Zelluläre Toxizität von Nanogenomedicine in MCF-7 Zelllinie: MTT-Assay
Summary
Der MTT-Test ist eine einfache und reproduzierbare Farbtestverfahren zur Beurteilung der Lebensfähigkeit der Zellen basiert auf Reduktion der gelben MTT und Produktion von wasserunlöslichen Formazan lila. Hier hat sich die Rentabilität der MCF-7 Zellen nach Behandlung von nanogenomedicine ausgewertet worden.
Abstract
Zytotoxizität der futuristischen nanogenomedicine (zB short interfering RNA und antisense) behindern können ihre klinischen Entwicklung. Von diesen kann das Gen-basierten Medizin und / oder seinem Träger zu entlocken Zelltoxizität. Für die Beurteilung eines solchen Zytotoxizität, ist eine gemeinsame Methodik weitgehend abhängig von Nutzung der 3 – (4, 5-Dimethyl-2-Thiazolyl) -2, 5-diphenyl-2H-Tetrazolium Bromid (MTT) bestimmt, der weithin als genutzt eine kolorimetrische Ansatz bezogen auf die Aktivität der mitochondrialen Dehydrogenase-Enzyme in den Zellen. In dieser Untersuchung wurden MCF-7-Zellen in 96-Well-Platte angeimpft und bei 50% Konfluenz wurden sie mit verschiedenen nanopolyplexes behandelt und dem Test nach 24 Stunden MTT. Wasserlösliche gelben MTT wird durch die metabolisch aktive Zellen, die in Wasser unlöslichen violetten Formazan, die weiter in Dimethylsulfoxid und Sornson s-Puffer pH 10,5 gelöst metabolisiert. Das resultierende Produkt kann durch Spektrophotometrie mit einem Platten-Lesegerät bei 570 nm quantifiziert werden.
Protocol
Discussion
Der MTT-Test gilt als eine vielseitige Methode werden und dementsprechend die Lebensfähigkeit der Zellen könnte auf verschiedene Behandlungen ausgewertet werden. Die Produktion von resultierende Formazan zu sein scheint proportional zum Füllstand des Energiestoffwechsels in den Zellen. Daher ist es möglich, die metabolisch aktivierten Zellen auch in Abwesenheit der Zellproliferation zu messen. Die Höhe der Formazan ist proportional zur Höhe des MTT in das Inkubationsmedium. Während produzierte die Konzentration v…
Acknowledgements
Die Autoren bedanken sich bei Stem Cell Technology und Shahid Ghazi Tabriz Unternehmen bzw. anerkennen, für die Bereitstellung von DMEM ohne Phenolrot und steriles Wasser zur Injektion als Geschenk.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25 t-flask | Orange Scientific | 5510100 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | Sigma-Aldrich | D5671 | ||
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | ||
| FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | ||
| Penicillin 200,000 u/ml | CinnaGen | CR7913 | ||
| Streptomycin 200 mg/ml | CinnaGen | CR7912 | ||
| trypsin/EDTA | Sigma-Aldrich | T3924 | ||
| trypan blue | Sigma-Aldrich | T8154 | ||
| Superfect | Qiagen | 301105 | ||
| Polyfect | Qiagen | 301305 | ||
| EGFR antisense | MWG biotech | |||
| Scrambled antisense | MWG biotech | |||
| DMEM without phenol red | Gibco | 11880 | ||
| Glycine | Sigma | G8898 | ||
| hemocytometer | HBG | |||
| 8-channel pipette | TreffLab Transferpette | 96.9918.10.1 | ||
| Disposable syringe filter | IWAKI | 2052-025 | ||
| Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters | Biotek ELx808 | ELX808 | ||
| 96-well plate with lid (flat bottom) | IWAKI | 3860-096 | ||
| Laminar flow hood | Esco class II Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | ASTEC |
Referências
- Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Pesquisa do Câncer. 49, 4435-4435 (1989).
- Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).
- Yang, M. Energy and Redox States in the C6 Glioma Cells Following Acute Exposure to Zn, Se +4 , and Se +6 and the Correlation with Apoptosis. Toxicology Mechanisms and Methods. 16 (1), 13-13 (2006).
- Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. . MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. , 175-177 (2000).
