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Chapters
- 00:05Title
- 00:50Cloning of gRNAs into the CRISPER-concatemer Vector
- 03:40Assessing Success of Cloning by Restriction Digest
- 05:28Preparing Intestinal Organoids for Electroporation
- 08:08Electroporation
- 10:36Results: Successful Generation of CRISPER-concatemers and Electroporation of Intestinal Organoids
- 11:24Conlcusion
Questo protocollo descrive i passaggi per la clonazione di singoli RNA guidati singoli in un unico concetto di RNA concatenatore di guida, che è di particolare utilità nella creazione di knockouts multi-gene usando la tecnologia CRISPR / Cas9. La generazione di doppie bocce in organoidi intestinali viene mostrata come possibile applicazione di questo metodo.
