Isoler des cellules souches à partir des tissus mous musculo-squelettiques
Summary
Isoler des cellules souches adultes provenant de tissus mous musculosquelettiques basé sur la vitesse adhésion de la cellule dans le ballon.
Abstract
Les cellules souches adultes ont été longuement débattues en ce qui concerne leur application dans la médecine régénérative. Les cellules souches adultes ont suscité un grand enthousiasme pour le traitement des tissus blessés et malades à cause de leurs capacités impressionnantes de subir la différenciation des cellules de lignées multiples et leur capacité d'auto-renouvellement. Plus important encore, ces qualités ont fait de leur avantage pour une utilisation dans les thérapies transplantation de cellules autologues. Le protocole actuel va introduire le lecteur à la technique preplate modifiés lorsque les tissus mous de l'appareil locomoteur, des tendons et des muscles, par exemple, sont une<sup> Er</sup> Enzymatiquement dissocié puis placés dans des flacons de collagène recouvert d'moyennes. Le surnageant, qui est composé du milieu et les cellules restantes flottante, est en série transmises quotidiennement au nouveaux flacons. Les cellules souches sont les plus lents à se conformer aux flacons qui prend habituellement 5-7 jours (transferts serial ou preplates). En utilisant cette technique, les cellules souches adultes présentes dans ces tissus peuvent être facilement exploitées par le biais assez procédures non invasives.
Protocol
Discussion
Il a été reconnu que certains tissus adultes contiennent des cellules souches multiples. Au cours des dernières années d'étude, les cellules souches ont été détectées dans les tissus mous musculo-squelettiques, y compris les muscles squelettiques et du tendon. Ce protocole actuel de détails d'une procédure, connue comme la technique preplate modifié, qui a été utilisé avec succès dans notre laboratoire afin d'isoler les cellules souches adultes à partir des tendons et des muscles squelettiqu…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs sont très reconnaissants de Mme Haiying Pan et M. Ian Bellayr pour leur aide technique sur l'isolement cellulaire pour les films en cours et M. Kyle Holden et M. Jonathan Lucas pour leur aide sur le montage de diapositives. Un grand merci à la liste de personnes suivantes qui ont été impliqués dans le développement des techniques preplate modifié au cours des dernières années: les Drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, KIMIMASA Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. Nous sommes reconnaissants de l'assistance technique de James H. Cummins, Ryan Pruchnic, Joseph Feduska, Rebecca C. Schugar, Haiying Pan et Tebbets Jessica. L'auteur souhaite également souligner le soutien financier à ce travail de la Muscular Dystrophy Association (MDA), les National Institutes of Health (NIH), le Department of Defense (DOD), l'Hôpital pour enfants de Pittsburgh de l'UPMC, le ministère de chirurgie orthopédique, et l'Université de Pittsburgh.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
| 100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
| Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
| Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
| Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
| Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
| Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
| Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
Referências
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