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Chapters
- 00:05Title
- 00:50Cloning of gRNAs into the CRISPER-concatemer Vector
- 03:40Assessing Success of Cloning by Restriction Digest
- 05:28Preparing Intestinal Organoids for Electroporation
- 08:08Electroporation
- 10:36Results: Successful Generation of CRISPER-concatemers and Electroporation of Intestinal Organoids
- 11:24Conlcusion
Dieses Protokoll beschreibt die Schritte zum Klonieren von mehreren einzelnen Leitungs-RNAs in einen Leitfaden-RNA-Concatemer-Vektor, der von besonderem Nutzen bei der Herstellung von Multi-Gen-Knockouts unter Verwendung der CRISPR / Cas9-Technologie ist. Die Erzeugung von Doppelknockouts in Darmorganoiden wird als mögliche Anwendung dieser Methode gezeigt.
