Summary
विवो इमेजिंग और स्तन कैंसर की रोकथाम के लिए माउस स्तन डक्टल पेड़ के लिए इथेनॉल-आधारित एब्लेटिव समाधान के लिए अभिकर्मकों के इंट्राडक्टल इंजेक्शन की एक विधि का वर्णन किया गया है। निप्पल खोलने में सीधे इंजेक्शन न्यूनतम संपार्श्विक ऊतक क्षति के साथ स्तन उपकला कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए अनुमति देता है।
Abstract
स्तन कैंसर सबसे प्रचलित कैंसर है और संयुक्त राज्य अमेरिका में महिलाओं के लिए कैंसर से संबंधित मौत का दूसरा प्रमुख कारण है। उच्च जोखिम वाली महिलाओं के लिए, रोगनिरोधी मास्टेक्टॉमी सबसे प्रभावी प्राथमिक रोकथाम रणनीति है। रोगनिरोधी मास्टेक्टॉमी एक आक्रामक सर्जिकल प्रक्रिया है जो स्तन उपकला कोशिकाओं को पूरी तरह से हटा देती है जिससे स्तन कैंसर आसपास के ऊतकों के साथ उत्पन्न होता है। हम रोगनिरोधी मास्टेक्टॉमी के विकल्प के रूप में एक न्यूनतम इनवेसिव इंट्राडक्टल प्रक्रिया विकसित करना चाहते हैं ताकि स्थानीय रूप से स्तन उपकला कोशिकाओं को समाप्त किया जा सके, इससे पहले कि वे घातक हो सकें। हमने और अन्य लोगों ने स्तन कैंसर के कृंतक मॉडल में इन उपकला कोशिकाओं तक पहुंचने और इलाज करने के लिए एक इंट्राडक्टल डिलीवरी प्रक्रिया विकसित की है। जबकि निप्पल में एक एकल गैर-एनास्टोमोज्ड डक्टल ट्री ओपनिंग के साथ माउस स्तन ग्रंथि में मानव स्तन की तुलना में बहुत कम जटिल और टॉर्चर आर्किटेक्चर होता है, स्तन कैंसर के रासायनिक रूप से प्रेरित और आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल नई निवारक रणनीतियों के प्रूफ-ऑफ-कॉन्सेप्ट अध्ययन का उत्पादन करने के लिए मूल्यवान हैं। यहां, हम स्तन कैंसर की प्राथमिक रोकथाम के चिकित्सीय उद्देश्य के लिए माउस स्तन डक्टल पेड़ के भीतर माइक्रो-सीटी / एक्स-रे टैंटलम-आधारित कंट्रास्ट एजेंट युक्त इथेनॉल-आधारित एब्लेटिव समाधान के इंट्राडक्टल डिलीवरी के लिए एक प्रक्रिया का वर्णन करते हैं। जलीय अभिकर्मकों (जैसे, साइटोटॉक्सिक यौगिकों, siRNAs, AdCre) के इंट्राडक्टल वितरण को पहले माउस मॉडल में वर्णित किया गया है। इस प्रकार, हम इथेनॉल के वितरण को अनुकूलित करने के लिए पद्धतिगत संशोधनों और अद्वितीय प्रयोगात्मक विचारों पर अपने प्रोटोकॉल विवरण पर ध्यान केंद्रित करते हैं, इथेनॉल प्रशासन के स्थानीय और प्रणालीगत दुष्प्रभावों को कम करने के लिए, और माइक्रो-सीटी / फ्लोरोस्कोपी इमेजिंग के माध्यम से डक्टल ट्री भरने के विवो विज़ुअलाइज़ेशन के लिए। एक विपरीत-युक्त समाधान के इंजेक्शन के तुरंत बाद डक्टल पेड़ का विज़ुअलाइज़ेशन पूर्ण भरने या असफल परिणामों की पुष्टि के लिए अनुमति देता है जैसे कि अंडरफिलिंग या ओवरफिलिंग। इस प्रक्रिया को अन्य एब्लेटिव यौगिकों के वितरण और इमेजिंग के लिए लागू किया जा सकता है, जिसका उद्देश्य या तो ट्यूमर के गठन को रोकना या स्थानीय रूप से डक्टल पेड़ के माध्यम से सुलभ प्रारंभिक चरण के ट्यूमर का इलाज करना है।
Introduction
स्तन कैंसर एक आम और संभावित घातक बीमारी है जिसमें रोकथाम के लिए उपलब्ध कुछ विकल्प हैं1। सबसे प्रभावी हस्तक्षेप रोगनिरोधी मास्टेक्टॉमी है; हालांकि, केवल उच्च जोखिम वाले व्यक्ति इस प्रक्रिया से गुजरने का विकल्प चुनते हैं क्योंकि यह प्रमुख जीवन-परिवर्तनकारी परिणामों के साथ एक सर्जरी है2। प्रक्रिया स्तन उपकला कोशिकाओं को पूरी तरह से हटा देती है जिसमें से स्तन कैंसर आसपास के ऊतकों के साथ उत्पन्न होता है। इसके परिणामस्वरूप व्यक्ति के लिए शारीरिक, मनोवैज्ञानिक और सामाजिक तनाव हो सकता है, और अक्सर व्यक्तियों को प्राथमिक हस्तक्षेप की पहली पंक्ति के रूप में इस सर्जिकल प्रक्रिया के साथ आगे बढ़ने से रोकता है।
हमने प्रदर्शित किया है कि डक्टल पेड़ में सीधे 70% इथेनॉल (ईटीओएच) युक्त एक एब्लेटिव समाधान का वितरण सीमित संपार्श्विक ऊतक क्षति के साथ स्तन उपकला कोशिकाओं को मारने और माउस मॉडल 3 में स्तन ट्यूमर को रोकने में प्रभावी है। EtOH लंबे समय से स्थानीय उपचार के लिए एक ablative या sclerosing एजेंट के रूप में नैदानिक रूप से इस्तेमाल किया गया है। Percutaneous EtOH इंजेक्शन unrecectable जिगर ट्यूमर, गुर्दे और अधिवृक्क नियोप्लाज्म, और अग्नाशय सिस्टिक ट्यूमर 4,5,6 के लिए एक ablative एजेंट के रूप में प्रयोग किया जाता है; सीलिएक प्लेक्सस न्यूरोलिसिस के लिए दर्द को कम करने के लिए7; और स्तन pseudoaneurysms8 के इलाज के लिए. इंट्रावैस्कुलर ईटीओएच इंजेक्शन का उपयोग धमनीशिरापरक विकृतियों (एवीएम) से सूजन और विरूपण को खत्म करने के लिए एक स्क्लेरोसिंग एजेंट के रूप में किया जाता है, और मकड़ी की नसों और वैरिकाज़ नसों के कॉस्मेटिक उपचार के लिए 9,10,11,12,13। रोगनिरोधी मास्टेक्टॉमी की तरह, एक एब्लेटिव समाधान के स्थानीय वितरण के साथ रोकथाम की सफलता सभी स्तन उपकला कोशिकाओं को पूरी तरह से हटाने की क्षमता पर निर्भर करती है, जिसमें से कैंसर संभावित रूप से उत्पन्न हो सकता है। इसके लिए पुष्टि की आवश्यकता है कि एब्लेटिव पदार्थ ने डक्टल पेड़ को सफलतापूर्वक भर दिया है, इस प्रकार सभी स्तन उपकला कोशिकाओं से सीधे संपर्क किया है। स्तन ग्रंथियों के भीतर पदार्थों को इंजेक्ट करने और छवि-निर्देशित फ्लोरोस्कोपी या डक्टोग्राफी द्वारा उन्हें विज़ुअलाइज़ करने के लिए नैदानिक साधन आसानी से उपलब्ध हैं14,15; इसलिए, सफल प्रसव को वितरित करना और पुष्टि करना दोनों संभव होगा जब यह प्रक्रिया नैदानिक परीक्षणों में मूल्यांकन की गारंटी दे सकती है।
प्रयोगशाला जानवरों में इस छवि-निर्देशित दृष्टिकोण की व्यवहार्यता का प्रदर्शन स्तन कैंसर के लिए एक निवारक उपाय के रूप में इंट्राडक्टल (आईडी) एब्लेशन की प्रभावकारिता और ट्रांसलेशनल व्यवहार्यता स्थापित करने में एक महत्वपूर्ण कदम है। हमारी प्रयोगशाला में, हमने चूहों में सभी स्तन ग्रंथियों को सफलतापूर्वक इंजेक्ट करने के लिए एक विधि विकसित की है, जिसमें साप्ताहिक इंजेक्शन के एक कोर्स में एक कंट्रास्ट एजेंट होता है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि जानवर ईटीओएच की अधिक मात्रा में नहीं झुकता है (चित्रा 1, चित्रा 2, संदर्भ संख्या 3,16)। यह प्रक्रिया परीक्षण समाधान को इंजेक्ट करने के लिए एक आइसोफ्लुरेन-एनेस्थेटिक माउस के निप्पल उद्घाटन के अंदर एक 34 जी सुई रखती है। प्रक्रिया के कुछ प्रमुख सुधारों में तरल और गैसों के लिए गैसटाइट सिरिंज का उपयोग, प्रति डक्टल पेड़ों के प्रति उच्च मात्रा का इंजेक्शन 17, और विस्तारित विरोधी भड़काऊ उपचार शामिल हैं। 5 मिलीग्राम / किलोग्राम कार्प्रोफेन का प्रीक्लिनिकल उपचार, एक एनएसएआईडी, आईडी प्रक्रिया के बाद 2 डी से 7 डी तक एवीएम के लिए नैदानिक स्क्लेरोसिंग थेरेपी के अनुरूप है। आमतौर पर, प्रणालीगत संज्ञाहरण के बाद, रोगियों को 2 दिनों की प्रक्रिया के बाद एनएसएआईडी जैसी विरोधी भड़काऊ दवाएं प्राप्त होती हैं, जिन्हें किसी भी स्थानीय सूजन या दर्द को कम करने के लिए बढ़ाया जा सकता है। शराब का नशा चूहों में 5% सुक्रोज समाधान के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा काफी कम हो जाता है। इस सुक्रोज समाधान के प्रशासन के साथ, चूहों को सुरक्षित रूप से 70% EtOH के 160 μL तक इंजेक्ट किया जा सकता है (चार डक्टल पेड़ों तक; रक्त में EtOH सामग्री के लगभग 0.4 g / dL); जानवरों को आईडी इंजेक्शन के बाद 4 घंटे के भीतर पूरी तरह से ठीक हो गया। चूहों और / या उच्च ईटीओएच सांद्रता में चार से अधिक ग्रंथियों के इंजेक्शन के लिए, हम पर्याप्त वसूली समय की अनुमति देने के लिए अनुक्रमिक सत्र करते हैं। महिलाओं में शराब का नशा शरीर के वजन के लिए शराब की मात्रा के कम अनुपात के कारण कम चिंता का विषय होगा। मानव स्तन में डक्टल पेड़ों की संख्या को देखते हुए 14,15, लगभग 16, और प्रत्येक पेड़ वाहिनी 18,19 को भरने के लिए अनुमानित मात्रा, 70% EtOH के 32 मिलीलीटर तक प्रशासित किया जाएगा। यह मात्रा अन्य नैदानिक प्रक्रियाओं 4,9 में प्रशासित 95% EtOH के 50 मिलीलीटर की तुलना में बहुत कम होगी। थायमिन और ग्लूकोज समाधान के अंतःशिरा प्रशासन का उपयोग ईटीओएच नशे के प्रभावों को कम करने के लिए किया जा सकता है, खासकर उन मामलों में जहां ईटीओएच की एक बड़ी कुल मात्रा को इंजेक्ट करने की आवश्यकता हो सकती है और / या उन महिलाओं के लिए जिनके पास शराब की खपत के लिए कम सहिष्णुता है (उदाहरण के लिए, अल्कोहल या एल्डिहाइड डिहाइड्रोजनेज में एलेलिक वेरिएंट)।
माइक्रो-सीटी / फ्लोरोस्कोपी के माध्यम से इमेजिंग हमें प्रत्येक ग्रंथि के सफल डक्टल भरने की पुष्टि करने की अनुमति देता है (चित्रा 1, चित्रा 2, चित्रा 3)। यह भविष्य के विश्लेषण के लिए दर्ज किया जा सकता है, या वास्तविक समय फ्लोरोस्कोपी इमेजिंग के माध्यम से पल में मूल्यांकन किया जा सकता है, जैसा कि नैदानिक अनुप्रयोग में किया जाएगा, जानवर पर लगाए गए समग्र विकिरण बोझ को सीमित करने के लिए। वीवो में वास्तविक समय छवि-निर्देशित वितरण के लिए इस एब्लेटिव समाधान की विशिष्ट विशेषताओं को और बेहतर बनाने के लिए, हमने पहले एफडीए-अनुमोदित आयोडीन-युक्त कंट्रास्ट की तुलना एक टैंटलम ऑक्साइड (TaOx) से की थी - जिसमें शापिरो लैब 3,16 द्वारा संश्लेषित नैनोपार्टिकल शामिल था। TaOx ने डक्टल ट्री के प्रारंभिक भरने की कल्पना करने के लिए एक माइक्रो-सीटी कंट्रास्ट एजेंट के रूप में बेहतर प्रदर्शन दिखाया (चित्रा 2, चित्रा 3)। TaOx का उपयोग अन्य नैनोपार्टिकल-आधारित रक्त पूल कंट्रास्ट एजेंटों (जैसे, आयोडीन-, बिस्मथ-, या सोने से युक्त) के अधिक व्यवस्थित और अनुदैर्ध्य मूल्यांकन करने के लिए एक संदर्भ विपरीत के रूप में किया जा सकता है और एथिल सेल्यूलोज की विभिन्न सांद्रता के साथ TaOx की संगतता को जेलिंग एजेंट 20,21 के रूप में किया जा सकता है।
Protocol
यहां वर्णित सभी प्रयोगों को मिशिगन स्टेट यूनिवर्सिटी में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के तहत आयोजित किया गया था।
1. विस्तारित विरोधी भड़काऊ उपचार
- सुनिश्चित करें कि EtOH या अन्य संभावित अड़चनों वाले इंजेक्शन समाधान प्राप्त करने वाले चूहों को इंजेक्शन से पहले 2 दिनों से इंजेक्शन के बाद 7 दिनों तक विरोधी भड़काऊ उपचार प्रदान किया जाता है। खुराक की पसंदीदा विधि एक उपयुक्त एकाग्रता पर कार्प्रोफेन युक्त एक सुक्रालोज़ जेल कप के माध्यम से मौखिक वितरण है।
- आवश्यक एकाग्रता के साथ कार्प्रोफेन तैयार करें। इस प्रयोग के लिए, 2 मिलीग्राम / एमएल (स्टॉक समाधान 50 मिलीग्राम / एमएल है) का एक कामकाजी समाधान 1 मिलीग्राम प्रति कप की अंतिम खुराक प्राप्त करने के लिए 0.5 मिलीलीटर इंजेक्ट करने के लिए बाँझ पीबीएस में पतला करके तैयार किया गया था। 1% v / v बाँझ नीले खाद्य डाई (BFD) को कमजोर पड़ने के लिए आवश्यक कुल मात्रा के पीबीएस के एक अंश के स्थान पर जोड़ें ताकि सुक्रालोज़ जेल में दवा के पूर्ण मिश्रण की बेहतर कल्पना की जा सके।
- निर्माता की सिफारिश के अनुसार कार्प्रोफेन अतिरिक्त के लिए एक कप तैयार करें। जब तक अन्यथा अनुशंसित न हो, तब तक कप को 15 मिनट के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में रखें। कप को हटा दें और संदूषण की संभावना को कम करने के लिए उन्हें सूखा दें।
- कप ढक्कन की सतह को साफ करने और सूखने की अनुमति देने के लिए 70% EtOH या एक EtOH पोंछे का उपयोग करें। ढक्कन के माध्यम से कार्प्रोफेन समाधान की आवश्यक मात्रा को इंजेक्ट करने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करें। इस प्रयोग के लिए, 500 μL इंजेक्ट किया जाता है। एक स्टिकर के साथ इंजेक्शन साइट को कवर करें और 15 सेकंड के लिए जोर से हिलाएं।
- 15 s के लिए कप भंवर, और फिर नेत्रहीन पूर्ण मिश्रण सत्यापित करने के बाद बाद में उपयोग के लिए स्टोर। गहरे नीले clumps के लिए देख कर समरूप मिश्रण के लिए कप की जाँच करें. एक महीने तक भंडारण के लिए रेफ्रिजरेटर में जाने से पहले कप को कमरे के तापमान पर आने की अनुमति दें।
नोट: इन कपों को कमरे के तापमान पर भी संग्रहीत किया जा सकता है, यदि आवश्यक हो, तो एक बार खुराक, लेकिन निर्माता से दवा प्रभावकारिता मार्गदर्शन पर ध्यान देने के लिए ध्यान रखें। स्टिकर डेटिंग एक कलम या तेज मार्कर ढक्कन puncturing जोखिम के बिना इंजेक्शन की तारीख का ट्रैक रखने के साथ मदद करता है.
- जब उपयोग करने के लिए तैयार हो, तो 70% EtOH के साथ कप के बाहरी हिस्से को पोंछ दें। ढक्कन को छील लें और कप को चूहों के साथ पिंजरे में रखें। कप को हर दूसरे दिन या खाली होने पर बदलें। एक कप 1-2 दिनों के लिए पांच चूहों के लिए पर्याप्त होना चाहिए।
2. प्रीऑपरेटिव तैयारी
नोट:: यह चरण इंजेक्शन से 2-3 दिन पहले होगा।
- एक आइसोफ्लुरेन वेपोराइज़र (2% -3% आइसोफ्लुरेन, 1.5 एल / मिनट ऑक्सीजन) का उपयोग करके माउस को एनेस्थेटिक करें और आंख स्नेहक लागू करें। 1% -3% isoflurane पर संज्ञाहरण बनाए रखें, जैसा कि नाक शंकु के साथ पूरी प्रक्रिया के दौरान आवश्यक है, जबकि जानवर की श्वसन दर की सावधानीपूर्वक निगरानी करते हैं।
- नाक शंकु पर रहते हुए माउस आंखों पर आंख स्नेहक लागू करें, और फिर माउस को अपनी पीठ पर रखें। निप्पल क्षेत्र (स्तन ग्रंथि का क्षेत्र जिसे इंजेक्ट किया जाएगा) पर ओवर-द-काउंटर डिपिलेटरी क्रीम लागू करने के लिए एक कपास इत्तला एप्लिकेटर का उपयोग करें। फर को जल्दी से ढीला करने में मदद करने के लिए ऐप्लिकेटर के साथ 10-30 सेकंड के लिए क्षेत्र में क्रीम रगड़ें।
नोट: आवश्यकता से अधिक समय तक जानवर पर क्रीम न छोड़ें और त्वचा को जलाने से बचने के लिए पूरी तरह से हटा दें। - आवेदन के 10-30 s के बाद, पूरी तरह से क्रीम को हटाने और जानवर से फर को ढीला करने के लिए धुंध पर गर्म पानी का उपयोग करें। अंतिम कुल्ला के बाद एक साफ सूखी धुंध के साथ सुखाने से पहले क्रीम हटाने के लिए ताजा धुंध के साथ क्षेत्र के कम से कम दो से चार कुल्ला प्रदर्शन करें। अच्छी दृश्यता और निपल्स तक पहुंच की पुष्टि करने के लिए फर हटाने के क्षेत्र की जांच करें। यदि आवश्यक हो तो depilatory क्रीम आवेदन के साथ दोहराएँ।
- संज्ञाहरण से उबरने के लिए माउस को हीटिंग पैड पर एक अलग साफ, सूखी वसूली पिंजरे में रखें। माउस का निरीक्षण करें जब तक कि यह संज्ञाहरण से पूरी तरह से ठीक न हो जाए और इसे घर के पिंजरे में वापस कर दे।
- वसूली के बाद विरोधी भड़काऊ एजेंट की पूर्व खुराक के लिए carprofen (1 मिलीग्राम / कप) युक्त sucralose जेल समाधान के एक कप के साथ चूहों प्रदान करें। एक कप 2 दिनों तक कार्प्रोफेन के साथ पांच चूहों तक प्रदान कर सकता है। दैनिक कप की जांच करें और आवश्यकतानुसार बदलें, या हर दूसरे दिन यदि पूरी तरह से उपभोग नहीं किया जाता है।
3. इंट्राडक्टल इंजेक्शन
नोट:: यह चरण प्रीऑपरेटिव तैयारी के बाद 2-3 दिन हो जाएगा।
- फॉस्फेट बफ़र्ड खारा (पीबीएस) का उपयोग करके 16 में वर्णित के रूप में खरीदे गए पाउडर फॉर्मूलेशन से 333.3 mM tantalum ऑक्साइड (TaOx) स्टॉक समाधान तैयार करें। यदि पाउडर समाधान में पूरी तरह से भंग नहीं होता है तो कोमल गर्मी का उपयोग करें।
- एक अंतिम 70% EtOH 100mM TaOx समाधान के लिए सात भागों 100% EtOH के साथ तीन भागों स्टॉक TaOx मिश्रण द्वारा एक ablative इमेजिंग समाधान बनाओ। इंजेक्शन के दौरान सहायता प्राप्त विज़ुअलाइज़ेशन के लिए अंतिम समाधान में 1% v / v नीले खाद्य डाई जोड़ें। प्रयोग की आवश्यकता के आधार पर एक मात्रा तैयार करें।
नोट: ग्रंथि जोड़े 1 और 5 समाधान के 30 μL तक पकड़ सकते हैं, जबकि अन्य सभी जोड़े को 9 सप्ताह की उम्र या पुराने FVB चूहों में 50 μL तक इंजेक्ट किया जा सकता है। - प्रीऑपरेटिव तैयारी के रूप में आइसोफ्लुरान के साथ माउस को एनेस्थेटिकाइज़ करें और माउस को नाक शंकु में ले जाएं एक बार पूरी तरह से एनेस्थेटिक हो जाएं। इंजेक्शन के लिए जानवर को अपनी पीठ पर रखने से पहले आंख स्नेहक लागू करें। टेप का उपयोग कर स्टीरियोस्कोप के नीचे माउस को सुरक्षित करें, यदि आवश्यक हो।
- इंजेक्शन समाधान की वांछित मात्रा के साथ सिरिंज तैयार करें। इंजेक्शन समाधान के 21-51 μL को 34 G सुई के साथ 50 μL सिरिंज में लोड करें। सुई को निप्पल से हटाने के बाद उस मात्रा के संभावित रिसाव के लिए खाते में समाधान का एक अतिरिक्त 1 μL लोड करें।
नोट:: ऊपर दिए गए वॉल्यूम यहाँ प्रस्तुत विशिष्ट प्रक्रियाओं के लिए हैं। कोई भी इस समझ के साथ वांछित किसी भी मात्रा को इंजेक्ट कर सकता है कि अधिकांश ग्रंथियों को ओवरफिल किया जाएगा यदि क्रमशः ग्रंथि जोड़े 1 और 5, या 2-4 में 30 μL या 50 μL से ऊपर जा रहा है। इंजेक्शन से ठीक पहले समाधान के मुक्त प्रवाह के लिए परीक्षण करने के लिए इंजेक्शन समाधान की अतिरिक्त मात्रा के साथ सुई को भरने में सहायक है। यदि एक से अधिक स्तन ग्रंथि को इंजेक्ट किया जाता है, तो समय बचाने के लिए कई सिरिंज को प्रीफिल करें। हालांकि, सिरिंज में लंबे समय तक समाधान न छोड़ें। - किसी भी मृत त्वचा को हटाकर इंजेक्शन के लिए निपल्स तैयार करें जो ठीक नुकीले संदंश के साथ निप्पल खोलने को कवर करता है।
- चिमटी के साथ धीरे से निप्पल पकड़ो। दिखाई देने वाली सुई के बेवेल के साथ, सुई को निप्पल खोलने में डालें जब तक कि बेवल पूरी तरह से ठीक इत्तला संदंश से मार्गदर्शन सहायता के साथ कवर न हो जाए। सुई को निप्पल में धकेलने के बजाय सुई पर निप्पल को खींचना आवश्यक हो सकता है (तालिका 1)।
- एक बार जब सुई बेवल पूरी तरह से निप्पल से घिरा हुआ है और मुख्य वाहिनी में है, तो लगभग 40 μL / मिनट की स्थिर दर से समाधान को इंजेक्ट करना शुरू करें। यह सुनिश्चित करने के लिए बहुत जल्दी इंजेक्शन लगाने से बचें कि डक्टल पेड़ क्षतिग्रस्त नहीं हुआ है। संदंश का उपयोग करके सहायता के साथ सुई को हटाने से पहले मात्रा को पूरी तरह से इंजेक्ट करने के बाद सुई को 30 सेकंड के लिए निप्पल में रखें। यह निप्पल (चित्रा 2) से बाहर निकलने वाले समाधान से बचने के लिए किया जाता है।
- असफल इंजेक्शन के किसी भी संकेत के लिए क्षेत्र का आकलन करें। एक गुंबददार उपस्थिति क्षेत्र में एक वसा पैड इंजेक्शन या आघात का संकेत दे सकती है।
- शेष स्तन ग्रंथियों को इंजेक्ट करने के लिए आगे बढ़ें।
- जबकि जानवर अभी भी एनेस्थेटिक है, शराब के नशे के संभावित प्रभावों को कम करने के लिए इंट्रापेरिटोनियल रूप से 5% सुक्रोज समाधान (10 एमएल / किलोग्राम तक) के 200-250 μL इंजेक्ट करें।
4. माइक्रो सीटी इमेजिंग
- सभी वांछित ग्रंथियों को इंजेक्ट करने के बाद, जानवर को माइक्रो-सीटी सिस्टम में तेजी से स्थानांतरित करें और शामिल आइसोफ्लुरेन वेपोराइज़र का उपयोग करके संज्ञाहरण बनाए रखना जारी रखें। इमेजिंग स्थिति को मानकीकृत करने के लिए जानवर को टेप किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, प्रत्येक हिंद पैर को एक विस्तारित स्थिति में टैप करने से परिणामी छवि में रुचि की निचली ग्रंथियों से जानवर की पैर की हड्डियों को आगे रखने में मदद मिलती है।
नोट: जानवरों को डक्टल पेड़ के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए विभिन्न स्कैन पैरामीटर का उपयोग करके चित्रित किया जा सकता है यदि जानवर के लिए विकिरण की उचित स्वीकार्य जीवनकाल खुराक निर्धारित करने के लिए देखभाल की जाती है और संचयी खुराक इस स्तर से अधिक नहीं होती है। फ्लोरोस्कोपी स्टिल और वीडियो को विकिरण जोखिम को कम करने के लिए स्कैन किए बिना उत्पन्न किया जा सकता है (चित्रा 2)। - माउस को फ्लोरोस्कोपी पूर्वावलोकन फ़ंक्शन के साथ दृश्य के उपयुक्त क्षेत्र में रखें।
- अच्छा संकल्प और दोहराया मानक (2 मिनट) अधिग्रहण स्कैन के लिए अवसर के साथ माउस डक्टल पेड़ की TaOx इमेजिंग प्रदर्शन. निम्न स्कैन पैरामीटर का उपयोग करें: 90 kVp/ देखने का क्षेत्र (एफओवी), 36 मिमी; स्लाइस की संख्या, 512; टुकड़ा मोटाई, 72 μm; voxel संकल्प, 72 μm3.
- जानवरों में भी बेहतर रिज़ॉल्यूशन के लिए लंबे समय तक (4 या 14 मिनट) उच्च रिज़ॉल्यूशन स्कैन प्राप्त करें। ये इच्छामृत्यु से पहले टर्मिनल प्रक्रियाओं के रूप में स्वीकार्य हैं। हालांकि, ये जानवरों के लिए एक ही पैरामीटर का उपयोग करके अनुदैर्ध्य रूप से स्कैन करने के लिए स्वीकार्य नहीं हैं क्योंकि यह विकिरण बीमारी का कारण बनेगा।
- इमेजिंग प्रोटोकॉल पूरा होने के बाद, जानवर को संज्ञाहरण से हटा दें और हीटिंग पैड पर एक अलग साफ, सूखी वसूली पिंजरे में स्थानांतरित करें। पूरी तरह से ठीक होने तक जानवर का निरीक्षण करें, और फिर इसे घर के पिंजरे में वापस कर दें। इंजेक्शन के बाद 7 दिनों तक कार्प्रोफेन पर एब्लेटिव समाधान के साथ इंजेक्ट किए गए जानवरों को रखें।
- माइक्रो-सीटी सॉफ़्टवेयर (सिस्टम में निर्मित) के भीतर किसी भी स्कैन की गई छवियों के त्वरित प्रस्तुतीकरण करें ताकि औपचारिक विश्लेषण के बिना किसी भी विपरीत लीक या भरने की कमी (चित्रा 2) की बेहतर सराहना की जा सके।
- प्रकाशन या स्कैन के विस्तृत विश्लेषण के लिए आगे औपचारिक छवि विश्लेषण करें जो वांछित होने पर ब्याज के क्षेत्र के विभाजन की अनुमति देता है (चित्रा 3)।
नोट: इन विधियों के बीच प्राथमिक अंतर केवल डक्टल ट्री (औपचारिक प्रस्तुति) बनाम पूरी छवि (त्वरित प्रस्तुति) को थ्रेशोल्ड करने की आवश्यकता को थ्रेशोल्ड करने की क्षमता होगी। अन्य माप और छवियों को डक्टल ट्री भरने की सफलता को सबसे अच्छा प्रदर्शित करने के लिए सॉफ़्टवेयर पैकेज का उपयोग करके उत्पन्न किया जा सकता है।
5. छवि विश्लेषण
- एक विशेष सॉफ्टवेयर पैकेज का उपयोग कर इंजेक्टेड डक्टल ट्री का रेंडरिंग करें। ऐसा करने के लिए, आगे की छवि प्रसंस्करण के साथ स्तन वसा पैड को विभाजित करें।
- वसा पैड (पेरिटोनियल गुहा, ऊरु की मांसपेशियों और त्वचा की तुलना में गहरा कम्पार्टमेंट) को विभाजित करने के लिए, जिसके भीतर ब्याज का डक्टल पेड़ निहित है, मैनुअल मेनू से स्प्लाइन ट्रेस विकल्प का चयन करें। हर तीसरे डेटा स्लाइस पर वसा पैड रूपरेखा का पता लगाएं।
- सभी ट्रेस किए गए और अनट्रेस्ड स्लाइस को एक ही ऑब्जेक्ट में कनेक्ट करने के लिए अर्ध-स्वचालित मेनू से प्रोपेगेट ऑब्जेक्ट्स विकल्प पर क्लिक करें।
- वांछित HU श्रेणी (300-3,000 HU एक अच्छा प्रारंभिक बिंदु है) इनपुट करने के लिए अर्ध-स्वचालित मेनू से थ्रेशोल्ड वॉल्यूम विकल्प का चयन करें, और फिर थ्रेशोल्ड रेंडिशन बटन पर क्लिक करें एक प्रस्तुति बनाने के लिए जो केवल डक्टल ट्री के भीतर कंट्रास्ट (TaOx) प्रदर्शित करता है और नरम ऊतक को समाप्त करता है।
- आसपास की संरचनाओं के बिना केवल 3 डी प्रस्तुति को देखने के लिए प्राथमिक के रूप में प्रस्तुतीकरण के लिए दृश्य बटन टॉगल करें।
नोट: अतिरिक्त सॉफ़्टवेयर सुविधाएँ माप के लिए 3 डी प्रस्तुतिकरण (यानी, लंबाई, मात्रा, आदि) से बने होने की अनुमति देती हैं।
Representative Results
मादा चूहों में एक एकल डक्टल पेड़ के साथ स्तन ग्रंथियों के पांच जोड़े होते हैं जो निप्पल छिद्र 22 पर खुलते हैं। विकासशील डक्टल पेड़ की युक्तियों पर टर्मिनल एंड बड्स (टीईबी), प्रोलिफेरेटिव संरचनाएं हैं जो विकास और शाखाओं को निर्देशित करती हैं। यौवन के बाद जब बढ़ाव चरण पूरा हो जाता है, तो टीईबी पीछे हट जाते हैं और टर्मिनल नलिकाओं या वायुकोशीय कलियों से कार्यात्मक और शारीरिक रूप से अप्रभेद्य हो जाते हैं23। टर्मिनल डक्टल लोब्युलर इकाइयां मनुष्यों में एक समान कार्य करती हैं जैसा कि टीईबी चूहों में करते हैं और वे साइटें हैं जिनसे स्तन कैंसर मुख्य रूप से उत्पन्न होता है24,25। हम 9 सप्ताह पुराने FVB / N, NSG, और अन्य माउस उपभेदों (चित्रा 1, चित्रा 2, चित्रा 3, देखें संदर्भ 3,16) के वक्षीय और पेट के स्तन ग्रंथियों के पूरे डक्टल पेड़ को भरने के लिए 70% EtOH समाधान के 50 μL तक इंजेक्ट कर सकते हैं। एक विशिष्ट प्रयोग में, हम पशु वसूली के लिए अनुमति देने के लिए 7 दिनों से अलग दो लगातार आईडी प्रक्रियाओं में 70% EtOH और 100 mM TaOx के एक ablative समाधान के साथ आठ स्तन ग्रंथियों तक इंजेक्ट कर सकते हैं (चित्रा 2)। जानवरों को पूरे डक्टल पेड़ (चित्रा 2) के समाधान के सफल वितरण का आकलन करने के लिए अंतिम आईडी इंजेक्शन के तुरंत बाद माइक्रो-सीटी द्वारा चित्रित किया जाता है। हमारे अनुभव में, वंक्षण ग्रंथियों के निपल्स लगभग 60% जानवरों में इंजेक्शन के लिए उपयुक्त हैं, और लगभग 40% में गर्भाशय ग्रीवा ग्रंथियों के निपल्स। उपयुक्त होने पर, हम गर्भाशय ग्रीवा और वंक्षण स्तन ग्रंथियों (चित्रा 2) के पूरे डक्टल पेड़ को भरने के लिए 70% ईटीओएच समाधान के 30 μL तक इंजेक्ट कर सकते हैं। FVB और NSG उपभेद आमतौर पर C57BL / 6J या मिश्रित आनुवंशिक पृष्ठभूमि उपभेदों की तुलना में इंजेक्शन के लिए अधिक उपयुक्त निपल्स पेश करते हैं। पूरे माउंट दोहरी धुंधला प्रोटोकॉल या 3 डी confocal माइक्रोस्कोपी अच्छी ओर्थोगोनल तरीके हैं यह पुष्टि करने के लिए कि डक्टल पेड़ किस हद तक भरा गया था (चित्रा 3)। ये ऊतक-सहसंबंधित विश्लेषण संगत हैं और विवो इमेजिंग में बाद में किए जा सकते हैं। इन ओर्थोगोनल विधियों की स्पष्ट सीमा यह है कि उन्हें ऊतक संग्रह और विश्लेषण के लिए पशु समाप्ति की आवश्यकता होती है; हालांकि, एक नए ablative सूत्रीकरण के एक अनुकूलन चरण में, वे स्वतंत्र सत्यापन प्रदान करते हैं।
चित्रा 1: intraductal प्रक्रिया और छवि विश्लेषण का वर्कफ़्लो। ID प्रक्रिया के मुख्य चरणों को हाइलाइट किया गया है। अधिक जानकारी के लिए वीडियो देखें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: सफल cannulation और कई स्तन ग्रंथियों के लिए ablative समाधान के वितरण. (ए) एफवीबी और एनएसजी माउस उपभेदों में प्रतिनिधि निप्पल भिन्नता। लंबे निपल्स छोटे निपल्स की तुलना में कैनुलेट करना आसान होता है, जबकि बहुत छोटे या अवशिष्ट निपल्स को कैनुलेट नहीं किया जा सकता है। एक बार cannulated, निप्पल का आकार सफल intraductal वितरण को प्रभावित नहीं करता है। (बी) एक एब्लेटिव समाधान में नीले रंग की डाई का सकल संरचनात्मक विश्लेषण डक्टल पेड़ भरने और वितरण की सफलता के पूर्व विवो सबूत प्रदान करता है। (C,D) वास्तविक समय फ्लोरोस्कोपी और पोस्ट-छवि अधिग्रहण 3 डी माइक्रो-सीटी प्रस्तुति वितरण की सफलता के विवो सबूत में प्रदान करती है। (डी) पेट और वंक्षण ग्रंथियों दोनों का सफल इंजेक्शन, और चार वक्षीय ग्रंथियों में से तीन (ग्रंथि # 2 में वसा पैड इंजेक्शन)। स्केल सलाखों विभिन्न आवर्धन पर छवियों में 1 मिमी के अनुरूप है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 3: डक्टल ट्री भरने के विवो और पूर्व विवो प्रदर्शन में। 70% EtOH / 100 mM TaOx नैनोकणों / इवांस ब्लू समाधान को माउस पेट के स्तन ग्रंथि में इंट्राडक्टली इंजेक्ट किया गया था और तुरंत माइक्रो-सीटी द्वारा चित्रित किया गया था और दोहरी पूरे माउंट स्टेनिंग के लिए संसाधित किया गया था। डक्टल ट्री को एक छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर पैकेज का उपयोग करके पुनर्निर्मित किया गया था। समाधान पूरी तरह से carmine फिटकरी-दाग डक्टल पेड़ भरता है. ई-कैडरिन (Cdh1) के लिए एक अलग ग्रंथि immunostained था, Benzyl Alcohol: Benzyl Benzoate का उपयोग करके साफ कर दिया गया था और confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा चित्रित के रूप में वर्णित 26. डक्टल ट्री को छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके पुनर्निर्मित किया गया था। Confocal छवि के छद्म रंग प्रतिपादन (यानी, सफेद करने के लिए काले पृष्ठभूमि, मैजेंटा के लिए हरे मार्कर संकेत) छवि संपादन सॉफ्टवेयर की छवि उलटा समारोह के साथ प्राप्त किया गया था। स्केल सलाखों विभिन्न आवर्धन पर छवियों में 1 मिमी के अनुरूप है। इस आंकड़े को संदर्भ संख्या 3 से संशोधित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| समस्या | उपस्थिति | घोल | |||
| लघु निप्पल (चित्र 2) | निप्पल कम प्रोफ़ाइल है - मुश्किल हड़पने के लिए | कभी-कभी निप्पल के पास त्वचा को पकड़ना और सुई के साथ निप्पल के केंद्र को लक्षित करना आसान होता है। सुई संभवतः त्वचा के नीचे गोता लगाएगी। धीरे-धीरे ऊपर खींचने से निप्पल को सुई की नोक पर थोड़ा सा होने का पता चल सकता है और इसे पकड़ने और सुई पर बाकी के रास्ते को खींचने के लिए कमरा दे सकता है। सुई के कोण के बारे में त्वचा के नीचे डाइविंग करते समय बहुत सावधान रहें। अनजाने में गलत कोण पर छुरा घोंपकर वसा पैड इंजेक्शन प्राप्त करना आसान है। | |||
| वसा निप्पल | थोड़ा छीलने योग्य मृत त्वचा के साथ अन्य निपल्स की तुलना में बहुत बड़ा - आसानी से गुंजाइश के बिना दिखाई देता है | इन निपल्स पर एक वसा पैड इंजेक्शन प्राप्त करने के लिए बहुत आसान है। निप्पल में डालने पर सुई के कोण के बारे में बहुत सावधान रहें। | |||
| वसा पैड इंजेक्शन (चित्र 2) | निप्पल के चारों ओर सूजन और संभवतः निप्पल में ही - यह देखना सबसे आसान है कि क्या रंग इंजेक्शन समाधान में जोड़ा गया है | यदि निप्पल पहले कुछ उल इंजेक्शन के साथ सूजन है, तो सुई को हटा दें, और कोण की अधिक देखभाल के साथ फिर से डालने का प्रयास करें। फिर से इंजेक्शन शुरू करें और आगे की सूजन के लिए देखें। यदि सूजन जारी रहती है, तो प्रयास छोड़ दें। एक निप्पल को सफलतापूर्वक इंजेक्ट करना बहुत दुर्लभ है जो एक वसा पैड इंजेक्शन के रूप में शुरू हुआ है। | |||
| घाव / scabbing | ईटीओएच समाधान के इंजेक्शन साइट के पास खुला घाव या स्कैबिंग | घावों को खोलने के लिए ट्रिपल एंटीबायोटिक मरहम लागू करें लेकिन स्कैब किए गए घावों को अकेला छोड़ दें। स्कैब्स पर मरहम लगाने से संभावना बढ़ सकती है कि जानवर स्कैब को परेशान करेगा और इसे हटा देगा। घाव की गंभीरता के आधार पर ठीक होने तक हर 1-2 दिनों की जांच करें। कार्प्रोफेन को तब तक दिया जाना चाहिए जब तक कि सामान्य खिड़की से परे हो। | |||
तालिका 1: समस्या निवारण और उपयोगी युक्तियाँ.
Discussion
रोगनिरोधी मास्टेक्टॉमी वर्तमान में स्तन कैंसर के लिए सबसे प्रभावी हस्तक्षेप है, फिर भी इसके कुछ गंभीर नकारात्मक प्रभाव हैं। एक EtOH-आधारित समाधान के साथ स्तन उपकला कोशिकाओं का स्थानीय एब्लेशन एक आशाजनक वैकल्पिक चिकित्सा है क्योंकि हमने स्तन कैंसर के आक्रामक FVB-Tg-C3 (1) -TAg माउस मॉडल पर एक सबूत-की-अवधारणा अध्ययन में प्रदर्शन किया। इस ablative समाधान के आईडी इंजेक्शन स्तन उपकला कोशिकाओं जो स्तन कैंसर सीमित संपार्श्विक क्षति के साथ उत्पन्न होता है के लक्ष्यीकरण के लिए अनुमति देता है. एब्लेटिव समाधान के लिए एक एक्स-रे कंट्रास्ट एजेंट के अलावा रोकथाम पर समाधान की प्रभावशीलता की बढ़ी हुई समझ के लिए अनुमति देता है, क्योंकि हम देख सकते हैं कि क्या प्रत्येक डक्टल पेड़ इंजेक्शन (चित्रा 2 बी) के बाद सफलतापूर्वक भरा गया है या नहीं। फ्लोरोस्कोपी द्वारा इंजेक्ट की गई ग्रंथियों को तुरंत इंजेक्शन दर्पण के बाद देखना डक्टल पेड़ के सफल भरने की पुष्टि करने के लिए क्लिनिक में क्या किया जाएगा। समाधान वितरण की दृश्य पुष्टि सबसे अच्छी तरह से सूचित करेगी कि पेड़ के सभी हिस्सों को वास्तविक समय में पहुंचा गया है या नहीं। यह उस समय या भविष्य के सत्र में भरने को पूरा करने के लिए आगे के इंजेक्शन के लिए प्रदर्शन करने की अनुमति दे सकता है। यह बहुत महत्व का है कि एब्लेटिव समाधान डक्टल पेड़ के सभी हिस्सों तक पहुंचता है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि सभी उपकला कोशिकाओं को मारने के लिए एक्सेस किया जा सकता है (चित्रा 3)। पेड़ के भीतर जीवित उपकला कोशिकाओं को पीछे छोड़ना इस संभावना के लिए अनुमति देगा कि स्तन कैंसर अभी भी उत्पन्न हो सकता है। इंजेक्शन की छवि की सफलता के लिए आईडी इंजेक्शन में इसके विपरीत का उपयोग करना अन्य योगों के लिए भी उपयोगी हो सकता है। तालिका 1 समस्या निवारण और उपयोगी युक्तियाँ प्रदान करता है। अन्य अध्ययनों ने वायरल कणों (जैसे, AdCre, CRISPR गाइड आरएनए), हार्मोन, साइटोटोक्सिक यौगिकों, siRNAs और / या चूहों में एजेंटों को लक्षित करने के लिए आईडी डिलीवरी प्रोटोकॉल का वर्णन किया है3,16,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37 , 38, चूहों 24,32,39,40,41, और खरगोश42,43,44,45,46,47. स्वतंत्र नैदानिक अध्ययनों ने कीमोथेरेपी 40,48,49 के स्थानीय वितरण के लिए प्रति स्तन आठ नलिकाओं तक के सफल कैनुलेशन की सूचना दी। रोकथाम के उद्देश्य से अन्य समाधानों को वितरित करते समय या उपचार की दिशा में तैयार होने पर पूर्ण भरने की कल्पना करना समान कारणों से सार्थक होगा। ज्ञान है कि समाधान पेड़ की सभी शाखाओं और टर्मिनल सिरों तक पहुंच गया है, सफल रोकथाम या उपचार का आकलन करने में जानकारीपूर्ण होगा।
हम mice33,34 या अन्य पशु मॉडल47 में किसी भी अन्य intraductal इमेजिंग विधियों के बारे में नहीं जानते हैं जो TaOx नैनोकणों के उच्च रिज़ॉल्यूशन को बर्दाश्त करते हैं। ध्यान दें, मुरीन डक्टल पेड़ में TaOx नैदानिक डक्टोग्राफी 3,16 के लिए एफडीए-अनुमोदित कंट्रास्ट एजेंटों को मात देता है। जैसा कि हम स्तन कैंसर को रोकने की अपनी क्षमता के लिए आईडी एब्लेटिव प्रक्रिया का आकलन करना जारी रखते हैं, हम अधिक सटीक रूप से यह निर्धारित करने में सक्षम होंगे कि आईडी डिलीवरी के बाद इमेजिंग के माध्यम से दिए गए अतिरिक्त डेटा की मदद से कौन सी ग्रंथियों का कैंसर उत्पन्न होता है। उदाहरण के लिए, कोई यह निर्धारित कर सकता है कि क्या एक ग्रंथि जो केवल आंशिक रूप से भरी हुई थी, ट्यूमर के गठन के परिणामस्वरूप एक गैर-इंजेक्शन ग्रंथि की तुलना में अधिक संभावना है, जो उच्च जोखिम वाली महिला पर असफल इंजेक्शन की सुरक्षा प्रोफ़ाइल और चिंता को संबोधित करती है। इस तकनीक की कुछ सीमाएं हैं। यह एक अपेक्षाकृत चुनौतीपूर्ण माउस तकनीक है जिसके लिए ऑपरेटर की निपुणता और प्रवीणता की आवश्यकता होती है ताकि प्रत्येक वाहिनी में हेरफेर और सफलतापूर्वक कैनुलेट किया जा सके। प्रत्येक व्यक्तिगत इंजेक्शन एक स्वतंत्र घटना है इस प्रकार एक या अधिक ग्रंथियों पर असफल इंजेक्शन परिणाम व्याख्या से समझौता कर सकता है। मुरीन स्तन ग्रंथि के आकार और निप्पल की नाजुकता को देखते हुए, फ्लोरोस्कोपी या इसी तरह की छवि-मार्गदर्शन तकनीक वास्तविक समय में सूचित करने के लिए उपलब्ध नहीं है जब जलसेक को रोकना है। यह वास्तविक समय छवि-मार्गदर्शन एक ablative समाधान के स्थानीय वितरण के नैदानिक कार्यान्वयन के लिए एक आवश्यकता होगी।
Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
इस काम को भाग में, राष्ट्रीय कैंसर संस्थान R21 CA226579 और R01 CA258314 अनुदान द्वारा LFS को और राष्ट्रीय जैव चिकित्सा इमेजिंग और बायोइंजीनियरिंग R01 EB029418 अनुदान के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा ईएमएस को अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था। हम अपने इमेजिंग सिस्टम और तकनीकी विशेषज्ञता के उपयोग के लिए मात्रात्मक (IQ) स्वास्थ्य विज्ञान और इंजीनियरिंग इमेजिंग कोर सुविधा के लिए MSU संस्थान को धन्यवाद देना चाहते हैं। हम वीडियो की सामग्री और पशु कल्याण दिशानिर्देशों के पालन के लिए आंकड़ों की समीक्षा करने के लिए डॉ डेनिएल फर्ग्यूसन को धन्यवाद देना चाहते हैं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AnalyzeDirect v12.0 | Caliper | n/a | For micro-CT image processing |
| Carprieve, Carprofen 50 mg/mL | Allivet | 50647 | For anti-inflammatory treatment |
| Evans blue | Sigma | E2129-50G | For injection visualization |
| Hot water bath | Toolots | Yidu_HH-S2 | For preparing carprofen cups |
| Imaris | Bitplane | n/a | For confocal image processing |
| MediGel Sucralose Cups | ClearH2O | 74-02-5022 | For delivery of carprofen |
| Model 1705 RN Syringe, 50μL | Hamilton | 7655-01 | For intraductal injection |
| Photoshop 2021 | Adobe | n/a | For image processing |
| Quantum GX2 microCT Imaging System | Perkin Elmer | CLS149276 | For micro-CT image acquisition |
| Small Hub RN Needle, 34 gauge, custom (12° bevel angle, 0.375 in, point style 4) | Hamilton | 207434 | For intraductal injection |
| Stereo Microscope SZM Series | AmScope | SM-4TPZ-144 | For intraductal injection |
| Sterile blue food dye | McCormick | 930641 | For injection visualization |
| Sterile phosphate buffered saline (PBS) | ThermoFisher | 14190250 | For solution preparation |
| Stickers | DOT Scientific | DOTSCI-C50 | For preparing carprofen cups |
| Sucrose | Calbiochem | 8550-5KG | For intraductal injection |
| Syringes | Fisher | 14-826-79 | For preparing carprofen cups |
| Vortex | VWR | 10153-834 | For preparing carprofen cups |
| Warming pump/pad(s) | Braintree Scientific | HTP-1500 120V; AP-R 26E | For intraductal injection/preoperative preparation |
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