De FAE au Matrigel 2: Fractionnement des CSEh MEFs sur Matrigel
Summary
Cette vidéo montre comment maintenir la croissance de cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) dans le chargeur sans cellules conditions et la manière de CSEh passage en continu dans le chargeur sans cellules conditions. Confirmation de CSEh pluripotence grandi dans le chargeur sans cellules par microscopie d'immunofluorescence conditions est également démontrée.
Abstract
Cette vidéo montre comment faire pousser des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) sur fibroblastes de souris embryonnaires (MEF) cellules nourricières, comment CSEh passage de plaques MEF pour chargeur de pile plaques sans Matrigel.
Protocol
Discussion
Cette vidéo montre comment les CSEh passage de plaques MEF pour les plaques d'alimentation Matrigel sans cellule. Notez que la densité des colonies sur Matrigel est plus élevée que la densité des colonies par fractionnement d'habitude sur le FAE. Immunofluorescence et cytométrie de flux pour microscopie ou marqueurs de pluripotence des CSEh, tels que Oct-4, SSEA-4, sont nécessaires pour confirmer l'entretien des CSEh dans un état indifférencié dans les conditions de culture nourricier libre.
Acknowledgements
Embryonnaires humaines études de cellules souches dans le laboratoire Teitell sont soutenus par un California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) Subvention de démarrage RS1-00313. Nous remercions les membres du grand centre de médecine régénérative et de recherche sur les cellules souches à l'UCLA, en particulier le Dr Clark Amander, le Dr Jerome Zack, et des membres de l'UCLA large souches Facilité Institut noyau cellulaire pour leur soutien de nos études.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Knockout Serum Replacer (KSR) | Reagent | Gibco | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reagent | Gibco | 11330-057 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reagent | Gibco | 35050-061 | |
| DMEM | Reagent | Gibco | 11995-065 | |
| FBS | Reagent | Clontech | 631107 | |
| L-glutamine | Reagent | Gibco | 25030-081 | |
| BME | Reagent | Fisher | BP176-100 | |
| bFGF | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Collagenase IV | Reagent | Gibco | 17104-019 | |
| Dispase | Reagent | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penicillin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Gelatin | Reagent | Chemicon | ES-006-B | |
| Matrigel | Reagent | BD Biosciences | 354277 | |
| Oct-4 antibody | Reagent | Santa Cruz Biotechnology | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 | Reagent | R&D Systems | FAB1435P | |
| FITCI-conjugated antirabbit IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. | 715-095-152 |
References
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