Cellulaire toxiciteit van Nanogenomedicine in MCF-7 cellijn: MTT-test

Summary

De MTT assay is een eenvoudige en reproduceerbare colorimetrische assay voor de evaluatie van de levensvatbaarheid van de cel op basis van vermindering van de geel MTT en de productie van water oplosbare paarse formazan. Hier heeft de levensvatbaarheid van MCF-7 cellen na behandeling van nanogenomedicine geëvalueerd.

Abstract

Cytotoxiciteit van de futuristische nanogenomedicine (bijvoorbeeld short interfering RNA en antisense) kunnen belemmeren haar klinische ontwikkeling. Van deze kunnen de gen-gebaseerde geneeskunde en / of de drager ervan te lokken cellulaire toxiciteit. Voor de beoordeling van deze cytotoxiciteit, een gemeenschappelijke methodologie is grotendeels afhankelijk van gebruik van de 3 – (4, 5-dimethyl-2-thiazolyl) -2, 5-difenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) test die veelvuldig gebruikt als een colorimetrische aanpak, gebaseerd op de activiteit van de mitochondriale dehydrogenase enzymen in de cellen. In dit huidige onderzoek werden MCF-7 cellen geïnoculeerd in 96-wells plaat en op 50% confluentie ze werden behandeld met verschillende nanopolyplexes en onderworpen aan test na 24 uur MTT. Water oplosbaar geel MTT wordt gemetaboliseerd door het metabool actieve cellen aan het water onoplosbare paarse formazan, die verder wordt opgelost in buffer dimethylsulfoxide en Sornson s pH 10,5. Het resulterende product kan worden gekwantificeerd door spectrofotometrie met behulp van een plaat reader bij 570 nm.

Protocol

MCF-7 zaaien in 96-well plaat: MCF-7 cellen werden gekweekt in 25 t-kolf in medium dat Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), 10% FBS, 100 U / ml penicilline en 100 ug / ml streptomycine bij 37 ° C met 5% CO 2, 95% lucht en compleet vochtigheid. Eenmaal bereikt, ~ 90% confluentie, werden ze losgemaakt met behulp van 0,05% trypsine / EDTA en geteld door middel van trypan blauw en hemocytometer. Deze cellen werden vervolgens geresuspendeerd bij een concentratie van 4 × 1…

Discussion

De MTT test wordt beschouwd als een veelzijdige methode te zijn en derhalve de levensvatbaarheid van de cellen kunnen worden geëvalueerd op verschillende behandelingen. De productie van de resulterende formazan lijkt te zijn in verhouding tot het niveau van de energiestofwisseling in de cellen. Daarom is het mogelijk om het metabolisch geactiveerde cellen te meten, zelfs in de afwezigheid van celproliferatie. De hoeveelheid formazan geproduceerd is evenredig met de hoeveelheid van MTT in de incubatie-medium. Terwijl de…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
25 t-flask		Orange Scientific	5510100
PBS		Sigma-Aldrich	P3813
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose		Sigma-Aldrich	D5671
MTT		Sigma-Aldrich	M2128
FBS		Sigma-Aldrich	F2442
Penicillin 200,000 u/ml		CinnaGen	CR7913
Streptomycin 200 mg/ml		CinnaGen	CR7912
trypsin/EDTA		Sigma-Aldrich	T3924
trypan blue		Sigma-Aldrich	T8154
Superfect		Qiagen	301105
Polyfect		Qiagen	301305
EGFR antisense		MWG biotech
Scrambled antisense		MWG biotech
DMEM without phenol red		Gibco	11880
Glycine		Sigma	G8898
hemocytometer		HBG
8-channel pipette		TreffLab Transferpette	96.9918.10.1
Disposable syringe filter		IWAKI	2052-025
Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters		Biotek ELx808	ELX808
96-well plate with lid (flat bottom)		IWAKI	3860-096
Laminar flow hood		Esco class II Biosafety Cabinet
CO2 Incubator		ASTEC