Изоляция стволовых клеток из мягких тканей опорно-двигательного
Summary
Изоляция взрослых стволовых клеток из мягких тканей опорно-двигательного аппарата на основе соблюдения скорости клеток к колбе.
Abstract
Взрослые стволовые клетки уже давно обсуждается в отношении их применения в регенеративной медицине. Взрослые стволовые клетки породили много шуму для лечения раненых и больных тканей в связи с их впечатляющими возможностями для прохождения нескольких линии дифференциации клеток и их самообновление способности. Самое главное, эти качества сделали их выгодно для использования в аутологичной трансплантации клеток терапии. Текущего протокола представит читателям изменение preplate техники, где мягких тканей опорно-двигательного аппарата, например, сухожилия и мышцы, являются: 1<sup> Й</sup> Ферментативно диссоциированы, а затем помещается в коллагене покрытием колбы со средой. Супернатант, который состоит из средних и остальные плавающие клетки, серийно передается ежедневно новые фляги. Стволовые клетки являются самыми медленными придерживаться колбы, которая обычно занимает 5-7 дней (последовательный переводы или preplates). Используя эту технику, взрослые стволовые клетки, присутствующие в этих тканях может быть легко собран через довольно неинвазивных процедур.
Protocol
Discussion
Было признано, что некоторые взрослые ткани содержат множество стволовых клеток. За последние несколько лет обучения, стволовые клетки были обнаружены в мягких тканях опорно-двигательного аппарата, в том числе скелетные мышцы и сухожилия. Этот ток детали протокола процедура, известна…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы очень благодарен г-жи Хайин Пан и г-н Ян Bellayr за техническую помощь в изолятор для текущего фильма и г-н Кайл Холден и г-н Джонатан Лукас за их помощь на слайде редактирования. Большое спасибо следующий перечень лиц, которые были связаны с развитием методов preplate изменение за последние годы: Др. Бурхан Гарайбу, Baohong Цао, Дизи Бриджит, Томас Р. Пэйн, Aiping Лу, Хайжун Пэн, Хидеки Осима, Бо Цзэн, Xiaodong Му, Kimimasa Tobita, Рон Янковский, Макато Ikezawa. Мы благодарны за техническую помощь от Джеймс Х. Cummins, Райан Pruchnic, Джозеф Feduska, Ребекка С. Schugar, Хайин Пан и Джессика Tebbets. Автор также хотел бы отметить финансовую поддержку этой работы от мышечной дистрофии ассоциации (МДА), Национальный институт здоровья (NIH), министерства обороны (DOD), детской больницы Питтсбурга о UPMC, Департамент ортопедической хирургии и Университета Питтсбурга.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
| 100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
| Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
| Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
| Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
| Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
| Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
| Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
Referências
- Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
- Qu-Petersen, Z. Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration. J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).
- Li, Y. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Differentiation of muscle-derived cells into myofibroblasts in injured skeletal muscle. Am J Pathol. 161, 895-907 (2002).
- Watt, D. J., Lambert, K., Morgan, J. E., Partridge, T. A. &. a. m. p. ;. a. m. p., Sloper, J. C. Incorporation of donor muscle precursor cells into an area of muscle regeneration in the host mouse. J Neurol Sci. 57, 319-331 (1982).
- Lu, A. Isolation of myogenic progenitor populations from Pax7-deficient skeletal muscle based on adhesion characteristics. Gene Ther. 15, 1116-1125 (2008).
- Lee, J. Y. Clonal isolation of muscle-derived cells capable of enhancing muscle regeneration and bone healing. J Cell Biol. 150, 1085-1100 (2000).
- Cao, B. The role of receptors in the maturation-dependent adenoviral transduction of myofibers. Gene Ther. 8, 627-637 (2001).
- Cao, B. Muscle stem cells differentiate into haematopoietic lineages but retain myogenic potential. Nat Cell Biol. 5, 640-646 (2003).
- Huard, J. Regenerative medicine based on muscle stem cells. J Musculoskelet Neuronal Interact. 8, (2008).
- Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells. J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).
