ここでは、肝臓の構造を乱すことなく、肝外因子がない場合に、肝代謝の急性および直接的な調節を研究するためのマウス肝臓の in situ 灌流のための堅牢な方法を提示します。
Abstract
肝臓には、栄養代謝など多くの機能があります。肝臓研究の他の in vitro および in vivo モデルとは対照的に、単離された灌流肝臓は、肝外因子の影響から分離された、無傷の肝構造を持つ肝臓全体の肝臓生物学および代謝の研究を可能にします。肝灌流法はもともとラット用に開発されましたが、この方法はマウスにも適応されています。ここでは、マウス肝臓の in situ 灌流のプロトコルについて説明します。肝臓は、酸素化されたKrebs-Henseleit重炭酸緩衝液で門脈から順行性に灌流され、出力は肝下下大静脈から収集され、肝下下大静脈をクランプして回路を閉じます。この方法を使用すると、試験化合物の直接的な肝臓への影響を詳細な時間分解能で評価できます。肝機能と生存率は少なくとも3時間安定しており、同じ実験に内部コントロールを含めることができます。このモデルを用いた実験の可能性は数多くあり、肝生理学や肝疾患に関する洞察を推測できる可能性があります。
単離された灌流マウス肝臓は、肝代謝の動態と分子メカニズムを研究するための強力な研究ツールです。分単位のサンプル収集が可能であるため、試験化合物が肝臓に及ぼす直接的な影響を詳細に評価できます。 in vivo研究と比較して、灌流肝臓は、血液によって運ばれる肝外因子を回避し、実験条件を完全に制御しながら、肝臓代謝を単独で研究することを可能にします。単離され?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究とNicolai J. Wewer Albrechtsenは、ノボ ノルディスク財団のExcellence Emerging Investigator Grant – Endocrinology and Metabolism(申請番号.NNF19OC0055001)、European Foundation for the Study of Diabetes Future Leader Award(NNF21SA0072746)、Independent Research Fund Denmark、Sapere Aude(1052-00003B)を受賞しました。ノボ ノルディスク財団 Center for Protein Researchは、ノボ ノルディスク財団(助成金契約NNF14CC0001)の財政的支援を受けています。図 1B は biorender.com で作成されました。Dr. Rune E. Kuhre(Novo Nordisk A/S)には、灌流マウス肝臓に関する実りある議論をいただき、感謝いたします。
Winther-Sørensen, M., Kemp, I. M., Bisgaard, H. C., Holst, J. J., Wewer Albrechtsen, N. J. Hepatic Glucose Production, Ureagenesis, and Lipolysis Quantified using the Perfused Mouse Liver Model. J. Vis. Exp. (200), e65596, doi:10.3791/65596 (2023).