Isolare cellule staminali da tessuti molli muscoloscheletrici
Summary
Isolare le cellule staminali adulte da muscolo-scheletriche tessuti molli in base alla velocità rispetto della cellula di pallone.
Abstract
Le cellule staminali adulte sono stati a lungo discussi in quanto alla loro applicazione nella medicina rigenerativa. Le cellule staminali adulte hanno generato una grande eccitazione per il trattamento di tessuti danneggiati e malati a causa della loro capacità impressionante di sottoporsi a più lignaggio differenziazione delle cellule e la loro capacità di auto-rinnovamento. Ancora più importante, queste qualità ne hanno fatto vantaggioso per l'utilizzo nelle terapie di trapianto autologo di cellule. L'attuale protocollo introduce i lettori alla tecnica preplate modificato i tessuti molli del sistema muscolo-scheletrico, tendini e muscoli per esempio, sono 1<sup> St</sup> Dissociato enzimaticamente e poi messe in flaconi collagene rivestito con media. Il surnatante, che è composto da medie e le restanti celle galleggianti, è in serie trasferite al giorno per fiaschi nuovo. Le cellule staminali sono il più lento di aderire ai fiaschi che si prende di solito 5-7 giorni (trasferimenti di serie o preplates). Utilizzando questa tecnica, le cellule staminali adulte presenti in questi tessuti possono essere facilmente raccolte attraverso abbastanza procedure non invasive.
Protocol
Discussion
E 'stato riconosciuto che alcuni tessuti adulti contengono cellule staminali multiple. Nel corso degli ultimi anni di studio, le cellule staminali sono state rilevate nei tessuti molli muscoloscheletrici, tra tendine e muscolo scheletrico. Questo protocollo corrente dettagli una procedura, nota come la tecnica preplate modificata, che è stato utilizzato con successo nel nostro laboratorio di isolare le cellule staminali adulte da tendini e muscoli scheletrici. Utilizzando la tecnica sopra descritta preplate modific…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori sono molto riconoscente di Ms. Haiying Pan e Mr. Ian Bellayr per il loro aiuto tecnico su isolamento delle cellule per i film attuali e Mr. Kyle Holden e Jonathan Lucas per il loro aiuto sulla modifica di diapositive. Molte grazie per il seguente elenco di persone che sono stati coinvolti con lo sviluppo delle tecniche preplate modificato nel corso degli ultimi anni: Drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, KIMIMASA Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. Siamo grati per l'assistenza tecnica da James H. Cummins, Ryan Pruchnic, Giuseppe Feduska, Rebecca C. Schugar, Haiying Pan e Tebbets Jessica. L'autore inoltre desidera ringraziare il sostegno finanziario per questo lavoro dalla Muscular Dystrophy Association (MDA), il National Institutes of Health (NIH), il Dipartimento della Difesa (DOD), Ospedale dei Bambini di Pittsburgh di UPMC, il Dipartimento di Chirurgia ortopedica, e l'Università di Pittsburgh.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
| 100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
| Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
| Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
| Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
| Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
| Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
| Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
Referências
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