविक विकास द्वारा और सुधार किया गया, जिसके परिणामस्वरूप हाइपरएक्टिव संस्करण एसबी 100 एक्स34 ने विभिन्न प्राथमिक कोशिकाओं में कुशल ट्रांसपोज़ेशन को सक्षम किया और विभिन्न रोग मॉडल35 में फेनोटाइपिक सुधार के लिए उपयोग किया गया। वर्तमान में, एसबी ट्रांसपोसन प्रणाली का उपयोग करके 13 नैदानिक परीक्षण शुरू किए गए हैं। एसबी 100 एक्स ट्रांसपोसन सिस्टम में दो घटक होते हैं: ट्रांसपोसन, जिसमें टर्मिनल इनवर्टेड रिपीट (टीआईआर) से घिरे ब्याज के जीन शामिल होते हैं, और ट्रांसपोसेज, जो ट्रांसपोसन को जुटाता है। कोशिकाओं को प्लास्मिड डीएनए वितरण के बाद, ट्रांसपोसेस टीआईआर को बांधता है और सेल के जीनोम में ट्रांसपोसन के छांटने और एकीकरण को उत्प्रेरित करता है।
हमने नियोवास्कुलर एएमडी के उपचार के लिए एक गैर-वायरल सेल-आधारित योजक थेरेपी विकसित की है। दृष्टिकोण में एसबी 100 एक्स ट्रांसपोसन सिस्टम36,37,38 के माध्यम से प्राथमिक वर्णक उपकला (पीई) कोशिकाओं में पीईडीएफ जीन का इलेक्ट्रोपोरेशन-आधारित सम्मिलन शामिल है। ट्रांसपोसेस और पीईडीएफ की आनुवंशिक जानकारी अलग-अलग प्लास्मिड पर प्रदान की जाती है, जिससे आदर्श एसबी 100 एक्स-टू-पीईडीएफ ट्रांसपोसन अनुपात का समायोजन सक्षम होता है। इलेक्ट्रोपोरेशन एक पिपेट-आधारित केशिका अभिकर्मक प्रणाली का उपयोग करके किया जाता है जो इलेक्ट्रोड के बीच उनके सतह क्षेत्र को कम करते हुए अधिकतम अंतर आकार की विशेषता है। डिवाइस को स्तनधारी कोशिकाओं 39,40,41 की एक विस्तृत श्रृंखला में उत्कृष्ट अभिकर्मक दर प्राप्त करने के लिए दिखाया गया था। छोटा इलेक्ट्रोड सतह क्षेत्र एक समान विद्युत क्षेत्र प्रदान करता है और इलेक्ट्रोलिसिस42 के विभिन्न दुष्प्रभावों को कम करता है।
ट्रांसक्रिप्टेड पिगमेंट एपिथेलियल कोशिकाओं द्वारा स्रावित पीईडीएफ की एंटी-एंजियोजेनिक कार्यक्षमता को मानव नाभि शिराएंडोथेलियल कोशिकाओं के अंकुरण, प्रवास और एपोप्टोसिस का विश्लेषण करने वाले विभिन्न इन विट्रो प्रयोगों में दिखाया गया था। इसके अलावा, कॉर्नियल नियोवैस्कुलराइजेशन44 के खरगोश मॉडल में पीईडीएफ-ट्रांसक्रिप्टेड कोशिकाओं के प्रत्यारोपण के साथ-साथ सीएनवी 43,45,46 के चूहे मॉडल ने नियोवैस्कुलराइजेशन की गिरावट दिखाई।
यहां, हम एक केशिका अभिकर्मक प्रणाली का उपयोग करके एसबी 100 एक्स ट्रांसपोसन सिस्टम के माध्यम से प्राथमिक मानव आरपीई कोशिकाओं में पीईडीएफ जीन के स्थिर सम्मिलन के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। संक्रमित कोशिकाओं को 21 दिनों के लिए संस्कृति में रखा गया था और बाद में मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूपीसीआर) द्वारा पीईडीएफ जीन अभिव्यक्ति के संदर्भ में और इम्यूनोब्लोटिंग और एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा, चित्रा 1) द्वारा पीईडीएफ प्रोटीन स्राव के संदर्भ में विश्लेषण किया गया था।
हमारी परियोजना में, हम आनुवंशिक रूप से संशोधित प्राथमिक मानव आरपीई कोशिकाओं के गैर-वायरल उत्पादन का लक्ष्य रखते हैं जो एक सुरक्षात्मक वातावरण की स्थापना और रखरखाव के लिए दीर्घकालिक चिकित्सीय के रूप ?…
The authors have nothing to disclose.
इस काम को अनुसंधान, तकनीकी विकास और प्रदर्शन के लिए यूरोपीय संघ के सातवें फ्रेमवर्क प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया था, अनुदान समझौता संख्या 305134। Zsuzsanna Izsvak को यूरोपीय अनुसंधान परिषद, ERC एडवांस्ड (ERC-2011-ADG 294742) द्वारा वित्त पोषित किया गया था। लेखक उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए अन्ना डोबियास और एंटजे शेफर (नेत्र विज्ञान विभाग, विश्वविद्यालय अस्पताल आरडब्ल्यूटीएच आचेन) और मानव दाता आंखें प्रदान करने के लिए आचेन कॉर्निया बैंक (नेत्र विज्ञान विभाग, विश्वविद्यालय अस्पताल आरडब्ल्यूटीएच आचेन) को धन्यवाद देना चाहते हैं।
Isolation of primary human RPE cells | |||
24-Well Cell Culture Plate | Eppendorf, Hamburg, Germany | 0030722019 | |
Amphotericin B [250 µg/mL] (AmphoB) | Merck, Darmstadt, Germany | A2942 | |
Colibri Forceps | Geuder, Heidelberg, Germany | G-18950 | |
Curved Iris Forceps | Geuder, Heidelberg, Germany | G-18856 | |
Disposable Scalpel (No. 11) | Feather, Osaka, Japan | ||
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium/Ham’s F-12 Nutrient Mixture (DMEM/F12) | PAN-Biotech, Aidenbach, Germany | P04-41150 | |
Extra Fine Pointed Eye Scissor | Geuder, Heidelberg, Germany | G-19405 | |
Fetal Bovine Serum [0.2 µm Sterile Filtered] (FBS) | PAN-Biotech, Aidenbach, Germany | P40-37500 | |
Glass Pasteur Pipettes | Brand, Wertheim, Germany | 747715 | |
Penicillin [10,000 units/mL] and Streptomycin [10 mg/mL] (Pen/Strep) | Merck, Darmstadt, Germany | P0781 | |
Pipette Tips (1000 µL) | Starlab, Hamburg, Germany | ||
Single Channel Pipette (100-1000 µL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Sterile Drape | Lohmann & Rauscher, Rengsdorf, Germany | ||
Sterile Gauze Compress | Fink-Walter, Merchweiler, Germany | 321063 | |
Sterile Gloves | Sempermed, Wien, Austria | ||
Sterile Petri Dish (Falcon 60 mm x 15 mm) | Corning, Corning, NY | 351007 | |
Sterile Surgical Gown | Halyard Health, Alpharetta, GA | ||
Straight Iris Forceps | Geuder, Heidelberg, Germany | G-18855 | |
Electroporation of primary human RPE cells | |||
10 mM Tris-HCl (pH 8.5) | |||
12-Well Cell Culture Plate | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA | 150628 | |
24-Well Cell Culture Plate | Eppendorf, Hamburg, Germany | 0030722019 | |
Amphotericin B [250 µg/mL] (AmphoB) | Merck, Darmstadt, Germany | A2942 | |
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium/Ham’s F-12 Nutrient Mixture (DMEM/F12) | PAN-Biotech, Aidenbach, Germany | P04-41150 | |
Safe-Lock Microcentrifuge Tubes (1.5 mL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Fetal Bovine Serum [0.2 µm Sterile Filtered] (FBS) | PAN-Biotech, Aidenbach, Germany | P40-37500 | |
Inverted Microscope | Leica Mikrosysteme, Wetzlar, Germany | Leica DMi8 | |
Microvolume Spectrophotometer (NanoDrop Spectrophotometer) | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA | ||
Capillary Transfection System (Neon Transfection System) | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA | MPK5000 | |
Neon Transfection System 10 µL Kit | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA | MPK1096 | |
Hemocytometer (Neubauer Chamber) | Paul Marienfeld, Lauda-Königshofen, Germany | 0640110 | |
PBS Dulbecco w/o Ca2+ w/o Mg2+ | Biochrom, Berlin, Germany | L182-50 | |
Penicillin [10,000 units/mL] and Streptomycin [10 mg/mL] (Pen/Strep) | Merck, Darmstadt, Germany | P0781 | |
Pipette Tips (10 µL) | Starlab, Hamburg, Germany | ||
Pipette Tips (1000 µL) | Starlab, Hamburg, Germany | ||
Pipette Tips (200 µL) | Starlab, Hamburg, Germany | ||
Plasmid Maxi Kit | Qiagen, Hilden, Germany | 12163 | |
Single Channel Pipette (0.1-10 µL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Single Channel Pipette (100-1000 µL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Single Channel Pipette (10-200 µL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Trypan Blue Solution | Merck, Darmstadt, Germany | T8154 | |
Trypsin-EDTA (0,05 %) | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA | 25300054 | |
Analyses of transfected primary human RPE cells | |||
10% SDS-Polyacrylamide Gel | |||
1x Incubation Buffer (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0) | |||
2x SDS Sample Buffer | |||
4x Incubation Buffer (200 mM NaH2PO4, 1.2 M NaCl, 40 mM imidazole, pH 8.0) | |||
Amersham Protran Supported 0.2 µm Nitrocellulose Blotting Membrane | Cytiva, Marlborough, MA | 10600015 | |
Amphotericin B [250 µg/mL] (AmphoB) | Merck, Darmstadt, Germany | A2942 | |
Anti-PEDF Antibodies (Rabbit Polyclonal) | BioProducts, Middletown, MD | AB-PEDF1 | |
Anti-Penta-His Antibodies (Mouse Monoclonal) | Qiagen, Hilden, Germany | 34660 | |
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium/Ham’s F-12 Nutrient Mixture (DMEM/F12) | PAN-Biotech, Aidenbach, Germany | P04-41150 | |
Elution Buffer (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0) | |||
Fetal Bovine Serum [0.2 µm Sterile Filtered] (FBS) | PAN-Biotech, Aidenbach, Germany | P40-37500 | |
Hemocytometer (Neubauer Chamber) | Paul Marienfeld, Lauda-Königshofen, Germany | 0640110 | |
Horseradish Peroxidase-Conjugated Anti-Mouse Antibodies (Rabbit Polyclonal) | Agilent Dako, Santa Clara, CA | P0260 | |
Horseradish Peroxidase-Conjugated Anti-Rabbit Antibodies (Goat Polyclonal) | Abcam, Cambridge, United Kingdom | ab6721 | |
Human PEDF ELISA Kit | BioProducts, Middletown, MD | PED613 | |
LAS-3000 Imaging System | Fujifilm, Minato, Japan | ||
LightCycler 1.2 Instrument | Roche Life Science, Penzberg, Germany | ||
LightCycler FastStart DNA Master SYBR Green I | Roche Life Science, Penzberg, Germany | 12239264001 | |
LightCycler Capillaries (20 μl) | Roche Life Science, Penzberg, Germany | 4929292001 | |
Microvolume Spectrophotometer (NanoDrop Spectrophotometer) | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA | ||
Mini-PROTEAN Tetra Cell Casting Module | Bio-Rad Laboratories, Feldkirchen, Germany | 1658015 | |
Mini-PROTEAN Tetra Vertical Electrophoresis Cell for Mini Precast Gels, 4-gel | Bio-Rad Laboratories, Feldkirchen, Germany | 1658004 | |
Ni-NTA Superflow | Qiagen, Hilden, Germany | 30410 | |
PageRuler Prestained Protein Ladder | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA | 26616 | |
Penicillin [10,000 units/mL] and Streptomycin [10 mg/mL] (Pen/Strep) | Merck, Darmstadt, Germany | P0781 | |
Pipette Tips (10 µL) | Starlab, Hamburg, Germany | ||
Pipette Tips (1000 µL) | Starlab, Hamburg, Germany | ||
Pipette Tips (200 µL) | Starlab, Hamburg, Germany | ||
PowerPac Basic Power Supply | Bio-Rad Laboratories, Feldkirchen, Germany | 1645050 | |
QIAamp DNA Mini Kit | Qiagen, Hilden, Germany | 51304 | |
Reverse Transcription System | Promega, Madison, WI | A3500 | |
RNase-Free DNase Set | Qiagen, Hilden, Germany | 79254 | |
RNeasy Mini Kit | Qiagen, Hilden, Germany | 74104 | |
Rocking Shaker | Cole-Parmer, Staffordshire, United Kingdom | SSM3 | |
Safe-Lock Microcentrifuge Tubes (1.5 mL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Safe-Lock Microcentrifuge Tubes (2.0 mL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Single Channel Pipette (0.1-10 µL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Single Channel Pipette (100-1000 µL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Single Channel Pipette (10-200 µL) | Eppendorf, Hamburg, Germany | ||
Trans-Blot Turbo Transfer System | Bio-Rad Laboratories, Feldkirchen, Germany | 1704150 | |
Trypan Blue Solution | Merck, Darmstadt, Germany | T8154 | |
Trypsin-EDTA (0,05 %) | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA | 25300054 |