Summary
Denne protokol fokuserer på alkali burn-induceret hornhinde neovaskularisering hos mus. Metoden genererer en reproducerbar og kontrollerbar hornhindesygdomsmodel til undersøgelse af patologisk angiogenese og de tilhørende molekylære mekanismer og til afprøvning af nye farmakologiske midler til forebyggelse af neovaskularisering af hornhinden.
Abstract
Hornhinde neovaskularisering (CoNV), en patologisk form for angiogenese, involverer vækst af blod og lymfekar i den avaskulære hornhinde fra limbussen og påvirker gennemsigtighed og syn negativt. Alkaliforbrænding er en af de mest almindelige former for okulært traume, der fører til CoNV. I denne protokol induceres CoNV eksperimentelt under anvendelse af natriumhydroxidopløsning på en kontrolleret måde for at sikre reproducerbarhed. Alkaliforbrændingsmodellen er nyttig til forståelse af CoNV's patologi og kan udvides til at studere angiogenese generelt på grund af hornhindens avascularitet, gennemsigtighed og tilgængelighed. I dette arbejde blev CoNV analyseret ved direkte undersøgelse under et dissekerende mikroskop og ved immunfarvning af fladmonterede hornhinder ved hjælp af anti-CD31 mAb. Lymfangiogenese blev påvist på fladmonterede hornhinder ved immunfarvning ved anvendelse af anti-LYVE-1 mAb. Hornhindeødem blev visualiseret og kvantificeret ved hjælp af optisk kohærenstomografi (OCT). Sammenfattende vil denne model bidrage til at fremme eksisterende neovaskulariseringsassays og opdage nye behandlingsstrategier for patologisk okulær og ekstraokulær angiogenese.
Introduction
Hornhinden er et avaskulært væv, der opretholder sin gennemsigtighed ved at etablere et angiogent privilegium 1,2. Skader på hornhinden kan resultere i betændelse og udvikling af blod og lymfekar samt fibrose3. Hornhindeneovaskularisering (CoNV) fører til synshandicap og er den næststørste årsag til blindhed på verdensplan4. CoNV påvirker omkring 1,4 millioner mennesker i USA om året5. CoNV kan induceres af forskellige faktorer, herunder kemiske forbrændinger, infektioner, betændelse og hypoxi 3,6. Kemiske forbrændinger er en af de mest almindelige okulære nødsituationer, og de tegner sig for ca. 13,2% af okulære traumer og kræver øjeblikkelig vurdering og behandling7. Kemiske forbrændinger kan være alkali- eller syreforbrændinger, men alkaliforbrændinger forårsager mere alvorlig skade, da alkali trænger dybere ind i vævet8.
Musmodeller af alkaliforbrænding bruges i vid udstrækning til at studere CoNV og sårheling. Sammenlignet med hornhindelommeangiogenesemodellen 9,10 er alkaliforbrændingsmodeller relativt ligetil at skabe og kan også bruges til at studere hornhindebetændelse, fibrose og epitelproliferation. Disse modeller er også tættere forbundet med kliniske kemiske forbrændinger end hornhindesuturmodeller af angiogenese11. Ved alkaliforbrænding udvikler den ellers avaskulære hornhinde blodkar på grund af betændelse og en ubalance i antiangiogene og proangiogene faktorer 1,2. Ulemperne ved hornhindealkaliforbrændingsmodeller er vanskelighederne med at kontrollere arealet og sværhedsgraden af alkaliforbrændingen, variationen i hornhindeneovaskularisering og utilsigtet forbrænding af det tilstødende væv på grund af overskydende alkaliopløsning. Formålet med denne undersøgelse er at beskrive en kontrolleret hornhindealkaliforbrændingsmodel hos mus ved hjælp af filterpapir gennemblødt i natriumhydroxidopløsning. Denne model kunne bruges til at studere angiogene faktorer, antiangiogene terapeutiske reagenser og andre faktorer og reagenser, der kunne modulere inflammation og fibrose.
Protocol
Alt dyrearbejde, herunder forsøgsprocedurer og eutanasi, blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Baylor College of Medicine med protokolnummer AN-8790.
1. Fremstilling af 1 N NaOH
- Tilsæt 4 ml sterilt deioniseret vand til et 15 ml centrifugerør. 400 mg natriumhydroxid (NaOH) afvejes, og det tilsættes forsigtigt til tuben.
- NaOH opløses under langsom omrøring af opløsningen med en glasstang. Der fyldes op til 10 ml ved at tilsætte sterilt deioniseret vand til røret, og bland igen ved forsigtigt at vende røret op og ned. Luk hætten tæt, og opbevar opløsningen ved stuetemperatur.
- Forbered den friske opløsning hver måned, fordi koncentrationen af NaOH-opløsningen kan reduceres ved, at opløsningen absorberer kuldioxid i luften.
- Bland altid forsigtigt NaOH-opløsningen før brug.
FORSIGTIG: Forbered opløsningen inde i en kemisk hætte, og brug passende personlige værnemidler (PPE).
2. Fremstilling af 4% paraformaldehyd (PFA) opløsning
- Der tilsættes 30 ml 1x fosfatbufret saltvand (PBS) til et glasbægerglas. 4 g paraformaldehyd (PFA) afvejes, og det tilsættes bægerglasset.
- Bægerglasset opbevares på en varm plade ved 60 °C under omrøring. Tilsæt 1 N NaOH-opløsningen dråbevis for at hæve pH-værdien, indtil opløsningen er klar.
- Kontroller og juster pH til 7,4 ved hjælp af 1 N saltsyre (HCI). Juster den endelige lydstyrke til 50 ml med 1x PBS.
- Afkøl og filtrer opløsningen. Opløsningen opbevares ved 4 °C.
FORSIGTIG: Forbered opløsningen i en stinkhætte, mens du bærer passende PPE.
3. Tilberedning af ketamin/xylazin-cocktail
- Forbered ketamin/xylazin-cocktailen ved at tilsætte 0,8 ml ketamin (stamkoncentration: 100 mg/ml) og 0,16 ml xylazin (stamkoncentration: 100 mg/ml) til 9,4 ml saltvand.
- Opbevar cocktailen i sterile injektionsflasker ved stuetemperatur (RT).
4. Alkaliforbrænding på musehornhinden
- Injicer meloxicam (4-6 mg/kg legemsvægt) subkutant 30 minutter før proceduren for smertelindring. Bedøv musene (C57BL/6J, 6-8 uger, han) ved hjælp af en IP-injektion af ketamin/xylazin-cocktailen (Ketamin 80 mg/kg og Xylazin 16 mg/kg legemsvægt).
- Kontroller refleksresponsen (pedaludtagning) ved at klemme musens tæer, og bekræft fraværet af refleksen. Påfør en dråbe topisk bedøvelse, 0,5% proparacain, på hornhindeoverfladen af det ene øje og en dråbe kunstige tårer på det andet øje.
- Brug en 2 mm biopsistans til at slå Whatman-filterpapirskiver ud.
- Tilsæt 2 μL 1N NaOH til en ren petriskål. Sæt 2 mm filterpapirskiven på 1 N NaOH-dråben, og lad den trække i 15 sekunder.
- Tag filterpapiret op med pincet, og påfør filterpapiret på det proparacainbehandlede øje i midten af hornhinden i 30 sekunder.
BEMÆRK: Filterpapiret må kun berøre midten af hornhinden, og man skal sørge for at undgå, at filterpapiret bevæger sig, når det er placeret, da bevægelse af filterpapiret kan forårsage forbrændinger i det tilstødende væv. - Øjet vaskes ved at skylle med 20 ml steril saltopløsning i en steril sprøjte.
BEMÆRK: Der skal udvises omhu for at sikre, at hornhinden sammen med konjunktivalsækken vaskes grundigt for at sikre, at hornhinden eller det omgivende væv ikke beskadiges yderligere. Vask af konjunktivalsækken forhindrer yderligere symblefaron. - Tør forsigtigt overskydende saltvand af øjnene og det omkringliggende område ved hjælp af bløde engangsservietter. Derefter skal du holde musene i et genopretningsbur på en varm varmepude, indtil de er ambulante.
BEMÆRK: Mus overvåges dagligt efter alkaliforbrændingen i 3 dage. Hvis der observeres symptomer på smerte eller stress, administreres meloxicam (4-6 mg/kg legemsvægt) subkutant.
5. Undersøgelse og vurdering af neovaskularisering og uigennemsigtighed
- I bedøvede mus skal du undersøge øjnene under et dissektionsmikroskop på dag 10 efter forbrændingen og få billeder ved hjælp af et kamera, der er fastgjort til dissektionsomfanget for at score opacitet og neovaskularisering.
BEMÆRK: Et regelmæssigt dissektionsomfang med et kamera monteret er tilstrækkeligt. - Mens du observerer hornhinden gennem dissektionsmikroskopet, skal du score opaciteten efter forbrændingen baseret på følgende skala12:
0 = Ingen uigennemsigtighed; klar hornhinde
1 = Mild opacitet; let uklarhed i iris- og elevområderne Iris og elev let synlig
2 = Moderat opacitet; Iris og elev næppe synlig
3 = Alvorlig uigennemsigtighed; Iris eller elev ikke synlig
4 = uigennemsigtig hornhinde; Iris og elev ikke synlig - Mens du observerer hornhinden gennem dissektionsmikroskopet, skal du score CoNV baseret på følgende skala12:
0 = Ingen neovaskularisering; Ingen nye skibe fra Limbus
1 = Mild neovaskularisering; Nye fartøjer fra Limbus
2 = Moderat neovaskularisering; blodkar stammer fra limbus og vokser mod midten af hornhinden
3 = Alvorlig neovaskularisering; blodkar, der stammer fra limbus og når og / eller krydser midten af hornhinden - Brug en studerendes t-test til statistisk at sammenligne opaciteten og neovaskulariseringsscorerne mellem alkaliforbrændingen og sunde øjengrupper.
- Aflive musene på dag 10 ved isofluraneksponering 5% indtil 1 minut efter vejrtrækningsstop, efterfulgt af cervikal dislokation, og opsaml hornhinderne til fladmonteret billeddannelse.
6. Optisk kohærenstomografi (OCT) billeddannelse
- Tag OCT-billeder af det forreste segment af øjnene i bedøvede mus på dag 10 efter forbrændingen. Udfør OCT-billedoptagelse som en volumenscanning ved hjælp af IR + OCT-tilstand med et 30 ° synsfelt og 100% IR-intensitet.
- Kvantificer tykkelsen af hornhinderne ved hjælp af ImageJ-software.
- For at måle tykkelsen skal du bruge værktøjet Linjemarkering i ImageJ-softwaren til at oprette en lige linje mellem den forreste og bageste overflade ved den centrale hornhinde.
- Klik på Analyser > mål i softwareværktøjerne for at overføre værdierne til datavinduet.
- Kopier værdierne til en regnearksfil, og sammenlign hornhindetykkelsen mellem alkaliforbrændingen og sunde øjengrupper statistisk ved hjælp af en elevs t-test.
BEMÆRK: Hornhindens tykkelse er afstanden fra et punkt på den forreste hornhindeoverflade til det nærmeste punkt på den bageste hornhindeoverflade i hornhindens centrum.
7. Immunfarvning til CoNV på fladmonterede hornhinder
- Aflive musene på dag 10 efter alkaliforbrænding, og enukleere øjnene ved stump dissektion.
- Træk øjenlågene fra hinanden ved hjælp af tommel- og pegefingrene, og placer tang under øjenkloden. Luk tangen, og træk forsigtigt øjeæblet væk fra kredsløbet.
- Placer øjenkuglerne i 1x PBS. For hvert øjeæble fjernes hornhinden fra øjenkloden ved først at lave et snit ved hjælp af en 30 G nål under limbusområdet.
- Skær rundt om limbusområdet ved hjælp af hornhindemikrosaks med snittet som udgangspunkt, og adskil langsomt hornhinden og limbussen fra kloden.
- Rens hornhinderne forsigtigt med en fin pensel for at fjerne iris. Fastgør hornhinderne i 4% paraformaldehyd i 1 time.
- Vask hornhinderne tre gange i 20 minutter hver i 1x PBS ved stuetemperatur (RT).
- Inkuberes i en blokerende buffer (1x PBS suppleret med 0,1 % Triton-X 100 og 5 % bovint serumalbumin [BSA]) i 1 time ved RT.
- Overfør hornhinderne til en antistofopløsning indeholdende primære antistoffer. Forbered antistofopløsningen i 1x PBS suppleret med 1% BSA, 0,1% Triton-X 100, Dylight550-konjugeret anti-CD31 mAb (1:100) og Alexa Fluor488-konjugeret anti-LYVE-1 mAb (1:100).
- Der inkuberes i 3 dage ved 4 °C. Vask hornhinderne i 1x PBS tre gange i 20 minutter hver.
- Plet kernerne med Hoechst-pletopløsning (1:1.000) i 5 minutter i mørke.
- Flad hornhinderne med radiale snit, og monter dem på et forrenset glasglas ved hjælp af monteringsmedium og dæksedler. Forsegl dæksedlerne med klar neglelak, og tør diasene natten over i mørke før analyse ved konfokal mikroskopi.
- Billede af de fladmonterede hornhinder ved hjælp af konfokal mikroskopi ved at sy individuelle Z-stack-billeder; Brug en 10x objektiv, 488 nm og 561 nm lasere og en opløsning på 512 pixels x 512 pixels pr. skive på ikke-resonante galvanoscannere.
- Kvantificer tætheden af CD31+ blod og LYVE-1+ lymfekar ved hjælp af ImageJ-software.
- For at bestemme vaskulærtætheden skal du konvertere de konfokale billeder til et 8-bit billede.
- Vælg vaskulær tæthed fra plugins.
- Vælg det interessante område på billedet, og klik på OK. Målingerne åbnes i et nyt datavindue.
- Kopier værdierne til en regnearksfil, og sammenlign statistisk den vaskulære tæthed mellem alkaliforbrændingen og sunde øjengrupper ved hjælp af en elevs t-test.
BEMÆRK: CD31, også kaldet blodpladeendotelcelleadhæsionsmolekyle-1 (PECAM-1), er et celleadhæsionsmolekyle involveret i angiogenese og udtrykkes stærkt i endotelcellerne i tidlige og modne blodkar13. LYVE-1 (lymfekarendotelhyaluronanreceptor-1) er en celleoverflademarkør på lymfatiske endotelceller og kan bruges som lymfangiogenesemarkør14.
Representative Results
Denne undersøgelse beskriver en metode til at inducere hornhindeangiogenese i museøjet ved alkaliforbrænding. Billederne opnået med dissektionsmikroskopet (figur 1A, B) viste signifikant forhøjede neovaskulariserings- og opacitetsscorer i hornhinderne i alkaliforbrændingsgruppen (P < 0,05; Figur 1C,D). De hornhinder, der blev indsamlet på dag 10, blev yderligere immunfarvet med henholdsvis anti-CD31 mAb til blodkar og anti-LYVE-1 mAb til lymfekar (figur 2A-I). Alkaliforbrændingsgruppen viste signifikant højere tætheder af blod og lymfekar efter 10 dage (henholdsvis P < 0,001 og P < 0,05; Figur 2J,K). Hornhindens tykkelse, som afbildet og kvantificeret ved hjælp af OCT (figur 3A,B), blev observeret at være signifikant højere i gruppen med alkaliforbrænding (P < 0,01; Figur 3C).
Figur 1: Alkali burn-induceret hornhinde neovaskularisering og opacitet. (A,B) Hornhindeneovaskularisering spirede fra limbuskarrene mod hornhindecentret i (B) alkalibrændt museøje (A), men ikke sundt øje 10 dage efter skaden. (C,D) Kvantificering af (C) hornhindeneovaskularisering og (D) opacitet i panelerne A og B (± SEM; t-test; *P < 0,05; n = 3 øjne, 1 øje/mus). De røde pile repræsenterer limbussen, og den gule pil angiver de spirende nye kar. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Hornhinde neovaskularisering og lymfangiogenese forårsaget af alkaliforbrænding. Immunhistokemi afslørede (A, D, G) blod og (B, E, H) lymfekar ved hjælp af henholdsvis anti-CD31 og anti-LYVE-1 mAbs. (A-C) Den sunde musehornhinde. (D-I) Den alkalibrændte hornhinde 10 dage efter skaden. (C,F,I) Overlejrede billeder af CD31- og LYVE-1-signaler. (G-I) Zoomede billeder til panelerne D-F. Skalastænger = (A-F) 200 μm og (G-I) 500 μm. (J,K) Kvantificering af blodets og lymfekarets massefylde i panelerne A-F, som angivet (± SEM; t-test; *P < 0,05; ***P < 0,001; n = 3 øjne, 1 øje/mus). Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Forøgelse af hornhindetykkelsen forårsaget af alkaliforbrænding . (A) Et OCT-billede af et sundt museøje. (B) Et OCT-billede af musehornhinden 10 dage efter alkaliforbrænding. (C) Kvantificering af hornhindetykkelsen i panelerne A og B, målt i midten af hornhinden (± SEM; t-test; **P < 0,01; n = 3 øjne, 1 øje/mus). Klik her for at se en større version af denne figur.
Discussion
Hornhinden er et fremragende væv til at studere angiogenese og betændelse, fordi det er tilgængeligt og avascular, hvilket betyder, at neovaskularisering nemt kan detekteres og dokumenteres. Hornhindeforbrænding hos kaniner, rotter og mus er blevet brugt til at studere hornhindeangiogenese, inflammation og opacitet, sårdannelse, perforering af hornhinden og fibrose15,16,17. Desuden er musemodellen for hornhindeforbrænding værdifuld til at teste forskellige terapeutiske strategier for angiogenese og betændelse, fordi mus har et immunsystem, der er tæt beslægtet med menneskers18. Tilgængeligheden af teknikker til genetisk manipulation af musegenomet gør også arten til et fremragende valg til denne type undersøgelse19. Udfordringen i denne forskning har været at udvikle en metode til hornhindeforbrænding, der giver konsistent, reproducerbar patofysiologi.
Alkaliforbrændingsmodellen er især nyttig til farmakologisk screening af lægemidler, der modulerer angiogenese, inflammation og fibrose. De minimale krav til reagenser og ressourcer, enkelheden ved at udføre alkaliforbrændingen og fordelene ved protokollens korte varighed og den direkte observation af resultaterne gør alkaliforbrænding på musehornhinden til et primært valg til farmakologisk lægemiddelscreening. Der bør dog tages nogle få forholdsregler, når denne procedure udføres, for at sikre konsistens og reproducerbarhed. For det første skal filterpapiret placeres i midten af hornhinden for at undgå at brænde andre områder af øjet, især limbus, øjenlåg og bindehinde; For det andet bør volumen og koncentration af NaOH være passende for at opnå konsistente resultater fra alkaliforbrændingen på hornhinden. Filteret må ikke dryppe vådt, men skal have været gennemblødt i NaOH-opløsningen. Filterstørrelsen og filtertypen samt normaliteten og volumenet af den opløsning, der anvendes i denne metode, er optimeret for at undgå overløb af NaOH. Brug af et filterpapir af anden størrelse eller et højere eller lavere volumen NaOH ville forårsage uoverensstemmelser i neovaskulariseringen. For det tredje er det vigtigt at forhindre, at NaOH-opløsningen absorberer CO2 i rumluften ved straks at stramme opløsningens rørhætte efter brug og reducere luft/opløsningsforholdet. Der skal udvises forsigtighed med at anvende friske alkaliopløsninger for at forhindre uoverensstemmelser i neovaskulariseringen og for at undgå hornhindesår. Endelig er omfattende vask af al NaOH-opløsningen fra øjet og bindehinden med saltvand nødvendig for at forhindre yderligere skade på hornhinden og omgivende væv i øjet. Den grundige vask af hornhinden og de tilstødende væv forhindrer også symblefaron.
Protokollen beskrevet her er en effektiv og pålidelig metode til at studere patofysiologien af hornhindangiogenese. Denne protokol kan yderligere bruges til at studere hornhindebetændelse, fibrose og sårheling.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af SRB Charitable Corporation, National Institutes of Health (NIH) P30EY002520 og et ubegrænset institutionelt tilskud fra Research to Prevent Blindness (RPB) til Department of Ophthalmology, Baylor College of Medicine. W.L. er støttet af The Knights Templar Eye Foundation Endowment in Ophthalmology.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% Sodium Chloride Injection | Hospira | KL-7302 | |
| 30 G Needle | McKesson | 16-N3005 | |
| A1R Confocal | Nikon Instruments | ||
| Anti-CD31 | Novus Biologicals | NB100-1642R | |
| Anti-LYVE-1 | Life technologies | 53-0443-82 | |
| ASM Module | Heidelberg Engineering | Anterior segment objective | |
| Biopsy Punch | McKesson | 16-1309 | |
| BSA | Thermoscientific | 9048-46-8 | |
| Coverslip | VWR International | 22X22-1-601640G | |
| Dissection Microscope | AmScope | SM-4TZ-30WY-10M3 | |
| Fluoromount-G | Electron Microscopy Sciences | 17984-25 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 15000-02 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11049-10 | |
| Forceps | Fisherbrand | 12-000-157 | |
| Forceps | Roboz | RS-4905 | |
| Gonak Hypromellose | Akorn | 17478006412 | |
| GraphPad Prism 9 | GraphPad Sotware, Inc | ||
| Heating pad | K&H Pet Products | 100213018 | |
| Hoescht | Life Technologies | 62249 | |
| HRA + OCT Spectralis | Heidelberg Engineering | ||
| Insulin Syringe | Mckesson | 102-SN310C31516P | |
| Kimwipe | Kimberly Clark Professional | 34155 | |
| Micro Cover Glass | VWR | 48366-067 | |
| Microscissors | Roboz | RS-5110 | |
| Microscopic Slide | Fisherbrand | 12-550-15 | |
| NaOH | Sigma Aldrich | 55881-500G | |
| Neomycin and Polymyxin B Sulfates and Dexamethasone | Bausch & Lomb | 24208-0795-35 | |
| Normal Serum | Jackson Immuno | 008-000-121 | |
| Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 158127-500G | |
| PBS | Gibco | 20012-027 | |
| Proparacaine HCl | Bausch & Lomb | 24208073006 | |
| Saline | Henry Schein | 1531042 | |
| SMZ125 | Nikon Instruments | ||
| Syringe 10 mL | McKesson | 16-S10C | |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | TX1568-1 | |
| Whatmann Filter Paper | Cytiva | WHA1003323 |
References
- Ellenberg, D., et al. Novel aspects of corneal angiogenic and lymphangiogenic privilege. Progress in Retinal and Eye Research. 29 (3), 208-248 (2010).
- Azar, D. T. Corneal angiogenic privilege: Angiogenic and antiangiogenic factors in corneal avascularity, vasculogenesis, and wound healing (an American Ophthalmological Society thesis). Transactions of the American Ophthalmological Society. 104, 264-302 (2006).
- Rolfsen, M. L., et al. Corneal neovascularization: A review of the molecular biology and current therapies. Expert Review of Ophthalmology. 8 (2), 167-189 (2013).
- Skobe, M., Dana, R.
- Lee, P., Wang, C. C., Adamis, A. P. Ocular neovascularization: An epidemiologic review. Survey of Ophthalmology. 43 (3), 245-269 (1998).
- Su, W., et al. Efficacious, safe, and stable inhibition of corneal neovascularization by AAV-vectored anti-VEGF therapeutics. Molecular Therapy - Methods & Clinical Development. 22, 107-121 (2021).
- Lasagni Vitar, R. M., et al. Epidemiology of corneal neovascularization and its impact on visual acuity and sensitivity: A 14-year retrospective study. Frontiers in Medicine. 8, 733538 (2021).
- Said, D. G., Dua, H. S. Chemical burns acid or alkali, what's the difference. Eye. 34, 1299-1300 (2020).
- Muthukkaruppan, V. R., Auerbach, R.
- Kenyon, B. M., et al. A model of angiogenesis in the mouse cornea. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 37 (8), 1625-1632 (1996).
- Cursiefen, C., Maruyama, K., Jackson, D. G., Streilein, J. W., Kruse, F. E. Time course of angiogenesis and lymphangiogenesis after brief corneal inflammation. Cornea. 25 (4), 443-447 (2006).
- Yoeruek, E., et al. penetration and efficacy of topically applied bevacizumab: Evaluation of eyedrops in corneal neovascularization after chemical burn. Acta Ophthalmologica. 86 (3), 322-328 (2008).
- DeLisser, H. M., et al.
- Johnson, L. A., Prevo, R., Clasper, S., Jackson, D. G. Inflammation-induced uptake and degradation of the lymphatic endothelial hyaluronan receptor LYVE-1. The Journal of Biological Chemistry. 282 (46), 33671-33680 (2007).
- Choi, H., et al. Comprehensive modeling of corneal alkali injury in the rat eye. Current Eye Research. 42 (10), 1348-1357 (2017).
- Chung, J. H., Fagerholm, P., Lindström, B. The behaviour of corneal epithelium following a standardized alkali wound. Acta Ophthalmologica. 65 (5), 529-537 (1987).
- Chang, J. H., Gabison, E. E., Kato, T., Azar, D. T.
- Alves da Costa, T., Lang, J., Torres, R. M., Pelanda, R. The development of human immune system mice and their use to study tolerance and autoimmunity. Journal of Translational Autoimmunity. 2, 100021 (2019).
- vander Weyden, L., White, J. K., Adams, D. J., Logan, D. W. The mouse genetics toolkit: Revealing function and mechanism. Genome Biology. 12 (6), 224 (2011).
