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जीवित कोशिकाओं में ubiquitin-एंटीबॉडी गतिविधि की निगरानी एक Degron (DGN) अस्थिर ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन रिपोर्टर (GFP) आधारित प्रोटीन का उपयोग
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
Monitoring of Ubiquitin-proteasome Activity in Living Cells Using a Degron (dgn)-destabilized Green Fluorescent Protein (GFP)-based Reporter Protein
DOI:

10:25 min

November 10, 2012

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Chapters

  • 00:00Title
  • 01:21Virus Production
  • 04:11Titering of Virus
  • 06:13Transduction of Human Diploid Fibroblasts
  • 07:19FACS Experiments
  • 08:50Proteasomal Activity in vivo
  • 10:04Conclusion

Summary

자동 번역

Ubiquitin-एंटीबॉडी जीवित कोशिकाओं में गतिविधि पर नजर रखने के लिए एक विधि का वर्णन है. एक degron अस्थिर GFP (GFP-DGN) और एक स्थिर GFP-dgnFS संलयन प्रोटीन उत्पन्न कर रहे हैं और एक lentiviral अभिव्यक्ति वेक्टर का उपयोग सेल में transduced. इस तकनीक के लिए एक स्थिर GFP-dgn/GFP-dgnFS व्यक्त सेल लाइन में जो ubiquitin-एंटीबॉडी गतिविधि epifluorescence या प्रवाह cytometry का उपयोग आसानी से किया जा मूल्यांकन कर सकते हैं उत्पन्न करने के लिए अनुमति देता है.

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