وفحص MTT هو مقايسة سهلة وقابلة للتكرار اللونية لتقييم جدوى الخلية على أساس الحد من MTT الصفراء وانتاج المياه formazan الأرجواني المستعصية. هنا ، وقد تم تقييم جدوى خلايا MCF – 7 على علاج nanogenomedicine.
Abstract
قد السمسة من nanogenomedicine مستقبلية (قصيرة مثل الحمض النووي الريبي التدخل والعقاقير) تعيق تطوره السريري. من هذه ، قد الطب الجيني على أساس و / أو حاملة انتزاع السمية الخلوية. لتقييم هذه السمسة ، منهجية مشتركة تعتمد إلى حد كبير على الاستفادة من 3 — (4 ، 5 – 2 – ثنائي ميثيل thiazolyl) -2 ، 5 ثنائي الفينيل – 2H – tetrazolium بروميد (MTT) مقايسة التي استخدمت على نطاق واسع نهج اللونية القائمة على نشاط الإنزيمات نازعة الميتوكوندريا في الخلايا. في هذا التحقيق الحالية ، تم تلقيح خلايا MCF – 7 – 96 في طبق بشكل جيد وبنسبة 50 ٪ confluency انهم عوملوا مع nanopolyplexes مختلفة ويتعرضون للفحص MTT بعد 24 ساعة. يتم استقلاب الماء MTT الصفراء للذوبان من قبل خلايا نشطة في عملية التمثيل الغذائي formazan المياه الأرجواني غير قابلة للذوبان ، والتي حلت في زيادة درجة الحموضة عازلة dimethylsulfoxide وSornson ق 10.5. ويمكن قياس هذا المنتج الناتجة من القياس الطيفي باستخدام قارئ لوحة في 570 نانومتر.
Protocol
MCF – 7 البذر في لوحة – 96 أيضا : وكان المثقف MCF – 7 خلايا في 25 ر القارورة في المتوسط تحتوي متوسطة Dulbecco في التعديل النسر (DMEM) ، و 10 ٪ FBS ، 100 البنسلين يو / لتر ، و 100 الستربتوميسين ميكروغرام / لتر عند 37 درجة مئوية مع نسبة 5 ٪ CO 2 ، 95 ٪ الهوا…
Discussion
يعتبر فحص MTT أن يكون الأسلوب تنوعا ، وبالتالي يمكن تقييم الجدوى من الخلايا على العلاجات المختلفة. إنتاج formazan الناتجة يبدو متناسبا مع مستوى الأيض الطاقة في الخلايا. ولذلك ، فمن الممكن لقياس خلايا تنشيط عملية الأيض حتى في حالة عدم وجود تكاثر الخلايا. كمية إنتاج formazan يتن…
Acknowledgements
فإن الكتاب أن نعترف تقنية الخلايا الجذعية وشركات غازي شهيد تبريز على التوالي لتوفير المياه الفينول DMEM دون الحمراء ومعقم للحقن كهدايا.
Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay. J. Vis. Exp. (26), e1191, doi:10.3791/1191 (2009).