Разбор и запись с Junction C. Elegans нервно-мышечной
Summary
Применение электрофизиологии на доступное синапсов обеспечивает количественной мерой синаптической активности, полезной для анализа синаптических мутантов. В этой статье описывается метод вскрытия используется для предоставления нервно-мышечного соединения (NMJ) из<em> Caenorhabditis Элеганс (C. Элеганс)</em> И кратко рассматриваются некоторые из которых использует для этого препарата могут быть применены.
Abstract
Нейротрансмиссия это процесс, при котором нейроны передают информацию посредством химических сигналов для их пост-синаптических целей, на быстром масштабе времени. Это сложный процесс, требует скоординированной деятельности многих пред-и пост-синаптические белки для обеспечения надлежащего синаптические связи, проведение электрических сигналов, адресности и грунтовки секреторных везикул, кальция зондирования, слияние везикул, локализация и функции постсинаптических рецепторов и, наконец, утилизация механизмов. Как нейробиологи это наша цель, чтобы выяснить какие белки функционировать в каждом из этих этапов и понимать механизмы их действия. Электрофизиологические записи с синапсы обеспечивают количественные считываются из основных электрических событий, которые происходят во время синаптической передачи. Объединив эту технику с мощными массив молекулярных и генетических инструментов, доступных для манипулирования синаптических белков в C. Элеганс, мы можем проанализировать в результате функциональных изменений в синаптической передачи.
C. Элеганс NMJs образуется между моторных нейронов и стенкой тела мышцы контроль передвижения, таким образом, мутанты с несогласованными двигательного фенотипы (известных как UNC-ы) часто возмущают синаптической передачи на этих синапсов 1. С UNC-мутантов ведутся на богатый запас бактериальных источник пищи, они остаются жизнеспособными, если они сохраняют некоторые глотки насосных способность глотать пищу. Это, вместе с тем, что С. Элеганс существовать как гермафродиты, позволяет им перейти на мутантных потомков без необходимости разработки поведение спаривания. Эти признаки в сочетании с нашей недавней возможностью записи от червей NMJs 2,3,7 сделать это отличная модель организма, в котором для решения, как именно UNC-мутантов воздействием нервных импульсов.
Рассечение метод включает иммобилизации взрослых червей использующих cyanoacrylic клеем, чтобы сделать разрез на червя кутикулы подвергая NMJs. С С. Элеганс взрослых только 1 мм в длину вскрытие производится с использованием микроскопа и рассекает требует отличную координацию рук и глаз. NMJ записи сделаны цельноклеточная напряжения зажима отдельных стенки тела мышечные клетки и нейромедиатор релиз может быть вызвано использованием различных протоколов, включая стимуляцию электрической стимуляции, светло-активированного канала родопсин-опосредованной деполяризации 4 и гиперосмотического солевой раствор, все из которых будут Кратко описаны.
Protocol
Discussion
Генетическая модель организма C, Элеганс идеально подходит для изучения синаптической передачи, через функциональный анализ мутаций в генах, кодирующих синаптических белков. Здесь мы описали рассечение техника, которая делает C. Элеганс NMJs доступными для электрофизиологиче?…
Acknowledgements
Эта статья была профинансирована за счет грантов NIH, чтобы JER. Я хотел бы поблагодарить д-ра Алекса Готтшальк за предоставление трансгенных червей выражения канал родопсина в холинергических нейронов двигателя использован в одной из записи демонстраций.
References
- Brenner, S. . Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).
- Richmond, J. E., Davis, W. S., Jorgensen, E. M. . Nat Neurosci. 2 (11), 959-959 (1999).
- Richmond, J. E. . WormBook. 1, (2006).
- Liewald, J. F., Brauner, M., Stephens, G. J. . Nature methods. 5 (10), 895-895 (2008).
- Lockery, S. R., Goodman, M. B. . Methods in enzymology. 293, 201-201 (1998).
- Brockie, P. J., Mellem, J. E., Hills, T. . Neuron. 31 (4), 617-617 (2001).
- Richmond, J. E., Jorgensen, E. M. . Nat Neurosci. 2 (9), 791-791 (1999).
