Summary

Sottocutaneo infezione di Staphylococcus aureus meticillino resistente (MRSA)

Published: February 09, 2011
doi:

Summary

Murino e morbida pelle modello di infezione dei tessuti viene utilizzato per valutare la funzione di virulenza di S. aureus meticillino-resistente (MRSA) e le risposte immunologiche ospite. Qui, abbiamo presentato un modello di infezione per via sottocutanea per la pelle e le infezioni dei tessuti molli.

Abstract

MRSA è una minaccia mondiale per la salute pubblica, e la pelle MRSA e dei tessuti molli ora rappresentano più della metà di tutti i tessuti molli negli Stati Uniti. Fra tessuti molli, miosite, pyomyositis, e fascite necrotizzante sono state aumentate le segnalazioni in associazione con MRSA derivanti dalla comunità. Per capire l'interazione tra MRSA e immunità dell'ospite che porta a più gravi infezioni, la disponibilità di modelli animali è fondamentale, permettendo lo studio dei fattori di accoglienza e batterica. Diversi modelli di infezione sono stati introdotti per valutare la patogenesi di S. aureus durante l'infezione superficiale della pelle. Qui, descriviamo un modello di infezione per via sottocutanea che esamina la pelle, sottocutaneo, muscolare e patologie.

Protocol

1. Preparazione del MRSA per infezione (due giorni prima infezione) Inoculare un'ansata di MRSA da una coltura madre ad un agar sangue (soia-agar (TSA)) piastra. Controllare il fenotipo emolisi (una zona chiara intorno ad ogni colonia) sulla piastra di agar sangue. Scegli una colonia che ha un fenotipo emolitica che è coerente con altri esperimenti. Inoculare la colonia in 3 ml di Todd Hewitt Broth (THB), con l'antibiotico appropriato quando necessario, in un mL 15 snap-…

Discussion

  1. La pelle morbida modello murino e l'infezione dei tessuti è un potente strumento per la valutazione di virulenza in vivo di un agente patogeno. La patogenicità di S. aureus in infezioni della pelle e dei tessuti molli può variare in funzione una serie di parametri. Queste includono la dimensione dell'inoculo, fase di crescita batterica, la profondità di inoculazione, all'età di topi, e lo sfondo del mouse genetico 7, 8. Nell'esaminare la funzione di virulenza utilizzando questo…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato supportato da una Burroughs-Wellcome Premio alla Carriera e da National Institutes of Health a concedere AI074832 GY Liu.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
THB   VWR 95025-314  
DPBS   Invitrogen 21-031-CV  
1 ml syringe   BD 309602  
27G1/2 needle   BD 305109  
Sheep Blood Agar (TSA)   VWR 90004-328  

Referências

  1. Ahn, J. Y., Song, J. Y., Yun, Y. S., Jeong, G., Choi, I. S. Protection of Staphylococcus aureus-infected septic mice by suppression of early acute inflammation and enhanced antimicrobial activity by ginsan. FEMS Immunol Med Microbiol. 46, 187-197 (2006).
  2. Girish, V., Vijayalakshmi, A. Affordable image analysis using NIH Image/ImageJ. Indian J Cancer. 41, 47-47 (2004).
  3. Hahn, B. L., Onunkwo, C. C., Watts, C. J., Sohnle, P. G. Systemic dissemination and cutaneous damage in a mouse model of staphylococcal skin infections. Microb Pathog. 47, 16-23 (2009).
  4. Hruz, P., Zinkernagel, A. S., Jenikova, G., Botwin, G. J., Hugot, J. P., Karin, M., Nizet, V., Eckmann, L. NOD2 contributes to cutaneous defense against Staphylococcus aureus through alpha-toxin-dependent innate immune activation. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 12873-12878 (2009).
  5. Ji, Y., Zhang, B., Van, S. F., Horn, P. W. a. r. r. e. n., Woodnutt, G., Burnham, M. K., Rosenberg, M. Identification of critical staphylococcal genes using conditional phenotypes generated by antisense RNA. Science. 293, 2266-2269 (2001).
  6. Somerville, G. A., Beres, S. B., Fitzgerald, J. R., DeLeo, F. R., Cole, R. L., Hoff, J. S., Musser, J. M. In vitro serial passage of Staphylococcus aureus: changes in physiology, virulence factor production, and agr nucleotide sequence. J Bacteriol. 184, 1430-1437 (2002).
  7. Tseng, C. W., Kyme, P., Low, J., Rocha, M. A., Alsabeh, R., Miller, L. G., Otto, M., Arditi, M., Diep, B. A., Nizet, V., Doherty, T. M., Beenhouwer, D. O., Liu, G. Y. Staphylococcus aureus Panton-Valentine leukocidin contributes to inflammation and muscle tissue injury. PLoS One. 4, e6387-e6387 (2009).
  8. von Kockritz-Blickwede, M., Rohde, M., Oehmcke, S., Miller, L. S., Cheung, A. L., Herwald, H., Foster, S., Medina, E. Immunological mechanisms underlying the genetic predisposition to severe Staphylococcus aureus infection in the mouse model. Am J Pathol. 173, 1657-1668 (2008).
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Citar este artigo
Tseng, C. W., Sanchez-Martinez, M., Arruda, A., Liu, G. Y. Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA). J. Vis. Exp. (48), e2528, doi:10.3791/2528 (2011).

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